EM-seq 基于酶學轉化法的DNA甲基化測序
- 公司名稱 深圳市易基因科技有限公司
- 品牌 其他品牌
- 型號 EM-seq
- 產(chǎn)地
- 廠商性質 生產(chǎn)廠家
- 更新時間 2025/4/17 16:53:57
- 訪問次數(shù) 31
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重亞硫酸鹽測序受限于反應條件(Bisulfite處理),導致DNA片段丟失和損壞;而EM-seq(Enzymatic methyl-sequencing)使用的是反應條件更加溫和的TET酶,投入低于WGBS的DNA起始量(低至10ng)就能夠獲得更長DNA片段,產(chǎn)出更高質量文庫,實現(xiàn)可靠的DNA甲基化檢測。
EM-seq配合Twist靶向甲基化捕獲探針,能夠捕獲和檢測基因組中鑒定(包括UCSC、Ensembl、ENCODE等數(shù)據(jù)庫)的生物學相關CpG甲基化區(qū)域,覆蓋率達84.2%,中靶率高,優(yōu)于傳統(tǒng)亞硫酸氫鹽測序法,是cfDNA液體活檢甲基化疾病標志物的篩選工具。除應用于cfDNA樣本的檢測外,也同樣適用于基因組DNA樣本,是一種高性價比且方向研究廣的甲基化檢測方法。
技術原理:
使用TET2和氧化增強劑保護經(jīng)修飾的胞嘧啶,使其免受下游的脫氨基作用。TET2以及氧化增強劑將5mC和5hmC氧化成5caC和5gmC,隨后利用脫氨酶APOBEC對胞嘧啶進行脫氨基處理 (不影響5caC和5gmC),將未甲基化C轉變?yōu)?span>U。
技術優(yōu)勢:
? 微量:樣本量要求低至10ng;
? 無損:DNA更完整,文庫偏倚減少,比對率高;
? 精準:Twist靶向甲基化捕獲探針,可檢測人基因組上398萬個CpG位點甲基化狀態(tài),準確鑒定差異甲基化區(qū)域。
應用場景:
? 甲基化生物標志物研究
? cfDNA甲基化研究
? 隊列樣本的甲基化檢測
? 發(fā)育與分化研究
? 疾病的發(fā)生發(fā)展研究
? 腫瘤早篩與溯源
技術路線:
DNA片段化→文庫制備→酶法甲基化轉化→甲基化組富集→上機測序→生信分析
分析內容:
EM-seq | 分析內容 | |
1. 基因組比對統(tǒng)計 | ||
2. 整體甲基化水平評估 l CpG甲基化水平分布 l CpG甲基化覆蓋度 | ||
3. 甲基化位點統(tǒng)計及樣本間比較 l 甲基化水平相關性分析 l 甲基化水平主成分分析(PCA) l 甲基化水平聚類分析 | ||
4. 差異甲基化位點分析 l 差異甲基化位點注釋 l 差異甲基化位點可視化 l 差異甲基化位點富集分析 | ||
5. 差異甲基化區(qū)域分析 l 差異甲基化位點注釋 l 差異甲基化位點可視化 l 差異甲基化位點富集分析 | ||
個性化分析、多組學關聯(lián)分析請聯(lián)系對接銷售或技術支持 |
送樣要求:
送樣要求 | 項目周期 |
? 樣本類型:血漿,尿液,腦脊液等cfDNA提取樣品 ? 樣本收集:采用含固定劑的專用 cfDNA收集管(10ml),以穩(wěn)定cfDNA,4℃低溫保存,48h內分離血漿,-80℃長期儲存。 ? 樣本總量:100-500ul血漿或1ng cfDNA ? 推薦數(shù)據(jù)量: 20G raw data | 20個樣本以下標準流程的運轉周期約為36個工作日。遇到樣本數(shù)目較多時,項目周期需要與技術支持人員確定。 |
經(jīng)典案例
cfDNA多模式表觀遺傳測序分析(MESA)用于腫瘤檢測
Li Y, et al. Multimodal epigenetic sequencing analysis (MESA) of cell-free DNA for non-invasive colorectal cancer detection. Genome Med.
血液中cfDNA的多模式特征可應用于癌癥液體活檢,但在技術上仍然具有挑戰(zhàn)性且成本高昂。此研究開發(fā)了多模式表觀遺傳測序分析(MESA),利用EM-seq或TAPS就可以靈活靈敏地捕獲、整合cfDNA的多模型表觀遺傳信息,包括cfDNA甲基化、核小體占位、核小體模糊性等。對來自2個結腸癌獨立臨床隊列的462個cfDNA樣本,采用靶向EM-seq進行測序,再結合MESA分析的新模式,與傳統(tǒng)模式在癌癥檢測中具有高度互補性。與單模態(tài)模型相比,MESA分析顯著提高了結腸癌、肝癌和胰腺癌的檢測準確性,從cfDNA中捕獲了更多高度互補的表觀遺傳信息,突出了使用多模式表觀遺傳特征進行癌癥檢測的重要性和臨床潛力。
cfDNA靶向EM-seq與MESA分析結果
(A)cfDNA片段的長度分布。167bp處的峰值(黑色虛線)與核小體一致。(B) 二核苷酸片段橫跨于147 bp片段和側翼區(qū)。(C)健康人樣本cfDNA的靶向EM-seq信號。(D)核小體分布于靶基因TSS和PAS(E)核小體占用情況的聚合系。相對核小體占有率表示核小體占據(jù)率由繪制區(qū)域的平均值標準化。以上結果基于隊列1的60名健康對照的靶向EM-seq數(shù)據(jù)。
參考文獻:
① Vaisvila R,et al.Enzymatic methyl sequencing detects DNA methylation at single-base resolution from picograms of DNA. Genome Res. 2021 Jul;31(7):1280-1289.
② Li Y, et al.Multimodal epigenetic sequencing analysis (MESA) of cell-free DNA for non-invasive colorectal cancer detection. Genome Med. 2024 Jan 16;16(1):9.