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UltraRIPA 脂筏提取緩沖液套裝

具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)

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富士膠片和光(廣州)貿(mào)易有限公司是日本富士膠片和光純藥株式會(huì)社(FUJIFILM Wako Pure Chemical Corporation)在中國的子公司,主營富士膠片和光品牌試劑產(chǎn)品,供應(yīng)產(chǎn)品超50,000種,囊括了生命科學(xué)、藥品生產(chǎn)、品質(zhì)管理領(lǐng)域、合成與材料、分析各個(gè)領(lǐng)域。


基于“想要為科研人員提供幫助”的創(chuàng)業(yè)初衷,富士膠片和光純藥(FUJIFILM Wako)作為一家滿足前沿研究領(lǐng)域需求的綜合試劑制造商,一直致力于生產(chǎn)和開發(fā)高品質(zhì)的產(chǎn)品,并于2022年6月迎來了創(chuàng)業(yè)100周年。通過發(fā)揮企業(yè)優(yōu)勢(shì)“技術(shù)力”,以及三大核心業(yè)務(wù)的試劑業(yè)務(wù)、化成品業(yè)務(wù)和臨床診斷業(yè)務(wù)來滿足學(xué)術(shù)界、企業(yè)以及醫(yī)療相關(guān)企業(yè)的廣泛需求。


憑借100 年的歷史經(jīng)驗(yàn),富士膠片和光純藥(FUJIFILM Wako)在日本市場(chǎng)占據(jù)高份額,作為全球性的試劑供應(yīng)商,以“成就科學(xué)未來之力,創(chuàng)造幸福源泉”為愿景,致力于高品質(zhì)試劑的生產(chǎn)與開發(fā)。通過提供試劑,為再生醫(yī)療、癌癥、精神/神經(jīng)疾病和抗體藥物等各類基礎(chǔ)研究和前沿研究做貢獻(xiàn),并獲得 ISO9001等多項(xiàng)國際認(rèn)證。基于可靠的技術(shù)和品質(zhì)、以及科研人員之間的信賴,作為富士膠片集團(tuán)的一員將不斷實(shí)現(xiàn)全球化發(fā)展。


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主要業(yè)務(wù)——試劑


作為富士膠片和光純藥(FUJIFILM Wako)試劑業(yè)務(wù)的中國子公司,富士膠片和光(廣州)貿(mào)易有限公司可提供各個(gè)領(lǐng)域測(cè)試和研究用途的生命科學(xué)試劑和化學(xué)試劑。


試劑業(yè)務(wù)

可廣泛提供生命科學(xué)和化學(xué)領(lǐng)域的測(cè)試研究用產(chǎn)品



生命科學(xué)領(lǐng)域


化學(xué)領(lǐng)域



 

培養(yǎng)基生產(chǎn)

 ● 抗體制備

 ● 定制服務(wù)



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認(rèn)證標(biāo)準(zhǔn)品

 ● 有機(jī)化學(xué)


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作為優(yōu)質(zhì)的試劑企業(yè),我們可以提供滿足不同客戶需求的高品質(zhì)產(chǎn)品。試劑業(yè)務(wù)自創(chuàng)業(yè)以來,已持續(xù)不斷地提供了廣泛領(lǐng)域的試劑產(chǎn)品,并致力于成為滿足前沿技術(shù)領(lǐng)域各項(xiàng)研究需求的試劑制造商。今后也將以過往技術(shù)經(jīng)驗(yàn)為基石,發(fā)揮作為可信賴的研究支持合作伙伴的作用。



產(chǎn)品一覽

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● 常規(guī)試劑

● 有機(jī)合成試劑

● 環(huán)境分析試劑

● 精密分析試劑

● 色譜試劑

● 生化學(xué)用試劑

● 基因研究用試劑

● 免疫研究用試劑

● 病理研究用試劑

● 細(xì)胞培養(yǎng)用試劑

● 內(nèi)毒素檢測(cè)用試劑

● 生物藥生產(chǎn)用培養(yǎng)基

● 研究用基礎(chǔ)培養(yǎng)基

● 定制服務(wù)

● 設(shè)備和耗材










豐富的產(chǎn)品類目以及快速供應(yīng)體系

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致力于持續(xù)監(jiān)測(cè)市場(chǎng)的需求并跟蹤世界的研究動(dòng)向。為了能夠及時(shí)準(zhǔn)確地響應(yīng)客戶的需求,富士膠片和光建立了以自有品牌為中心的豐富產(chǎn)品體系,為各界的研究和開發(fā)領(lǐng)域提供細(xì)致的服務(wù)與支持 。













高品質(zhì)的試劑提供和生產(chǎn)體系

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試劑生產(chǎn)工廠以東京工廠和大阪工廠為中心,發(fā)揮優(yōu)質(zhì)技術(shù)力量建立的高品質(zhì)生產(chǎn)體系。愛知工廠配備齊全的培養(yǎng)基生產(chǎn)設(shè)備,可用于生產(chǎn)再生醫(yī)療和生物制藥生產(chǎn)用的培養(yǎng)基。













優(yōu)質(zhì)的客戶服務(wù)和產(chǎn)品信息

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通過定期更新的主頁網(wǎng)站、富士膠片和光生物微信公眾號(hào)、富士膠片和光化學(xué)分析微信公眾號(hào),以及不定期的富士膠片和光生物視頻號(hào)、網(wǎng)絡(luò)研討會(huì)和線下展會(huì),致力于為客戶提供優(yōu)質(zhì)的服務(wù)以及不斷更新的產(chǎn)品信息。













強(qiáng)化全球化事業(yè)的開展

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建立日本海外銷售體系,通過提供富士膠片和光純藥(FUJIFILM Wako)優(yōu)質(zhì)研發(fā)力量生產(chǎn)的高品質(zhì)產(chǎn)品,積極推進(jìn)全球化業(yè)務(wù)。














企業(yè)歷史沿革


年份

內(nèi)容

1922年6月

  從武田長兵衞商店(現(xiàn)武田薬品工業(yè)株式會(huì)社)的化學(xué)藥品部門獨(dú)立出來,成立了武田化學(xué)薬品

 株式會(huì)社

1940年

  大阪工廠竣工

1944年

  東京工廠竣工

1947年

  更名為和光純薬工業(yè)株式會(huì)社

1950年

  展開化成品業(yè)務(wù)

1952年

  總部遷移至大阪

1960年

  展開臨床檢測(cè)藥業(yè)務(wù)

1968年

  播磨工廠竣工

1972年

  公司總部竣工

1974年

  成立德國和光純薬有限會(huì)社(今?FUJIFILM Wako Chemicals Europe GmbH)

1981年

  成立美國和光純薬株式會(huì)社(今?FUJIFILM Wako Chemicals U.S.A Corporation)

1989年

  建設(shè)東部配送中心

1991年

  建設(shè)西部配送中心

2004年

  愛知工廠竣工

2012年

  成立和光純耀(上海)化學(xué)有限公司(今?富士膠片和光純藥(上海)化學(xué)有限公司)

2015年

  收購株式會(huì)社シバヤギ(今?群馬辦事處)

2017年

  成為FUJIFILM Corporation的全資子公司

2018年

  更名為富士膠片和光純藥株式會(huì)社

2019年

  合并IS Japan Co.,Ltd.(今?戶田辦事處)

2022年

  成立100周年





























生物化學(xué)試劑、儀器和耗材

供貨周期 一個(gè)月以上 應(yīng)用領(lǐng)域 生物產(chǎn)業(yè)

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大幅度提升膜蛋白提取效率的新一代RIPA緩沖液

 

 

  與常規(guī)的非變性細(xì)胞裂解緩沖液(RIPA buffer, 1% Triton X-100等)相比,這款緩沖液套裝(Buffer Kit)能迅速且高效地提取增溶相對(duì)困難的脂筏(Lipid Raft)蛋白質(zhì)。從常規(guī)緩沖液中不可溶而丟棄的膜組分中,在維持蛋白質(zhì)功能的情況下能實(shí)現(xiàn)高效地提取,有利于對(duì)脂筏等蛋白質(zhì)的功能分析。

  ※本產(chǎn)品僅限于研究用。不可用于臨床治療。

 

 

◆細(xì)胞膜上的不溶性成分——脂筏(Lipid Raft)

 

  裂解細(xì)胞進(jìn)行蛋白質(zhì)功能分析的時(shí)候,經(jīng)常會(huì)使用RIPA (Radio-Immuno Precipitation Assay)緩沖液和1% Triton X-100緩沖液等的相對(duì)溫和的細(xì)胞膜裂解緩沖液。這些緩沖液對(duì)蛋白質(zhì)的構(gòu)造和功能的影響小,適用于酶活性試驗(yàn)、免疫沉降和各種結(jié)合實(shí)驗(yàn)等蛋白質(zhì)的功能分析。另一方面,與具有很強(qiáng)的蛋白質(zhì)變性作用的SDS緩沖液相比,增溶能力較弱,*不能溶解以脂筏(Lipid Raft)為主的細(xì)胞膜組分。許多表面活性劑都不能溶解脂筏,故其又被稱為Detergent Resistant Membrane (DRM)。DRM中所含蛋白質(zhì)的功能分析被認(rèn)為是十分困難的。

 

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  脂筏(Lipid Raft)是由膽固醇(cholesterol)和鞘磷脂(sphingomyelin),GPI錨定蛋白(GPI anchor protein)和棕櫚?;╬almitoylation)蛋白質(zhì)組成的細(xì)胞膜構(gòu)造,被認(rèn)為是整合各種功能蛋白的功能域。神經(jīng)細(xì)胞突觸和免疫細(xì)胞的免疫突觸是脂筏的代表性例子。

 

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脂筏示意圖

 

 

◆特點(diǎn)

 

操作簡(jiǎn)單,能快速提取脂筏蛋白
使用兩種類型的緩沖液(A buffer,B buffer)進(jìn)行兩個(gè)階段的提取。先提取出胞漿蛋白和非脂筏蛋白,然后提取脂筏蛋白
Buffer提取的任何蛋白質(zhì)都不會(huì)失活
A buffer和一般的RIPA buffer成分相同*。B buffer含有表面活性劑,可以通過透析除去
適用于哺乳動(dòng)物細(xì)胞/組織

使用本品配制的溶解液適用于酶活性試驗(yàn)、免疫沉淀(Immunoprecipitation)、蛋白定量(BCA法)、SDS-PAGE和Western blot等

1% NP-40 Alternative,0.1% SDS,50 mMTris-HCl (pH8.0),150 mMNaCl,0.5% Sodium

 Deoxycholate

 

 

◆緩沖液套裝組成

 

  ● A buffer (RIPA buffer) (100 mL)

  ● B buffer(10 mL)

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◆使用方法

 

1、用A buffer溶解組織或培養(yǎng)細(xì)胞。
為了提高溶解效率,推薦使用均質(zhì)或超聲波破碎設(shè)備。
2、

進(jìn)行離心分離,使A buffer中可溶性組分(上層清液)和不溶性組分(沉淀)分離,分別回收。上層清液A

 buffer可溶性組分中主要含有胞漿蛋白和非脂筏蛋白。

3、往沉淀的A buffer 不溶性組分中加入B buffer,形成懸濁液。
4、進(jìn)行離心分離,與步驟2一樣分離出可溶性組分(上層清液)和不溶性組分(沉淀),分別回收。上層清液的B buffer可溶性組分中含有脂筏蛋白。
5、可應(yīng)用于各種實(shí)驗(yàn)。
A buffer和B buffer不可用于Bradford法蛋白質(zhì)定量。蛋白質(zhì)定量請(qǐng)使用BCA檢測(cè)。
使用本品A buffer和B buffer進(jìn)行兩個(gè)階段的提取是最適宜的,也有只對(duì)細(xì)胞使用B buffer進(jìn)行溶解和提取的例子。具體請(qǐng)參照以下例子。

 

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UltraRIPA kit 、1% SDS buffer和RIPA buffer的比較

 

蛋白分離

蛋白結(jié)構(gòu)

蛋白功能

應(yīng)用

胞質(zhì)蛋白

膜蛋白

非脂筏蛋白

脂筏蛋白

>1%SDS buffer

SDS-PAGE

RIPA buffer

酶分析法測(cè)定

免疫沉淀

SDS-PAGE等

UltraRIPA

 

 

◆應(yīng)用例

 

從脂筏中提取總蛋白

 

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  用UltraRIPA kit A buffer溶解小鼠全腦組織后,回收A buffer不溶性組分(RIPA-insoluble fraction),添加2% SDS,RIPA buffer 和UltraRIPA kit B buffer進(jìn)行提取。提取后的總蛋白用SDS-PAGE/銀染色檢測(cè)(左),用BCA法定量蛋白質(zhì)(右)。相對(duì)于具有很強(qiáng)的蛋白質(zhì)變性作用的2% SDS緩沖液,UltraRIPA kit能夠提取70%以上的蛋白質(zhì)。

  ※不能保證全部蛋白質(zhì)的可溶性都得到改善。

 

 

脂筏標(biāo)記蛋白的提取

 

  用UltraRIPA kit A buffer溶解小鼠全腦組織后,回收A buffer不溶性組分(RIPA-insoluble fraction),添加2% SDS,RIPA buffer 和UltraRIPA kit B buffer,提取后進(jìn)行SDS-PAGE。利用對(duì)應(yīng)脂筏標(biāo)記蛋白的抗體進(jìn)行Western blot檢測(cè)。

 

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脂筏標(biāo)記蛋白的免疫沉淀

 

  用UltraRIPA kit A buffer溶解小鼠全腦組織后,回收A buffer不溶性組分,通過B buffer提取脂筏標(biāo)記蛋白。對(duì) buffer提取物使用脂筏標(biāo)記蛋白PSD95的抗體和G蛋白偶聯(lián)磁珠進(jìn)行免疫沉淀。使用銀染色和抗PSD95抗體通過Western blot檢測(cè)進(jìn)行確認(rèn)。

 

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提取的蛋白質(zhì)的酶活性測(cè)定

 

  用1%TritonX100,RIPA buffer,UltraRIPA kit B buffer 和2%SDS溶解CHO細(xì)胞,測(cè)定溶解物中乳酸脫氫酶(LDH)的活性。2%SDS具有很強(qiáng)的蛋白質(zhì)變性作用,在幾乎*失活的情況下,1% Triton X100,UltraRIPA kit A buffer,和UltraRIPA kit B buffer所得的酶活性大致相同。

 

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從脂筏中提取功能蛋白

 

  用UltraRIPA kit A buffer溶解小鼠全腦組織后,回收A buffer不溶性組分。用A buffer分三次沖洗不溶性組分,消除RIPA可溶性組分中脫磷酸酶的活性。往不溶性組分中分別添加2% SDS buffer,A buffer(RIPA buffer)和B buffer,測(cè)定各種提取物的總脫磷酸化酶活性。下圖是各緩沖液從RIPA不溶性組分中提取的蛋白質(zhì)的量(左軸:黑)和所檢測(cè)的脫磷酸酶的活性(右軸:紅)的示意圖。2% SDS buffer能夠從RIPA不溶性組分中很好地提取蛋白質(zhì),但容易導(dǎo)致蛋白質(zhì)變性,*失去脫磷酸化活性。RIPA buffer不能提取蛋白質(zhì),活性也無法檢測(cè)。UltraRIPA kit B buffer所提取的蛋白質(zhì)大約為2% SDS buffer的70%,且可以檢測(cè)出較強(qiáng)的脫磷酸化活性。

 

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UltraRIPA kit B buffer單獨(dú)提取脂筏蛋白的可能性評(píng)價(jià)

※數(shù)據(jù)提供:東京大學(xué)藥學(xué)院研究生院保健化學(xué)系

 

  用PBS沖洗COS-1細(xì)胞,分別使用SDS buffer,1% Triton X-100 buffer,UltraRIPA kit A buffer 和UltraRIPA kit B buffer裂解,通過離心分離(14,000 rpm, 5 min,4℃)可溶性組分和不可溶性組分。不可溶性組分用等量的SDS-PAGE樣品緩沖液變性溶解。脂筏標(biāo)記Flotilin1的可溶部分通過SDS-PAGE/western blot測(cè)定。使用1% Triton X-100和RIPA buffer,大部分的Flotilin 1不溶性膜組分沒有被溶解,而UltraRIPA kit B buffer幾乎可以全部溶解。

 

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◆各buffer組成

 

SDS buffer(2%SDS, 1% Triton X-100, 50 mM HEPES?Na (pH 7.2), 150 mMNaCl)

UltraRIPA kit A buffer (1% NP-40 Alternative,0.1% SDS,50 mMTris-HCl (pH8.0),150 mMNaCl,

0.5% Sodium Deoxycholate)

UltraRIPA kit B buffer (成分保密)
1% Triton X-100 (1% Triton X-100, 50 mM HEPES?Na (pH 7.2), 150 mMNaCl)

 

 

◆產(chǎn)品列表

 

產(chǎn)品列表產(chǎn)品名稱規(guī)格
F015

UltraRIPA 脂筏提取緩沖液套裝

1kit

 

欲了解更多相關(guān)產(chǎn)品信息,請(qǐng)點(diǎn)擊文字:ULTRARIPA® Kit 應(yīng)用數(shù)據(jù)

欲了解更多產(chǎn)品信息,可點(diǎn)擊文字下載PDF:ULTRARIPA® Kit for Lipid Raft



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