基于標(biāo)簽的蛋白質(zhì)定量技術(shù)-iTRAQ，TMT，SILAC檢測技術(shù)服務(wù)詳情介紹

細(xì)胞中dànbáizhì組豐度的動態(tài)變化對各種生命過程都有重要影響。例如，許多疾病的發(fā)生和發(fā)展通常伴隨著某些dànbáizhì的異常表達(dá)。定量dànbáizhì組學(xué)是對一個基因組中表達(dá)的所有dànbáizhì或一個復(fù)雜混合系統(tǒng)中的所有dànbáizhì進(jìn)行準(zhǔn)確的定量和鑒定。目前，定量dànbáizhì組學(xué)技術(shù)主要分為標(biāo)記策略和非標(biāo)記策略，其中標(biāo)記策略分為體內(nèi)標(biāo)記（如SILAC）和體外標(biāo)記（如iTRAQ，TMT）。

iTRAQ是AB SCIEX公司于2004年開發(fā)的一種定量dànbáizhì組學(xué)研究技術(shù)。該技術(shù)可以比較許多不同樣品中的dànbáizhì。例如，它可以研究不同病理條件或不同發(fā)育階段的組織樣品中dànbáizhì表達(dá)水平的差異。同時，iTRAQ可以準(zhǔn)確地定量和鑒定一個基因組中表達(dá)的所有dànbáizhì或一個復(fù)雜混合系統(tǒng)中的所有dànbáizhì。iTRAQ可以使用8種不同的同位素試劑同時標(biāo)記和比較8種不同的dànbáizhì樣品。標(biāo)記試劑由報告基團(tuán)，平衡基團(tuán)和胺特異性反應(yīng)基團(tuán)組成。

iTRAQ的工作流程

iTRAQ技術(shù)的一般過程如下圖所示。簡要地說，樣品被yídànbáiméi裂解后，被烷基化并酶消化成肽段。用iTRAQ試劑的標(biāo)記標(biāo)簽對產(chǎn)生的肽段進(jìn)行差異標(biāo)記，然后將標(biāo)記的樣品混合在一起進(jìn)行LC-MS/MS分析。

iTRAQ的優(yōu)勢 1. 在一次實驗中，iTRAQ可以同時標(biāo)記4至8個樣品。操作簡單快捷。適用于多個樣品的高通量檢測，并且實驗設(shè)計更加靈活； 2. iTRAQ是在肽段水平上進(jìn)行的體外標(biāo)記，適用于許多類型的生物樣品； 3. iTRAQ具有重復(fù)性好、靈敏度高的特點，可以同時進(jìn)行定性和定量。

TMT是美國Thermo Fisher Scientific開發(fā)的一種肽體外標(biāo)記技術(shù)。該技術(shù)zuì多可以使用10個同位素標(biāo)簽來標(biāo)記多肽的氨基。經(jīng)過LC-MS/MS分析后，可以同時比較10個不同樣品中dànbáizhì的相對含量。TMT廣泛用于疾病標(biāo)志物篩選、藥物作用靶標(biāo)、動植物抗病或抗逆機(jī)制、動植物發(fā)育和分化機(jī)制等領(lǐng)域。

TMT的工作流程

TMT的一般過程如下圖所示。將不同的dànbáizhì樣品變性、還原、烷基化并消化成肽段樣品。然后將這些肽段樣品用TMT試劑盒標(biāo)記后合并為一個樣品。使用HPRP液相色譜分離合并的樣品，并將餾分串聯(lián)為12個樣品。純化后，通過HPLC-MS分析每個樣品。分析數(shù)據(jù)以獲得dànbáizhì的定性和相對定量信息。

TMT的優(yōu)勢 1. 高靈敏度：可以檢測低豐度的dànbáizhì； 2. 分離能力強：可以分離酸/堿蛋白、小于10KD或大于200KD的蛋白、不溶性蛋白等； 3. 應(yīng)用范圍廣：可以鑒定任何類型的dànbáizhì，包括膜dànbáizhì、核dànbáizhì和胞外dànbáizhì； 4. 高通量：可以同時分析10個樣品，特別適合對采用多種處理方法或多種處理時間的樣品進(jìn)行差異dànbáizhì分析。

SILAC是用于高通量定量dànbáizhì組學(xué)的有效方案，它是根據(jù)依賴于必需氨基酸的哺乳動物細(xì)胞增殖的原理設(shè)計的。SILAC用于定量dànbáizhì組學(xué)研究，可以分析細(xì)胞中的dànbáizhì相互作用和dànbáizhì表達(dá)差異，為復(fù)雜的哺乳動物細(xì)胞dànbáizhì組學(xué)的全面系統(tǒng)的定性和定量分析提供有效的解決方案。

SILAC的工作流程

SILAC的一般過程如下圖所示。向細(xì)胞培養(yǎng)基中添加輕、中或重穩(wěn)定同位素標(biāo)記的必需氨基酸（主要是賴氨酸和jīngānsuān），通過細(xì)胞的正常代謝，所有新合成的dànbáizhì都被標(biāo)有穩(wěn)定同位素。等量混合所有類型的dànbáizhì，通過SDS-PAGE分離、切膠和酶消化后，用LC-MS/MS分析可以獲得相關(guān)dànbáizhì的定量和定性結(jié)果。

SILAC的優(yōu)勢 1. SILAC是一種活細(xì)胞水平的標(biāo)記技術(shù)。標(biāo)記效果穩(wěn)定有效，標(biāo)記效率不受裂解液的影響。 2. SILAC需要的樣品更少，通常每個樣品僅幾十微克的dànbáizhì就足夠了。 3. SILAC使用質(zhì)譜法同時鑒定和定量多種dànbáizhì。 4. SILAC使用體內(nèi)標(biāo)記技術(shù)，接近樣品的真實狀態(tài)。

參考文獻(xiàn) 1. Zieske Lynn R. A perspective on the use of iTRAQ reagent technology for protein complex and profiling studies. Journal of Experimental Botany, 2006, 57(7):1501-1508. 2. Lichao Zhang, Joshua E. Elias. Relative Protein Quantification Using Tandem Mass Tag Mass Spectrometry. Methods in Molecular Biology, 2017, 1550:185. 3. Esthelle Hoedt, Guoan Zhang, Thomas A. Neubert. Stable Isotope Labeling by Amino Acids in Cell Culture (SILAC) for Quantitative Proteomics. Adv Exp Med Biol. 2014, 806:93-106.

百泰派克生物科技特色項目

一、蛋白測序

百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos質(zhì)譜儀及島津公司埃德曼降解測序系統(tǒng)對dànbáizhì序列進(jìn)行分析，提供基于質(zhì)譜的蛋白測序分析服務(wù)，包括對dànbáizhì的氨基酸組成分析，N端測序，C端測序和全序列分析，以及基于埃德曼降解的dànbáizhìN端序列分析服務(wù)。對于未知理論序列的dànbáizhì，提供基于從頭測序法的dànbáizhì從頭測序服務(wù)，對蛋白序列進(jìn)行分析。

※服務(wù)優(yōu)勢：

1.采用目前世界上優(yōu)良的質(zhì)譜儀器 Obitrap Fusion Lumos;

2.可實現(xiàn)對所測定靶蛋白序列 100% 的覆蓋;

3.可測定蛋白N端多達(dá) 70個氨基酸序列;

4.可測定多種形式的樣品: 蛋白溶液、PVDF 蛋白條帶;

5.樣品用量低: 蛋白樣品僅需 5-10ug，即可完成檢測;

6.測序不受N端封閉，PEC和和糖基化等N端修飾的影響。

二、dànbáizhì組學(xué)

百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos質(zhì)譜平臺結(jié)合Nano-LC，提供定量dànbáizhì組學(xué)、靶向dànbáizhì組學(xué)、多肽組學(xué)、翻譯后修飾蛋白組學(xué)等多種dànbáizhì組學(xué)分析服務(wù)。此外，百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4Ddànbáizhì組學(xué)服務(wù)，助力微量樣本蛋白組學(xué)、大樣本群醫(yī)學(xué)及高通量修飾組學(xué)等研究工作。

※服務(wù)優(yōu)勢：

1 .高通量定量蛋白分析:多對照組大規(guī)模實驗分析，發(fā)現(xiàn)新的生物標(biāo)記物;

2.體內(nèi)體外多種dànbáizhì標(biāo)記方法，適用于分析組織、細(xì)胞、血液等多種樣品;

3.質(zhì)譜分析靈敏度高，實驗結(jié)果重復(fù)度高;

4.可檢測較低豐度蛋白，線性范圍廣;

5.zhuānyè生物信息學(xué)分析，分析更系統(tǒng)準(zhǔn)確。

三、單細(xì)胞質(zhì)譜流式技術(shù)分析

百泰派克生物科技采用Fluidigm質(zhì)譜流式系統(tǒng)進(jìn)行單細(xì)胞質(zhì)譜流式技術(shù)分析，采用金屬元素標(biāo)記物（通常是金屬元素標(biāo)記的特異抗體）標(biāo)記細(xì)胞表面和內(nèi)部的分子，然后用流式細(xì)胞原理分離單個細(xì)胞，再用電感耦合等離子體質(zhì)譜（ICP-MS）分析單個細(xì)胞的原子質(zhì)量譜，zuì后將原子質(zhì)量譜數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換為細(xì)胞表面和內(nèi)部的信號分子表達(dá)量。

※服務(wù)優(yōu)勢：

1.技術(shù)優(yōu)良，*技術(shù)空白

采用金屬標(biāo)記抗體技術(shù)，避免了傳統(tǒng)流式熒光通道少且易相互影響的問題。可在單細(xì)胞層面上對多種指標(biāo)同時進(jìn)行表征，百泰派克生物科技可做到同時檢測51個目標(biāo)蛋白。

2.分析數(shù)量大，成本較低

單細(xì)胞RNAseq受成本等因素限制，所有樣本細(xì)胞匯總的分析數(shù)目一般在2x10^4個左右，而流式質(zhì)譜技術(shù)一次（單樣本）就可分析至少10^5的細(xì)胞，實現(xiàn)了數(shù)量級的提高，且成本不高于單細(xì)胞RNAseq。

3.應(yīng)用前景大

①流式質(zhì)譜結(jié)果可以給出細(xì)胞亞群的變化，在臨床診斷、疾病機(jī)制研究等方面具有極大的研究前景；

②將金屬標(biāo)簽技術(shù)與其他技術(shù)結(jié)合會有新應(yīng)用方向。除常規(guī)蛋白外，質(zhì)譜流式細(xì)胞技術(shù)還可用于蛋白翻譯后修飾；

③可檢測細(xì)胞存活率、細(xì)胞大小、mRNA轉(zhuǎn)錄子表達(dá)量、DNA合成速率以及蛋白酶活性等。

四、基于高精度質(zhì)譜的免疫多肽組學(xué)分析及新抗原發(fā)現(xiàn)

百泰派克生物科技的基于高精度質(zhì)譜的免疫多肽組學(xué)分析及新抗原發(fā)現(xiàn)一站式解決方案包括我們專有的、高度敏感的免疫肽富集和鑒定方案。我們能夠幫助您實現(xiàn)10,000個以上I型多肽和10,000個以上II型多肽的鑒定和識別。通過我們優(yōu)化的高通量免疫多肽組學(xué)分析平臺進(jìn)行免疫肽組學(xué)分析，可從zuì小的樣品材料中進(jìn)行可重復(fù)的識別和定量。該服務(wù)可以應(yīng)用于大規(guī)模的研究，旨在助力科研工作者尋找癌癥、免疫疾病及傳染病的解決方案，深入挖掘未知的靶標(biāo)。

五、生物藥物表征

百泰派克基于高分辨率質(zhì)譜技術(shù)，MALDI TOF，高效色譜分離技術(shù)，提供一系列完善的生物藥物分析方案，從dànbáizhì、多肽、抗體、疫苗等生物制品的氨基酸組成和一級結(jié)構(gòu)分析，到產(chǎn)品變異性和純度分析。旨在提供優(yōu)質(zhì)生物藥物分析服務(wù)，幫助生物醫(yī)藥生產(chǎn)商提高生物藥物品質(zhì)。

百泰派克生物科技七大檢測平臺

百泰派克生物科技-生物制品表征，生物質(zhì)譜多組學(xué)優(yōu)質(zhì)服務(wù)商

北京百泰派克生物科技有限公司致力于為生物/制藥和醫(yī)療器械行業(yè)提供質(zhì)量控制檢測和項目驗證等zhuānyè服務(wù)。公司實驗室遵循NMPA、ICH、FDA和EMA等的法規(guī)和指導(dǎo)原則，通過CNAS/ISO9001雙重質(zhì)量體系認(rèn)證，建立了完備的質(zhì)量體系，數(shù)據(jù)冷熱/異地備份，設(shè)備定期計量/期間核查，軟件審計追蹤，為客戶提供一體化解決方案和技術(shù)服務(wù)，支持新藥研發(fā)、藥物申報注冊和生產(chǎn)放行。

1.公司采用ISO9001質(zhì)量控制體系，zhuānyè提供以質(zhì)譜為基礎(chǔ)的CRO檢測分析服務(wù)；

2.獲國家CNAS實驗室認(rèn)可，為客戶提供符合全球藥政法規(guī)的藥物質(zhì)量研究服務(wù)；

3.業(yè)務(wù)范圍覆蓋dànbáizhì組學(xué)、多肽組學(xué)、代謝組學(xué)、生物藥物表征、單細(xì)胞分析、單細(xì)胞質(zhì)譜流式、生信云分析以及多組學(xué)生物質(zhì)譜整合分析等；

4.七大質(zhì)量控制檢測平臺，滿足您一站式服務(wù)需求；

5.服務(wù)3000+企業(yè)，10000+客戶的選擇；

6.致力于為您提供優(yōu)質(zhì)的生物質(zhì)譜分析服務(wù)!

基于標(biāo)簽的蛋白質(zhì)定量技術(shù)-iTRAQ，TMT，SILAC檢測技術(shù)服務(wù)詳情介紹