如何提高無(wú)標(biāo)記定量蛋白質(zhì)組學(xué)的數(shù)據(jù)質(zhì)量與重復(fù)性？檢測(cè)技術(shù)服務(wù)詳情介紹

無(wú)標(biāo)記定量dànbáizhì組學(xué)（Label-free Quantitative Proteomics, LFQ）因其樣本準(zhǔn)備簡(jiǎn)便、適用范圍廣、成本相對(duì)較低，成為當(dāng)前生物醫(yī)學(xué)研究中的主流定量策略。然而，LFQ數(shù)據(jù)質(zhì)量和重復(fù)性問(wèn)題始終是制約其應(yīng)用深度和可靠性的關(guān)鍵因素。在本文中，我們將系統(tǒng)解析影響LFQ數(shù)據(jù)表現(xiàn)的主要因素，并分享在實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)、樣本制備、質(zhì)譜采集與數(shù)據(jù)分析各環(huán)節(jié)優(yōu)化的方法，助力科學(xué)家獲得更高質(zhì)量、更具可重復(fù)性的dànbáizhì組數(shù)據(jù)。

一、影響無(wú)標(biāo)記定量dànbáizhì組學(xué)LFQ數(shù)據(jù)質(zhì)量與重復(fù)性的主要因素

1、樣本制備的一致性

樣本制備是dànbáizhì組學(xué)實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)。細(xì)微的差異，如裂解條件、蛋白定量準(zhǔn)確性、酶解效率等，均可引起系統(tǒng)誤差，zuì終影響定量結(jié)果。

常見(jiàn)問(wèn)題包括：

（1）細(xì)胞/組織裂解不充分

（2）總蛋白量估算不準(zhǔn)

（3）yídànbáiméi酶解不wánquán或過(guò)度

（4）污染（如角蛋白）引入

2、質(zhì)譜儀穩(wěn)定性與參數(shù)設(shè)置

無(wú)標(biāo)記定量dànbáizhì組學(xué)極度依賴質(zhì)譜儀在長(zhǎng)時(shí)間采樣過(guò)程中的性能一致性。任何漂移、污染或電離效率變化，都會(huì)直接影響定量精度。

關(guān)鍵因素包括：

（1）離子源污染、質(zhì)譜腔體污染

（2）保留時(shí)間漂移（尤其在長(zhǎng)梯度液相分離中）

（3）分辨率與掃描速度設(shè)置不當(dāng)

（4）數(shù)據(jù)依賴型采集（DDA）隨機(jī)性問(wèn)題

3、數(shù)據(jù)分析流程標(biāo)準(zhǔn)化

數(shù)據(jù)處理流程的不一致（如搜索參數(shù)差異、峰面積提取算法不同、歸一化策略不統(tǒng)一）也是導(dǎo)致LFQ數(shù)據(jù)可重復(fù)性差的重要原因。

二、提高LFQ數(shù)據(jù)質(zhì)量與重復(fù)性的實(shí)用策略

1、嚴(yán)格標(biāo)準(zhǔn)化樣本制備流程

（1）統(tǒng)一裂解緩沖液和處理時(shí)間：如RIPA或SDS裂解，并保持冰浴條件防止蛋白降解。

（2）jīngquè蛋白定量：建議使用BCA法，并在同一批次完成。

（3）控制酶解條件：標(biāo)準(zhǔn)化蛋白酶與底物的比例（如1:50），溫度和時(shí)間（如37°C，16小時(shí)）。

（4）加強(qiáng)去除污染控制：實(shí)驗(yàn)過(guò)程中佩戴手套、使用低蛋白結(jié)合耗材。

在百泰派克生物科技，我們?cè)跇颖局苽洵h(huán)節(jié)采用全流程SOP標(biāo)準(zhǔn)，zuì大程度減少人為誤差，確保dànbáizhì前處理的一致性和高效性。

2、優(yōu)化質(zhì)譜儀維護(hù)與采集參數(shù)

（1）定期質(zhì)譜維護(hù)與校準(zhǔn)：保持離子源清潔，定期更換質(zhì)譜腔室氣體過(guò)濾器。

（2）穩(wěn)定液相系統(tǒng)：選擇高穩(wěn)定性的nanoLC系統(tǒng)，并在梯度前后設(shè)清洗步驟，避免柱效下降。

（3）優(yōu)化DDA采集策略：適度控制Top N選擇數(shù)，防止高豐度肽段過(guò)度重復(fù)采集。

（4）采用內(nèi)標(biāo)監(jiān)測(cè)：引入外源標(biāo)準(zhǔn)肽（如iRT標(biāo)準(zhǔn)肽）實(shí)時(shí)監(jiān)控系統(tǒng)性能。

百泰派克生物科技配備Thermo Orbitrap Exploris 480與自建質(zhì)控體系，每次樣本上機(jī)前均進(jìn)行系統(tǒng)預(yù)檢測(cè)，確保每一次質(zhì)譜采集的穩(wěn)定可靠。

3、規(guī)范化數(shù)據(jù)處理與質(zhì)控流程

（1）統(tǒng)一數(shù)據(jù)庫(kù)搜索參數(shù)：固定肽段質(zhì)量誤差范圍、酶切位點(diǎn)設(shè)定、修飾類型等。

（2）采用優(yōu)良定量算法：如MaxQuant LFQ模塊，結(jié)合匹配間隙（Match Between Runs, MBR）功能提升肽段識(shí)別率。

（3）多層次質(zhì)控評(píng)估：

* PCA分析評(píng)估樣本聚類一致性

• 變異系數(shù)（CV）計(jì)算篩選穩(wěn)定蛋白

• 定量結(jié)果與生物學(xué)背景邏輯交叉驗(yàn)證

在百泰派克生物科技，所有dànbáizhì組數(shù)據(jù)處理均由經(jīng)驗(yàn)豐富的數(shù)據(jù)分析師執(zhí)行，并結(jié)合自主開(kāi)發(fā)的多維度質(zhì)控系統(tǒng)，確保輸出結(jié)果的科學(xué)性與可重復(fù)性。無(wú)標(biāo)記定量dànbáizhì組學(xué)以其dútè優(yōu)勢(shì)，已成為揭示疾病機(jī)制、探索生物標(biāo)志物的重要工具。通過(guò)在樣本處理、質(zhì)譜采集與數(shù)據(jù)分析各環(huán)節(jié)的精細(xì)化控制，可以顯著提升LFQ數(shù)據(jù)的質(zhì)量與重復(fù)性，為科學(xué)研究提供更加堅(jiān)實(shí)的數(shù)據(jù)支撐。百泰派克生物科技專注于高質(zhì)量dànbáizhì組學(xué)服務(wù)，依托國(guó)際yìliú質(zhì)譜平臺(tái)與嚴(yán)格的質(zhì)控體系，為您的科研項(xiàng)目提供zhídexìnlài的數(shù)據(jù)保障。歡迎聯(lián)系我們，共同推進(jìn)科學(xué)探索的每一步！

百泰派克生物科技特色項(xiàng)目

一、蛋白測(cè)序

百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos質(zhì)譜儀及島津公司埃德曼降解測(cè)序系統(tǒng)對(duì)dànbáizhì序列進(jìn)行分析，提供基于質(zhì)譜的蛋白測(cè)序分析服務(wù)，包括對(duì)dànbáizhì的氨基酸組成分析，Nduāncèxù，Cduāncèxù和全序列分析，以及基于埃德曼降解的dànbáizhìN端序列分析服務(wù)。對(duì)于未知理論序列的dànbáizhì，提供基于從頭測(cè)序法的dànbáizhì從頭測(cè)序服務(wù)，對(duì)蛋白序列進(jìn)行分析。

※服務(wù)優(yōu)勢(shì)：

1.采用目前世界上優(yōu)良的質(zhì)譜儀器 Obitrap Fusion Lumos;

2.可實(shí)現(xiàn)對(duì)所測(cè)定靶蛋白序列 100% 的覆蓋;

3.可測(cè)定蛋白N端多達(dá) 70個(gè)氨基酸序列;

4.可測(cè)定多種形式的樣品: 蛋白溶液、PVDF 蛋白條帶;

5.樣品用量低: 蛋白樣品僅需 5-10ug，即可完成檢測(cè);

6.測(cè)序不受N端封閉，PEC和和糖基化等N端修飾的影響。

二、dànbáizhì組學(xué)

百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos質(zhì)譜平臺(tái)結(jié)合Nano-LC，提供定量dànbáizhì組學(xué)、靶向dànbáizhì組學(xué)、多肽組學(xué)、翻譯后修飾蛋白組學(xué)等多種dànbáizhì組學(xué)分析服務(wù)。此外，百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4Ddànbáizhì組學(xué)服務(wù)，助力微量樣本蛋白組學(xué)、大樣本群醫(yī)學(xué)及高通量修飾組學(xué)等研究工作。

※服務(wù)優(yōu)勢(shì)：

1 .高通量定量蛋白分析:多對(duì)照組大規(guī)模實(shí)驗(yàn)分析，發(fā)現(xiàn)新的生物標(biāo)記物;

2.體內(nèi)體外多種dànbáizhì標(biāo)記方法，適用于分析組織、細(xì)胞、血液等多種樣品;

3.質(zhì)譜分析靈敏度高，實(shí)驗(yàn)結(jié)果重復(fù)度高;

4.可檢測(cè)較低豐度蛋白，線性范圍廣;

5.zhuānyè生物信息學(xué)分析，分析更系統(tǒng)準(zhǔn)確。

三、單細(xì)胞質(zhì)譜流式技術(shù)分析

百泰派克生物科技采用Fluidigm質(zhì)譜流式系統(tǒng)進(jìn)行單細(xì)胞質(zhì)譜流式技術(shù)分析，采用金屬元素標(biāo)記物（通常是金屬元素標(biāo)記的特異抗體）標(biāo)記細(xì)胞表面和內(nèi)部的分子，然后用流式細(xì)胞原理分離單個(gè)細(xì)胞，再用電感耦合等離子體質(zhì)譜（ICP-MS）分析單個(gè)細(xì)胞的原子質(zhì)量譜，zuì后將原子質(zhì)量譜數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換為細(xì)胞表面和內(nèi)部的信號(hào)分子表達(dá)量。

※服務(wù)優(yōu)勢(shì)：

1.技術(shù)優(yōu)良，*技術(shù)空白

采用金屬標(biāo)記抗體技術(shù)，避免了傳統(tǒng)流式熒光通道少且易相互影響的問(wèn)題。可在單細(xì)胞層面上對(duì)多種指標(biāo)同時(shí)進(jìn)行表征，百泰派克生物科技可做到同時(shí)檢測(cè)51個(gè)目標(biāo)蛋白。

2.分析數(shù)量大，成本較低

單細(xì)胞RNAseq受成本等因素限制，所有樣本細(xì)胞匯總的分析數(shù)目一般在2x10^4個(gè)左右，而流式質(zhì)譜技術(shù)一次（單樣本）就可分析至少10^5的細(xì)胞，實(shí)現(xiàn)了數(shù)量級(jí)的提高，且成本不高于單細(xì)胞RNAseq。

3.應(yīng)用前景大

①流式質(zhì)譜結(jié)果可以給出細(xì)胞亞群的變化，在臨床診斷、疾病機(jī)制研究等方面具有極大的研究前景；

②將金屬標(biāo)簽技術(shù)與其他技術(shù)結(jié)合會(huì)有新應(yīng)用方向。除常規(guī)蛋白外，質(zhì)譜流式細(xì)胞技術(shù)還可用于蛋白翻譯后修飾；

③可檢測(cè)細(xì)胞存活率、細(xì)胞大小、mRNA轉(zhuǎn)錄子表達(dá)量、DNA合成速率以及蛋白酶活性等。

四、基于高精度質(zhì)譜的免疫多肽組學(xué)分析及新抗原發(fā)現(xiàn)

百泰派克生物科技的基于高精度質(zhì)譜的免疫多肽組學(xué)分析及新抗原發(fā)現(xiàn)一站式解決方案包括我們專有的、高度敏感的免疫肽富集和鑒定方案。我們能夠幫助您實(shí)現(xiàn)10,000個(gè)以上I型多肽和10,000個(gè)以上II型多肽的鑒定和識(shí)別。通過(guò)我們優(yōu)化的高通量免疫多肽組學(xué)分析平臺(tái)進(jìn)行免疫肽組學(xué)分析，可從zuì小的樣品材料中進(jìn)行可重復(fù)的識(shí)別和定量。該服務(wù)可以應(yīng)用于大規(guī)模的研究，旨在助力科研工作者尋找癌癥、免疫疾病及傳染病的解決方案，深入挖掘未知的靶標(biāo)。

五、生物藥物表征

百泰派克基于高分辨率質(zhì)譜技術(shù)，MALDI TOF，高效色譜分離技術(shù)，提供一系列完善的生物藥物分析方案，從dànbáizhì、多肽、抗體、疫苗等生物制品的氨基酸組成和一級(jí)結(jié)構(gòu)分析，到產(chǎn)品變異性和純度分析。旨在提供優(yōu)質(zhì)生物藥物分析服務(wù)，幫助生物醫(yī)藥生產(chǎn)商提高生物藥物品質(zhì)。

百泰派克生物科技七大檢測(cè)平臺(tái)

百泰派克生物科技-生物制品表征，生物質(zhì)譜多組學(xué)優(yōu)質(zhì)服務(wù)商

北京百泰派克生物科技有限公司致力于為生物/制藥和醫(yī)療器械行業(yè)提供質(zhì)量控制檢測(cè)和項(xiàng)目驗(yàn)證等zhuānyè服務(wù)。公司實(shí)驗(yàn)室遵循NMPA、ICH、FDA和EMA等的法規(guī)和指導(dǎo)原則，通過(guò)CNAS/ISO9001雙重質(zhì)量體系認(rèn)證，建立了完備的質(zhì)量體系，數(shù)據(jù)冷熱/異地備份，設(shè)備定期計(jì)量/期間核查，軟件審計(jì)追蹤，為客戶提供一體化解決方案和技術(shù)服務(wù)，支持新藥研發(fā)、藥物申報(bào)注冊(cè)和生產(chǎn)放行。

1.公司采用ISO9001質(zhì)量控制體系，zhuānyè提供以質(zhì)譜為基礎(chǔ)的CRO檢測(cè)分析服務(wù)；

2.獲國(guó)家CNAS實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可，為客戶提供符合全球藥政法規(guī)的藥物質(zhì)量研究服務(wù)；

3.業(yè)務(wù)范圍覆蓋dànbáizhì組學(xué)、多肽組學(xué)、代謝組學(xué)、生物藥物表征、單細(xì)胞分析、單細(xì)胞質(zhì)譜流式、生信云分析以及多組學(xué)生物質(zhì)譜整合分析等；

4.七大質(zhì)量控制檢測(cè)平臺(tái)，滿足您一站式服務(wù)需求；

5.服務(wù)3000+企業(yè)，10000+客戶的選擇；

6.致力于為您提供優(yōu)質(zhì)的生物質(zhì)譜分析服務(wù)!

如何提高無(wú)標(biāo)記定量蛋白質(zhì)組學(xué)的數(shù)據(jù)質(zhì)量與重復(fù)性？檢測(cè)技術(shù)服務(wù)詳情介紹