人白介素8(IL-8)試劑盒主要基于雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)原理,實現(xiàn)對樣本中IL-8的定量檢測。
試劑盒采用高親和力的酶標板,預先包被特異性抗人IL-8抗體作為固相抗體。檢測時,將待測樣本或標準品加入酶標板孔中,樣本中的IL-8會與固相抗體結(jié)合。經(jīng)過孵育后,加入生物素化的抗人IL-8檢測抗體,該抗體與結(jié)合在固相抗體上的IL-8特異性結(jié)合。隨后,加入辣根過氧化物酶標記的鏈霉親和素(SA-HRP),生物素與親和素特異性結(jié)合,形成固相抗體-人IL-8-生物素標記抗體-SA-HRP的夾心復合物。
未結(jié)合的物質(zhì)通過洗滌步驟去除,之后加入顯色底物四甲基聯(lián)苯胺(TMB)。在辣根過氧化物酶的催化下,TMB發(fā)生酶促反應,產(chǎn)生藍色物質(zhì)。加入終止液后,藍色轉(zhuǎn)變?yōu)辄S色。顏色的深淺與樣本中IL-8的濃度成正比。
使用酶標儀在450nm波長下測定吸光度值(OD值),結(jié)合預先繪制的標準曲線,根據(jù)OD值即可計算出樣品中IL-8的濃度。該試劑盒具有高靈敏度和特異性,能夠準確檢測樣本中微量的IL-8,在炎癥性疾病、腫瘤研究等領域具有重要的臨床應用價值。操作過程中需嚴格控制實驗條件,確保檢測結(jié)果的準確性和可靠性。
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