NobleRyder C9238 XL10-Gold 感受態(tài)細(xì)胞

產(chǎn)品貨號：C9238

產(chǎn)品名稱：XL10-Gold 感受態(tài)細(xì)胞

產(chǎn)品規(guī)格：20*100ul

XL10-Gold 感受態(tài)細(xì)胞 載體構(gòu)建

產(chǎn)品簡介：

儲存條件：-70℃

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說明書的參數(shù)為準(zhǔn)

NobleRyder C9238 XL10-Gold 感受態(tài)細(xì)胞

是采用大腸桿菌XL10菌株經(jīng)特殊工藝處理得到的感受態(tài)細(xì)胞，可用于DNA的化學(xué)轉(zhuǎn)化。適用于高效的DNA克隆和質(zhì)粒擴(kuò)增。能保證高拷貝質(zhì)粒的穩(wěn)定復(fù)制。適合非甲基化DNA的轉(zhuǎn)化。使用pUC19質(zhì)粒檢測，轉(zhuǎn)化效率可達(dá)108cfu/µg。

基因型:

TetrΔ(mcrA)183Δ(mcrCB-hsdSMR-mrr)173endA1supE44thi-1recA1gyrA96relA1lacHte[F′proABlacIqZΔM15Tn1 0(Tetr) AmyCamr]

抗生素耐藥性：細(xì)胞具有四huan素和氯霉su抗性。

操作方法：（以下操作均按無菌條件的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行）

1. 取感受態(tài)細(xì)胞置于冰浴中。

2. 向感受態(tài)細(xì)胞懸液中加入目的DNA(100μl 的感受態(tài)細(xì)胞能夠被1ng超螺旋質(zhì)粒DNA所飽和），輕輕旋轉(zhuǎn)離心管以混勻內(nèi)容物，在冰浴中靜置30分鐘。

3. 將離心管置于42℃水浴中放置60秒鐘，然后快速將管轉(zhuǎn)移到冰浴中，使細(xì)胞冷卻2分鐘，該過程不要搖動離心管。

4. 向每個離心管中加入500μL無菌的SOC或LB培養(yǎng)基（不含抗生素），混勻后置于37℃150rpm，搖床振蕩培養(yǎng)60分鐘，目的是使質(zhì)粒上相關(guān)的抗性標(biāo)記基因表達(dá)，使菌體復(fù)蘇。

5. 無菌條件下，取適量菌液加到含相應(yīng)抗生素的LB固體培養(yǎng)基平板上，用無菌的細(xì)菌涂布器或玻璃珠將細(xì)胞均勻涂開。等平板中的液體wan全吸收后，倒置平板，37℃培養(yǎng) 12-16 小時(shí)。

6. 保留剩余的菌液于4℃冰箱中，視平板上菌落生長情況決定去留。

注意事項(xiàng)：

1．感受態(tài)細(xì)胞應(yīng)保存在-70℃，不可反復(fù)凍融，否則其轉(zhuǎn)化效率將會降低。

2．實(shí)驗(yàn)過程中應(yīng)嚴(yán)格無菌操作，防止其它DNA或雜菌的污染，避免為以后的篩選、鑒定帶來影響。

3．轉(zhuǎn)化時(shí)，轉(zhuǎn)化效率與外源DNA的濃度在一定范圍內(nèi)成正比，但當(dāng)加入的外源DNA量過多或體積過大反而會降低轉(zhuǎn)化效率。轉(zhuǎn)化時(shí)DNA體積要小于感受態(tài)細(xì)胞體積的十分之一。

4．轉(zhuǎn)化率的計(jì)算：轉(zhuǎn)化率＝產(chǎn)生菌落的總數(shù)/鋪板DNA總量。

5．為防止轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)不成功，可以保留部分連接產(chǎn)物，以重新轉(zhuǎn)化，將損失降到最di。

XL10-Gold 感受態(tài)細(xì)胞 載體構(gòu)建 

產(chǎn)品訂購信息：

C9238  XL10-Gold 感受態(tài)細(xì)胞  20*100ul