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β-Actin內(nèi)參蛋白原理和應(yīng)用

β 肌動(dòng)蛋白抗體提供了一種特異性的工具，用于研究 β 肌動(dòng)蛋白的胞內(nèi)分布、細(xì)胞骨架的靜態(tài)和動(dòng)態(tài)特性。由于 β 肌動(dòng)蛋白在所有真核細(xì)胞中普遍都有表達(dá)，因此其經(jīng)常被用作上樣對照。β 肌動(dòng)蛋白是哺乳動(dòng)物中已鑒別出的六種肌動(dòng)蛋白亞型之一。肌動(dòng)蛋白是細(xì)胞骨架的主要組分， β 肌動(dòng)蛋白主要在非肌細(xì)胞中表達(dá)并控制細(xì)胞的結(jié)構(gòu)和運(yùn)動(dòng)。優(yōu)質(zhì) Invitrogen β 肌動(dòng)蛋白抗體可滿足多種研究需求。為使您更方便，我們還提供熒光和酶偶聯(lián)版本。

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β-Actin內(nèi)參蛋白的應(yīng)用

使用 70% 融合對數(shù)期 NIH-3T3 細(xì)胞進(jìn)行 β 肌動(dòng)蛋白的免疫熒光分析。將細(xì)胞用 4％ 多聚甲醛固定 10 分鐘，用 0.1％ Triton X-100 透化 10 分鐘，并在室溫下用 1% BSA 封閉 1 小時(shí)。使用 0.1% BSA 中 2µg/mL 的β 肌動(dòng)蛋白兔多克隆抗體（貨號 PA1-46296）標(biāo)記細(xì)胞并在室溫下孵育 3 小時(shí)，然后用山羊抗兔 IgG (H+L) Superclonal 二抗、Alexa Fluor® 488 偶聯(lián)物（貨號 A27034）以 1:2000 稀釋比在室溫下標(biāo)記 45 分鐘（圖 A：綠色）。細(xì)胞核（圖 b：藍(lán)色）用 SlowFade Gold 抗淬滅封片劑 ，帶DAPI（貨號 S36938）染色。F 肌動(dòng)蛋白（圖 c：紅色）采用羅丹明鬼筆環(huán)肽（貨號 R415，1:300）進(jìn)行染色。圖 d 代表合并圖像，表示細(xì)胞質(zhì)的定位情況。圖 e 表示無一抗對照。這些圖像是在放大60倍的情況下采集的。

與同型對照（藍(lán)色）相比，A431 細(xì)胞（綠色）中 β 肌動(dòng)蛋白的流式細(xì)胞術(shù)分析。收獲細(xì)胞并用 PBS 洗滌。在室溫下，用 2% BSA-PBS 溶液封閉細(xì)胞 30 分鐘，并與 β 肌動(dòng)蛋白上樣對照單克隆抗體（BA3R），生物素（貨號號 MA5-15739-BTIN）進(jìn)行孵育。然后將細(xì)胞在室溫下用與 DyLight 488 染料偶聯(lián)的二抗避光孵育 40 分鐘，并重懸于 PBS 中以進(jìn)行 FACS 分析。

細(xì)胞：A431

濃度：2 ug/ 檢測（100 uL）

理論位置：細(xì)胞質(zhì)

通過將各種細(xì)胞裂解物上樣到 4-20% Tris-HCl 聚丙烯酰胺凝膠上，對 β 肌動(dòng)蛋白進(jìn)行蛋白質(zhì)印跡分析。將蛋白轉(zhuǎn)印到低熒光 PVDF 膜上，并用與 Alexa Fluor 488 染料（貨號 MA1-140-A488）偶聯(lián)的 β 肌動(dòng)蛋白單克隆抗體孵育。

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