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蛋白質測序的原理和步驟檢測技術服務詳情介紹
dànbáizhì作為生命活動的直接參與者,其種類、豐度和翻譯后修飾狀態(tài)直接決定細胞的功能表現。與DNA測序側重于“潛在編碼信息”不同,dànbáizhì測序致力于揭示“實際表達與功能狀態(tài)”。通過jīngquè測定dànbáizhì序列與修飾信息,研究人員能夠全面理解細胞行為、疾病機制和藥物響應過程。在dànbáizhì測序中,質譜(Mass Spectrometry, MS)技術扮演著核心角色,特別是液相色譜-串聯質譜(LC-MS/MS)方法,已成為當前主流的蛋白測序平臺。
一、dànbáizhì測序的基本原理
dànbáizhì測序的核心是通過質譜測定多肽片段的質量和碎裂模式,從而推斷其氨基酸序列。測序流程通常包括以下關鍵原理:
1、酶切生成多肽
使用yídànbáiméi等蛋白酶將目標蛋白切割為穩(wěn)定、可解析的多肽段。
2、色譜分離
將復雜的多肽混合物通過高效液相色譜(LC)分離,提高檢測分辨率。
3、質譜分析
進入質譜儀后,首先通過一級MS(MS1)測定肽段的質量,然后選定特定肽段進行二級碎裂(MS2)分析其氨基酸序列特征。
4、數據庫比對
將獲得的碎裂譜圖與蛋白數據庫進行匹配,從而鑒定肽段與對應蛋白。
通過對全樣本的肽段頻率、強度、修飾等數據統計,可進一步實現dànbáizhì的定性鑒定與定量分析。
二、蛋白測序的主要步驟
步驟1:蛋白提取與定量
從細胞、組織或體液中提取總蛋白,利用BCA、Bradford等方法進行濃度測定,為后續(xù)處理提供標準化起點。
步驟2:蛋白還原、烷基化與酶解
通過DTT還原二硫鍵,IAA烷基化游離巰基,使dànbáizhì構象展開,隨后使用yídànbáiméi等進行高效酶解,生成可用于MS分析的多肽。
步驟3:多肽純化與分級
通過固相萃?。ㄈ鏑18柱)或高pH反相分級減少復雜度,提升質譜上機效率和數據覆蓋率。
步驟4:LC-MS/MS檢測
多肽經液相系統分離后進入質譜儀進行MS1和MS2檢測,獲得完整的質譜數據集。
步驟5:數據分析與蛋白鑒定
利用MaxQuant、Proteome Discoverer等分析平臺進行數據庫檢索、肽段定性與蛋白定量、差異分析、GO/KEGG注釋等信息學挖掘。
三、dànbáizhì測序策略選擇:定量與修飾并重
根據研究目的不同,dànbáizhì測序可選擇不同的策略:
1、Label-Free:無需標記,操作簡便,適用于大樣本或早期篩選研究
2、TMT/iTRAQ:同位素標簽法,適合多組間定量比較,靈敏度高
3、SILAC:穩(wěn)定同位素代謝標記,適用于細胞體系內源性標記
4、PTM分析:專注于磷酸化、乙酰化等翻譯后修飾位點的檢測與定量
百泰派克生物科技可根據項目需求,制定zuì適配的蛋白組策略,實現覆蓋率、定量精度和生物學深度的zuì佳平衡。
四、百泰派克生物科技dànbáizhì測序服務優(yōu)勢
作為國內lǐngxiān的蛋白組服務平臺,百泰派克生物科技在dànbáizhì測序方面構建了系統化技術流程和行業(yè)lǐngxiān的質譜平臺:
多種樣本類型支持:細胞、組織、血清、外泌體等
高靈敏質譜平臺:Orbitrap Exploris、Fusion Lumos、timsTOF等
zhuānyè前處理流程:自動化酶解、純化與富集系統
深度數據挖掘:定量分析、通路富集、蛋白互作網絡
多組學融合:可與轉錄組、代謝組、化學蛋白組學聯動解析
蛋白測序作為揭示功能蛋白狀態(tài)的核心手段,正在從基礎研究邁向疾病診斷、靶點篩選、藥物機制研究等多領域拓展。借助先進的質譜平臺與定制化流程,百泰派克生物科技為科研人員提供高質量、高通量、可解釋的蛋白組數據支持。歡迎聯系百泰派克,獲取定制化dànbáizhì測序方案,讓您的研究更進一步!
百泰派克生物科技特色項目
一、蛋白測序
百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos質譜儀及島津公司埃德曼降解測序系統對dànbáizhì序列進行分析,提供基于質譜的蛋白測序分析服務,包括對dànbáizhì的氨基酸組成分析,Nduāncèxù,Cduāncèxù和全序列分析,以及基于埃德曼降解的dànbáizhìN端序列分析服務。對于未知理論序列的dànbáizhì,提供基于從頭測序法的dànbáizhì從頭測序服務,對蛋白序列進行分析。
※服務優(yōu)勢:
1.采用目前世界上先進的質譜儀器 Obitrap Fusion Lumos;
2.可實現對所測定靶蛋白序列 100% 的覆蓋;
3.可測定蛋白N端多達 70個氨基酸序列;
4.可測定多種形式的樣品: 蛋白溶液、PVDF 蛋白條帶;
5.樣品用量低: 蛋白樣品僅需 5-10ug,即可完成檢測;
6.測序不受N端封閉,PEC和和糖基化等N端修飾的影響。
二、dànbáizhì組學
百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos質譜平臺結合Nano-LC,提供定量dànbáizhì組學、靶向dànbáizhì組學、多肽組學、翻譯后修飾蛋白組學等多種dànbáizhì組學分析服務。此外,百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4Ddànbáizhì組學服務,助力微量樣本蛋白組學、大樣本群醫(yī)學及高通量修飾組學等研究工作。
※服務優(yōu)勢:
1 .高通量定量蛋白分析:多對照組大規(guī)模實驗分析,發(fā)現新的生物標記物;
2.體內體外多種dànbáizhì標記方法,適用于分析組織、細胞、血液等多種樣品;
3.質譜分析靈敏度高,實驗結果重復度高;
4.可檢測較低豐度蛋白,線性范圍廣;
5.zhuānyè生物信息學分析,分析更系統準確。
三、單細胞質譜流式技術分析
百泰派克生物科技采用Fluidigm質譜流式系統進行單細胞質譜流式技術分析,采用金屬元素標記物(通常是金屬元素標記的特異抗體)標記細胞表面和內部的分子,然后用流式細胞原理分離單個細胞,再用電感耦合等離子體質譜(ICP-MS)分析單個細胞的原子質量譜,zuì后將原子質量譜數據轉換為細胞表面和內部的信號分子表達量。
※服務優(yōu)勢:
1.技術先進,填補技術空白
采用金屬標記抗體技術,避免了傳統流式熒光通道少且易相互影響的問題??稍趩渭毎麑用嫔蠈Χ喾N指標同時進行表征,百泰派克生物科技可做到同時檢測51個目標蛋白。
2.分析數量大,成本較低
單細胞RNAseq受成本等因素限制,所有樣本細胞匯總的分析數目一般在2x10^4個左右,而流式質譜技術一次(單樣本)就可分析至少10^5的細胞,實現了數量級的提高,且成本不高于單細胞RNAseq。
3.應用前景大
①流式質譜結果可以給出細胞亞群的變化,在臨床診斷、疾病機制研究等方面具有極大的研究前景;
②將金屬標簽技術與其他技術結合會有新應用方向。除常規(guī)蛋白外,質譜流式細胞技術還可用于蛋白翻譯后修飾;
③可檢測細胞存活率、細胞大小、mRNA轉錄子表達量、DNA合成速率以及蛋白酶活性等。
四、基于高精度質譜的免疫多肽組學分析及新抗原發(fā)現
百泰派克生物科技的基于高精度質譜的免疫多肽組學分析及新抗原發(fā)現一站式解決方案包括我們專有的、高度敏感的免疫肽富集和鑒定方案。我們能夠幫助您實現10,000個以上I型多肽和10,000個以上II型多肽的鑒定和識別。通過我們優(yōu)化的高通量免疫多肽組學分析平臺進行免疫肽組學分析,可從zuì小的樣品材料中進行可重復的識別和定量。該服務可以應用于大規(guī)模的研究,旨在助力科研工作者尋找癌癥、免疫疾病及傳染病的解決方案,深入挖掘未知的靶標。
五、生物藥物表征
百泰派克基于高分辨率質譜技術,MALDI TOF,高效色譜分離技術,提供一系列完善的生物藥物分析方案,從dànbáizhì、多肽、抗體、疫苗等生物制品的氨基酸組成和一級結構分析,到產品變異性和純度分析。旨在提供優(yōu)質生物藥物分析服務,幫助生物醫(yī)藥生產商提高生物藥物品質。
百泰派克生物科技七大檢測平臺
百泰派克生物科技-生物制品表征,生物質譜多組學優(yōu)質服務商
北京百泰派克生物科技有限公司致力于為生物/制藥和醫(yī)療器械行業(yè)提供質量控制檢測和項目驗證等zhuānyè服務。公司實驗室遵循NMPA、ICH、FDA和EMA等的法規(guī)和指導原則,通過CNAS/ISO9001雙重質量體系認證,建立了完備的質量體系,數據冷熱/異地備份,設備定期計量/期間核查,軟件審計追蹤,為客戶提供一體化解決方案和技術服務,支持新藥研發(fā)、藥物申報注冊和生產放行。
1.公司采用ISO9001質量控制體系,zhuānyè提供以質譜為基礎的CRO檢測分析服務;
2.獲國家CNAS實驗室認可,為客戶提供符合全球藥政法規(guī)的藥物質量研究服務;
3.業(yè)務范圍覆蓋dànbáizhì組學、多肽組學、代謝組學、生物藥物表征、單細胞分析、單細胞質譜流式、生信云分析以及多組學生物質譜整合分析等;
4.七大質量控制檢測平臺,滿足您一站式服務需求;
5.服務3000+企業(yè),10000+客戶的選擇;
6.致力于為您提供優(yōu)質的生物質譜分析服務!