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EM-seq 基于酶學轉化法的DNA甲基化測序

具體成交價以合同協(xié)議為準
  • 公司名稱 深圳市易基因科技有限公司
  • 品牌 其他品牌
  • 型號 EM-seq
  • 產(chǎn)地
  • 廠商性質 生產(chǎn)廠家
  • 更新時間 2025/4/17 16:53:57
  • 訪問次數(shù) 31

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深圳市易基因科技有限公司(簡稱易基因,E-GENE Co.,Ltd.)專注表觀組學十余年,以“表觀遺傳學科學研究與臨床應用”為愿景,依托高通量測序技術和云數(shù)據(jù)分析平臺。為醫(yī)療機構、科研機構、企事業(yè)單位等提供以表觀遺傳學技術為核心的多組學科研服務及解決方案,全面覆蓋針對生命科學基礎研究、醫(yī)學及臨床應用研究等內容。


易基因專注表觀組學十余年,多組學科研服務。技術團隊在國際上LHC-BS、HMST-seq、ChIP-BS、cfDNA-TBS等甲基化、羥甲基化技術流程,研發(fā)建立簡化基因組甲基化dRRBS、cfDNA-RBS,單細胞/微量DNA全基因組甲基化及簡化高通量甲基化測序技術,RNA甲基化測序等技術和方法,并建立易基因科技全自動化彈性資源生信分析系統(tǒng)。在Nature、Lancet、Science、Nat Commun、 Cell Res、Genome Biol、Blood、PloS Genet、Epigenetics、Epigenomics 、Clin Epigenetic等期刊發(fā)表論文100余篇,申請發(fā)明12項、軟件著作權27項。



T:0755 - 28317900 

V:181 2416 7839

生命科學及生物技術研發(fā)和推廣,生物技術服務

重亞硫酸鹽測序受限于反應條件(Bisulfite處理),導致DNA片段丟失和損壞;而EM-seqEnzymatic methyl-sequencing)使用的是反應條件更加溫和的TET酶,投入低于WGBSDNA起始量(低至10ng)就能夠獲得更長DNA片段,產(chǎn)出更高質量文庫,實現(xiàn)可靠的DNA甲基化檢測。

 

EM-seq配合Twist靶向甲基化捕獲探針,能夠捕獲和檢測基因組中鑒定(包括UCSC、Ensembl、ENCODE等數(shù)據(jù)庫)的生物學相關CpG甲基化區(qū)域,覆蓋率達84.2%,中靶率高,優(yōu)于傳統(tǒng)亞硫酸氫鹽測序法,是cfDNA液體活檢甲基化疾病標志物的篩選工具。除應用于cfDNA樣本的檢測外,也同樣適用于基因組DNA樣本,是一種高性價比且方向研究廣的甲基化檢測方法。

 

技術原理:

使用TET2和氧化增強劑保護經(jīng)修飾的胞嘧啶,使其免受下游的脫氨基作用。TET2以及氧化增強劑將5mC5hmC氧化成5caC5gmC,隨后利用脫氨酶APOBEC對胞嘧啶進行脫氨基處理 (不影響5caC5gmC),將未甲基化C轉變?yōu)?span>U。

基于酶學轉化法的DNA甲基化測序


技術優(yōu)勢:

?  微量:樣本量要求低至10ng;

?  無損:DNA更完整,文庫偏倚減少,比對率高;

?  精準:Twist靶向甲基化捕獲探針,可檢測人基因組上398萬個CpG位點甲基化狀態(tài),準確鑒定差異甲基化區(qū)域。

 

應用場景:

?  甲基化生物標志物研究

?  cfDNA甲基化研究

?  隊列樣本的甲基化檢測

?  發(fā)育與分化研究

?  疾病的發(fā)生發(fā)展研究

?  腫瘤早篩與溯源

 

技術路線:

DNA片段化文庫制備酶法甲基化轉化甲基化組富集上機測序生信分析

 

分析內容:

 

 

 

 

 

 

 

 

EM-seq

分析內容

1.  基因組比對統(tǒng)計

2.  整體甲基化水平評估

l  CpG甲基化水平分布

l  CpG甲基化覆蓋度

3.  甲基化位點統(tǒng)計及樣本間比較

l  甲基化水平相關性分析

l  甲基化水平主成分分析(PCA)

l  甲基化水平聚類分析

4.  差異甲基化位點分析

l  差異甲基化位點注釋

l  差異甲基化位點可視化

l  差異甲基化位點富集分析

5.  差異甲基化區(qū)域分析

l  差異甲基化位點注釋

l  差異甲基化位點可視化

l  差異甲基化位點富集分析

個性化分析、多組學關聯(lián)分析請聯(lián)系對接銷售或技術支持

















送樣要求:

送樣要求

項目周期

?  樣本類型:血漿,尿液,腦脊液等cfDNA提取樣品

?  樣本收集:采用含固定劑的專用 cfDNA收集管(10ml),以穩(wěn)定cfDNA,4℃低溫保存,48h內分離血漿,-80℃長期儲存。

?  樣本總量:100-500ul血漿或1ng cfDNA

?  推薦數(shù)據(jù)量: 20G raw data

20個樣本以下標準流程的運轉周期約為36個工作日。遇到樣本數(shù)目較多時,項目周期需要與技術支持人員確定。








經(jīng)典案例

cfDNA多模式表觀遺傳測序分析(MESA)用于腫瘤檢測

Li Y, et al. Multimodal epigenetic sequencing analysis (MESA) of cell-free DNA for non-invasive colorectal cancer detection. Genome Med.

血液中cfDNA的多模式特征可應用于癌癥液體活檢,但在技術上仍然具有挑戰(zhàn)性且成本高昂。此研究開發(fā)了多模式表觀遺傳測序分析(MESA),利用EM-seqTAPS就可以靈活靈敏地捕獲、整合cfDNA的多模型表觀遺傳信息,包括cfDNA甲基化、核小體占位、核小體模糊性等。對來自2個結腸癌獨立臨床隊列的462cfDNA樣本,采用靶向EM-seq進行測序,再結合MESA分析的新模式,與傳統(tǒng)模式在癌癥檢測中具有高度互補性。與單模態(tài)模型相比,MESA分析顯著提高了結腸癌、肝癌和胰腺癌的檢測準確性,從cfDNA中捕獲了更多高度互補的表觀遺傳信息,突出了使用多模式表觀遺傳特征進行癌癥檢測的重要性和臨床潛力。

基于酶學轉化法的DNA甲基化測序


cfDNA靶向EM-seqMESA分析結果

AcfDNA片段的長度分布。167bp處的峰值(黑色虛線)與核小體一致。(B) 二核苷酸片段橫跨于147 bp片段和側翼區(qū)。(C)健康人樣本cfDNA的靶向EM-seq信號。(D)核小體分布于靶基因TSSPASE)核小體占用情況的聚合系。相對核小體占有率表示核小體占據(jù)率由繪制區(qū)域的平均值標準化。以上結果基于隊列160名健康對照的靶向EM-seq數(shù)據(jù)。

 

參考文獻:

   Vaisvila R,et al.Enzymatic methyl sequencing detects DNA methylation at single-base resolution from picograms of DNA. Genome Res. 2021 Jul;31(7):1280-1289.

  Li Y, et al.Multimodal epigenetic sequencing analysis (MESA) of cell-free DNA for non-invasive colorectal cancer detection. Genome Med. 2024 Jan 16;16(1):9.



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