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Thermo life 10099141--Thermo AUSTRALIAN ORIGIN 澳洲胎牛血清
營養(yǎng)物質(zhì)：包含氨基酸、維生素、葡萄糖等細胞生長所必需的基礎(chǔ)營養(yǎng)成分 。氨基酸是細胞合成蛋白質(zhì)的原料；維生素參與細胞內(nèi)眾多的代謝反應(yīng)；葡萄糖則為細胞提供能量，這些物質(zhì)共同滿足細胞生長、分裂和代謝的需求。
生長因子：如表皮生長因子（EGF）、成纖維細胞生長因子（FGF）等 。這些生長因子能夠與細胞表面的特異性受體結(jié)合，激活細胞內(nèi)的信號傳導(dǎo)通路，促進細胞的增殖、分化和存活。例如，EGF 可刺激上皮細胞的生長和分化，在皮膚細胞培養(yǎng)等實驗中發(fā)揮重要作用。
結(jié)合蛋白：像轉(zhuǎn)鐵蛋白可結(jié)合并轉(zhuǎn)運鐵離子，為細胞提供鐵元素，同時防止鐵離子在溶液中產(chǎn)生自由基對細胞造成損傷；白蛋白能夠結(jié)合和運輸脂肪酸、激素等物質(zhì)，維持細胞外環(huán)境的穩(wěn)定 。
緩沖物質(zhì)與 pH 調(diào)節(jié)劑：血清中的碳酸氫鹽、蛋白質(zhì)等成分構(gòu)成緩沖體系，可維持細胞培養(yǎng)液的 pH 穩(wěn)定在 7.2 - 7.4 的適宜范圍，為細胞創(chuàng)造穩(wěn)定的酸堿環(huán)境 。
高品質(zhì)來源：血清取自澳大利亞特定區(qū)域的健康胎牛，該地區(qū)具有嚴格的動物健康監(jiān)管體系，有效避免了瘋牛?。˙SE）、口蹄疫等重大傳染病源的污染，從源頭上保證了血清的安全性和高品質(zhì) 。
嚴格的質(zhì)量控制：
微生物檢測：每一批次血清均經(jīng)過嚴格的細菌、真菌、支原體和病毒檢測 。采用靈敏度高的檢測方法，如培養(yǎng)法、PCR 法等，確保血清無微生物污染，避免微生物對細胞培養(yǎng)造成干擾，甚至導(dǎo)致細胞死亡。
內(nèi)毒素檢測：通過鱟試劑法（LAL 法）精確測定血清中的內(nèi)毒素含量，每批血清內(nèi)毒素水平低于 0.06 EU/mL，遠低于行業(yè)標準，減少內(nèi)毒素對細胞生長和實驗結(jié)果的不良影響 。
細胞培養(yǎng)性能測試：使用多種不同類型的細胞系（如 HeLa 細胞、CHO 細胞等）對血清進行培養(yǎng)性能測試，評估細胞的生長速率、形態(tài)、存活率等指標，確保血清能夠為細胞提供良好的生長支持 。
穩(wěn)定的批次間一致性：Thermo Fisher Scientific 采用標準化的生產(chǎn)流程和先進的質(zhì)量控制體系，從血清采集、加工處理到最終檢測，每一個環(huán)節(jié)都嚴格把控 。通過對關(guān)鍵指標的嚴格監(jiān)測和調(diào)控，保證不同批次的血清在成分和性能上具有高度一致性，科研人員在進行長期實驗或重復(fù)性實驗時，無需擔(dān)心因血清批次差異導(dǎo)致實驗結(jié)果不穩(wěn)定的問題。
廣泛的適用性：適用于多種細胞類型的培養(yǎng)，無論是常規(guī)的細胞系，還是培養(yǎng)難度較高的原代細胞、胚胎干細胞等，都能提供良好的營養(yǎng)支持 。并且可與多種基礎(chǔ)培養(yǎng)基（如 DMEM、RPMI 1640 等）配合使用，滿足不同科研實驗的需求。
便捷的使用方式：產(chǎn)品以 500 mL 瓶裝形式提供，包裝規(guī)格符合實驗室常規(guī)使用需求。血清經(jīng)過 γ 射線輻照處理，在不影響血清成分和性能的前提下，有效殺滅潛在的微生物，用戶無需進行額外的滅菌處理，可直接按照實驗需求進行稀釋和使用，操作便捷高效 。
血清檢查：收到血清后，立即檢查包裝是否完好，標簽信息是否清晰準確，包括產(chǎn)品名稱、貨號、規(guī)格、批號、有效期、儲存條件等 。將血清短暫離心（低速，如 1000 - 2000 rpm，離心 3 - 5 分鐘），使附著在瓶蓋上的血清集中于瓶底，避免損失。同時，觀察血清外觀，正常情況下應(yīng)為淺黃色或琥珀色、澄清且無沉淀或渾濁現(xiàn)象。若發(fā)現(xiàn)血清顏色異常、有明顯沉淀或異味，請勿使用，并及時聯(lián)系供應(yīng)商處理。
培養(yǎng)基配制：根據(jù)所培養(yǎng)細胞的類型和實驗需求，選擇合適的基礎(chǔ)培養(yǎng)基 。在無菌環(huán)境下（如超凈工作臺），按照培養(yǎng)基說明書的要求，將基礎(chǔ)培養(yǎng)基粉末溶解于適量的超純水中，充分攪拌至溶解。然后，根據(jù)實驗設(shè)計，添加相應(yīng)的添加劑（如谷氨酰胺、丙酮酸鈉等）。最后，按照一定比例（通常為 5% - 20%，具體比例需根據(jù)細胞類型和實驗要求確定）加入胎牛血清，用無菌的移液管或注射器將血清緩慢加入培養(yǎng)基中，輕輕搖勻，使血清與培養(yǎng)基充分混合 。配制好的培養(yǎng)基應(yīng)盡快使用，如需保存，可置于 2 - 8℃冰箱中，但保存時間不宜過長，以免影響培養(yǎng)基的營養(yǎng)成分和性能。
細胞培養(yǎng)耗材準備：準備好無菌的細胞培養(yǎng)瓶、培養(yǎng)皿、移液管、槍頭、離心管等耗材 。確保所有耗材均經(jīng)過嚴格的滅菌處理，可通過高壓蒸汽滅菌或購買預(yù)滅菌的一次性耗材。在使用前，檢查耗材的包裝是否完好，避免污染。
細胞復(fù)蘇（若為凍存細胞）：從液氮罐中取出凍存的細胞，迅速放入 37℃水浴鍋中，輕輕搖晃，使細胞在 1 - 2 分鐘內(nèi)快速解凍 。將解凍后的細胞懸液轉(zhuǎn)移至無菌離心管中，加入適量的含血清培養(yǎng)基，輕輕吹打混勻，然后以低速離心（如 800 - 1000 rpm，離心 3 - 5 分鐘），棄去上清液，去除凍存保護劑。向離心管中加入適量的新鮮配制的含血清培養(yǎng)基，輕輕吹打，使細胞均勻分散，制成細胞懸液。將細胞懸液接種到細胞培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，補充適量的培養(yǎng)基，使細胞密度達到合適范圍（根據(jù)細胞類型而定），然后將細胞培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿放入細胞培養(yǎng)箱中，在適宜的溫度（一般為 37℃）、濕度（95%）和氣體環(huán)境（5% CO?）下培養(yǎng) 。
細胞傳代：當(dāng)細胞生長達到 80% - 90% 匯合度時，需要進行傳代培養(yǎng) 。首先，棄去細胞培養(yǎng)瓶中的舊培養(yǎng)基，用無菌的 PBS 緩沖液輕輕沖洗細胞 1 - 2 次，去除殘留的培養(yǎng)基和代謝產(chǎn)物。然后，加入適量的胰蛋白酶 - EDTA 消化液（根據(jù)培養(yǎng)瓶大小而定），輕輕搖晃培養(yǎng)瓶，使消化液均勻覆蓋細胞表面，在 37℃培養(yǎng)箱中孵育 1 - 3 分鐘，觀察細胞形態(tài)變化，當(dāng)細胞變圓、部分細胞開始脫落時，立即加入含血清培養(yǎng)基終止消化（血清中的蛋白可中和胰蛋白酶活性） 。用無菌的移液管輕輕吹打細胞，使細胞脫離培養(yǎng)瓶壁，形成細胞懸液。將細胞懸液轉(zhuǎn)移至無菌離心管中，以低速離心（如 800 - 1000 rpm，離心 3 - 5 分鐘），棄去上清液。根據(jù)實驗需求，將細胞重新接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，補充適量的含血清培養(yǎng)基，放入細胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng) 。
細胞凍存：當(dāng)細胞生長狀態(tài)良好且數(shù)量足夠時，可進行細胞凍存，以備后續(xù)實驗使用 。首先，將細胞按照上述傳代步驟消化并制成細胞懸液，然后以低速離心（如 800 - 1000 rpm，離心 3 - 5 分鐘），棄去上清液。向細胞沉淀中加入適量的細胞凍存液（通常為含 10% DMSO、90% 胎牛血清的培養(yǎng)基），輕輕吹打，使細胞均勻分散于凍存液中 。將細胞懸液分裝到無菌的凍存管中，每管體積一般為 1 - 2 mL，并做好標記（注明細胞名稱、凍存日期、批號等信息） 。將凍存管放入程序降溫盒中，置于 - 80℃冰箱中過夜，然后轉(zhuǎn)移至液氮罐中長期保存 。
血清保存：未開封的血清應(yīng)儲存于 - 20℃冰箱中，可保存 5 年 。避免反復(fù)凍融，因為凍融過程會破壞血清中的蛋白結(jié)構(gòu)，影響血清性能。若血清需多次使用，可在開封后將其分裝成小份（根據(jù)每次使用量確定分裝體積），密封好后放入 - 20℃冰箱冷凍保存，每次使用時取出一份，避免整瓶血清多次凍融 。已開封的血清，若短時間內(nèi)使用（1 - 2 周），可儲存于 2 - 8℃冰箱；若長時間不用，仍需分裝后冷凍保存 。
廢棄物處理：實驗過程中產(chǎn)生的廢棄血清、培養(yǎng)基以及含有細胞的液體等，應(yīng)按照實驗室生物安全和化學(xué)廢棄物處理規(guī)定進行分類處理 。對于含有生物活性物質(zhì)的廢棄物，需進行高壓滅菌或化學(xué)消毒處理后，再進行丟棄，防止污染環(huán)境和傳播生物危害 。
血清儲存與解凍：
嚴格按照規(guī)定的溫度儲存血清，避免因儲存溫度不當(dāng)導(dǎo)致血清變質(zhì)。從 - 20℃冰箱中取出血清進行解凍時，應(yīng)將血清置于 2 - 8℃冰箱中緩慢解凍，或采用水浴解凍的方式，但水浴溫度不得超過 37℃，且解凍過程中需不斷輕輕搖晃血清瓶，使血清均勻解凍 。避免將血清暴露在高溫環(huán)境下快速解凍，以免引起血清中蛋白沉淀和活性降低。
解凍后的血清應(yīng)盡快使用，若不能立即使用，應(yīng)儲存于 2 - 8℃冰箱中，并在一周內(nèi)用完。若血清出現(xiàn)渾濁或沉淀，可通過低速離心（如 1000 - 2000 rpm，離心 5 - 10 分鐘）去除沉淀后使用，但需注意沉淀可能會影響血清的部分性能 。
細胞培養(yǎng)操作：
在細胞培養(yǎng)過程中，要嚴格遵守?zé)o菌操作規(guī)范，在超凈工作臺中進行所有操作，使用前需對超凈工作臺進行紫外消毒和風(fēng)機預(yù)吹處理 。操作時應(yīng)佩戴口罩、手套，避免交叉污染。每次使用完移液管、槍頭等耗材后，應(yīng)及時丟棄，不得重復(fù)使用。
不同類型的細胞對血清的需求和耐受性不同，在進行新的細胞培養(yǎng)實驗前，建議進行預(yù)實驗，摸索最佳的血清添加比例和培養(yǎng)條件 。同時，注意觀察細胞的生長狀態(tài)，如細胞形態(tài)、增殖速度、存活率等，根據(jù)細胞狀態(tài)及時調(diào)整培養(yǎng)條件。
在更換培養(yǎng)基時，盡量減少細胞暴露在空氣中的時間，避免培養(yǎng)基干涸和細胞脫水。更換培養(yǎng)基的頻率應(yīng)根據(jù)細胞的生長速度和代謝情況而定，一般為 1 - 2 天更換一次，以保證細胞能夠獲得充足的營養(yǎng)物質(zhì)和良好的生長環(huán)境 。
安全防護：血清中可能含有未知的生物活性物質(zhì)，雖然經(jīng)過嚴格檢測，但在操作過程中仍需注意個人防護 。避免血清接觸皮膚和眼睛，如不慎接觸，應(yīng)立即用大量清水沖洗，并根據(jù)情況就醫(yī)。實驗結(jié)束后，及時清洗實驗器材和操作臺，保持實驗室環(huán)境整潔安全 。
細胞生長緩慢或不生長：
原因：可能是血清添加比例不合適、血清質(zhì)量不佳、培養(yǎng)基營養(yǎng)成分不足、細胞污染或培養(yǎng)條件不適宜等 。
解決方法：嘗試調(diào)整血清添加比例，增加或減少血清用量，觀察細胞生長情況；檢查血清的批號和質(zhì)量檢測報告，確認血清是否合格，必要時更換新批次的血清；檢查培養(yǎng)基的配制是否正確，是否添加了足夠的營養(yǎng)物質(zhì)；對細胞進行微生物污染檢測，如支原體檢測等，若發(fā)現(xiàn)污染，及時采取措施處理；優(yōu)化培養(yǎng)條件，如調(diào)整溫度、CO?濃度、濕度等，確保細胞處于適宜的生長環(huán)境 。
細胞出現(xiàn)大量死亡：
原因：可能是血清中含有毒素或有害物質(zhì)、細胞受到微生物污染、消化過度、培養(yǎng)環(huán)境突然改變等 。
解決方法：檢測血清中的內(nèi)毒素含量和其他有害物質(zhì)，若血清存在問題，更換新的血清；對細胞和培養(yǎng)環(huán)境進行微生物檢測，找出污染源并進行處理；優(yōu)化細胞消化步驟，控制消化時間和消化液濃度，避免消化過度；在更換培養(yǎng)基、轉(zhuǎn)移細胞等操作時，盡量保持培養(yǎng)環(huán)境的穩(wěn)定，減少對細胞的刺激 。
培養(yǎng)基出現(xiàn)渾濁：
原因：可能是培養(yǎng)基受到微生物污染、血清中存在雜質(zhì)或沉淀、細胞代謝產(chǎn)物積累過多等 。
解決方法：對培養(yǎng)基進行微生物培養(yǎng)檢測，確定是否污染，若污染，丟棄污染的培養(yǎng)基，并對培養(yǎng)設(shè)備和環(huán)境進行消毒；將血清進行低速離心，去除沉淀后再使用；增加培養(yǎng)基更換頻率，及時清除細胞代謝產(chǎn)物，保持培養(yǎng)基的清潔 。
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