NobleRyder C9268 DH10BAC 感受態(tài)細胞

產品貨號：C9268

產品名稱：DH10BAC 感受態(tài)細胞

產品規(guī)格：20*100ul/10*100ul

DH10BAC 感受態(tài)細胞 載體構建

產品簡介：

儲存條件：-70℃

具體產品的參數(shù)以收到產品說明書的參數(shù)為準

NobleRyder C9268 DH10BAC 感受態(tài)細胞適用于昆蟲桿狀病毒Bac-to-Bac系統(tǒng)中同源重組的菌株，用于產生重組Bacmid。DH10Bac細胞包含親本BacmidbMON14272和輔助質粒pMON7124 。親本Bacmid 包含一個mini-F 復制子、卡na霉素抗性基因、attTn7位點和lacZα-互補因子。輔助質粒包含四huan素抗性和tnsABCD 區(qū)域，該區(qū)域提供了mini-Tn7從供體質粒插入親本Bacmid 靶位點所需要的轉座蛋白。供體如 pFastBac 系列質粒（pFastBac1，pFastBacDual等）含有Tn7R和Tn7L同源重組臂，Tn7R和Tn7L之間包含慶da霉素抗性基因、昆蟲病毒多角體基因啟動子、多克隆位點和SV40 病毒的 PolyA 加尾信號。當含有靶基因 pFastBac 的重組質粒轉化到 DH10Bac 細胞后，發(fā)生重組后就可產生重組Bacmid，提取純化重組Bacmid轉染昆蟲細胞Sf9或Sf21就可以包裝產生昆蟲病毒。此外，DH10Bac細胞中的Theφ80dlacZΔM15基因的產物可以實現(xiàn)β-半乳糖苷酶的α-互補現(xiàn)象，用于重組Bacmid的藍白斑篩選。大腸桿菌DH10Bac感受態(tài)細胞是經(jīng)特殊工藝制備，使用pUC19 質粒檢測，轉化效率可達107cfu/μg。

基因型：

F-mcrAΔ(mrr-hsdRMS-mcrBC)φ80lacZΔM15ΔlacX74recA1endA1araD139Δ(ara,leu)7697galUgalKλ-rpsLnupG/pMON14272/pMON7124

操作方法：（以下操作均按無菌條件的標準進行）

1. 取感受態(tài)細胞置于冰浴中，如需分裝可將剛融化細胞懸液分裝到無菌預冷的離心管中，置于冰浴中。

2. 向感受態(tài)細胞懸液中加入1-10ng重組質粒，輕輕旋轉離心管以混勻內容物，在冰浴中靜置30分鐘。

3. 將離心管置于42℃水浴中放置90秒鐘，然后快速將管轉移到冰浴中，使細胞冷卻2分鐘，該過程不要搖動離心管。

4. 向每個離心管中加入900μL無菌的SOC（不含抗生素），混勻后置于37℃200rpm，搖床振蕩培養(yǎng)4小時。

5. 用SOC培養(yǎng)基進行10倍梯度稀釋，如分成3個稀釋梯度 10-1，10-2，10-3。

6. 取100μL 的各個梯度的培養(yǎng)物用于涂布。等平板中的液體wan全吸收后，倒置平板，37℃培養(yǎng) 24-48小時。

7. 保留剩余的菌液于4℃冰箱中，視平板上菌落生長情況決定去留。

注意事項：

1．感受態(tài)細胞應保存在-70℃，不可反復凍融，否則其轉化效率將會降低。

2．實驗過程中應嚴格無菌操作，防止其它DNA或雜菌的污染，避免為以后的篩選、鑒定帶來影響。

3．轉化時，轉化效率與外源DNA的濃度在一定范圍內成正比，但當加入的外源DNA量過多或體積過大反而會降低轉化效率。轉化時DNA體積要小于感受態(tài)細胞體積的十分之一。

4．轉化率的計算：轉化率＝產生菌落的總數(shù)/鋪板DNA總量。

5．為防止轉化實驗不成功，可以保留部分連接產物，以重新轉化，將損失降到最di。

DH10BAC 感受態(tài)細胞 載體構建 

產品訂購信息：

C9268 DH10BAC 感受態(tài)細胞  20*100ul/10*100ul