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PUREfrex®1.0無(wú)細(xì)胞蛋白合成試劑盒組分及使用方法
PUREfrex®1.0于2011年推出，是基于PURE system開(kāi)發(fā)的無(wú)細(xì)胞蛋白合成試劑盒，由轉(zhuǎn)錄、翻譯、能量再生所需的蛋白和核糖體組成。
圖2.PUREfrex®使用流程
PUREfrex®1.0使用方法（僅供參考）：
以20ul反應(yīng)體系為例，如果需要擴(kuò)大體積可以等比例增加對(duì)應(yīng)試劑。
1. 在室溫或37℃下保溫1分鐘使溶液I完-全融解，然后在冰上冷卻。
2. 在冰上融化溶液II和溶液III。
3. 將溶液I，溶液II和溶液III 渦旋后簡(jiǎn)短離心收集管底內(nèi)容物。
4. 根據(jù)下列表格配置反應(yīng)液，每1kb加入模板DNA 1-3ng/ul。
Water | 8-X μL |
Solution I | 10μL |
Solution II | 1μL |
Solution III | 1μL |
Template DNA | X μL |
總體積 | 20ul |
5. 在37°C的heat block或水浴中反應(yīng) 2~4 h，合成蛋白。
6. 分析合成蛋白。通過(guò)SDS-PAGE驗(yàn)證時(shí)，請(qǐng)用水稀釋反應(yīng)液后進(jìn)行電泳。
試劑盒組分：
組分名稱(chēng) | 組分內(nèi)容 | 保存溫度 |
Solution I | Amino acids, NTPs, tRNAs and substrates for enzymes etc. | -20℃ |
Solution II | Proteins in 30 % glycerol buffer | -20℃/-80℃ |
Solution III | Ribosome (20 μM) | -80℃ |
DHFR DNA | PCR product containing a gene encoding dihydrofolate reductase (DHFR) from E.coli as a positive control. (20 ng/μL) | -20℃ |
請(qǐng)注意：1.在打開(kāi)試劑盒之前請(qǐng)將試劑盒儲(chǔ)存在-80°C的溫度下。2.溶液II和溶液III避免反復(fù)凍融。
產(chǎn)品信息：
貨號(hào) | 名稱(chēng) | 規(guī)格 |
GFK-PF001-0.25-EX |
PUREfrex®1.0 | 1 x 250 µl |
GFK-PF001-2ML-EX | 2 ml | |
GFK-PF001-10ML-EX | 5 x 2 ml |
除了以上目錄產(chǎn)品外，Cosmo Bio也能根據(jù)客戶(hù)的需求提供定制的PUREfrex®1.0。PUREfrex®1.0的成分信息是公開(kāi)的，您可以根據(jù)PUREfrex®1.0設(shè)計(jì)定制試劑盒。
PUREfrex®1.0組分
PUREfrex®1.0 Solution I (Buffer, Salts, Substrates)組分 |
Hepes-KOH pH 7.6 |
Potassium glutamate |
Magnesium acetate |
Spermidine |
Dithiothreitol |
10-Formyl-tetrahydrofolate |
4 NTPs |
20 Amino acids |
Creatine phoshate |
tRNA mixture |
PUREfrex®1.0 Solution II (Proteins)組分 |
20 Aminoacyl-tRNA synthetases (ARS) |
Methionyl-tRNA transformylase (MTF) |
3 Initiation factors (IF1, IF2, IF3) |
3 Elongation factors (EF-Tu, EF-Ts, EF-G) |
3 Release factors (RF1, RF2, RF3) |
Ribosome recycling factor (RRF) |
T7 RNA polymerase |
Nucleoside diphosphate kinase (NDK) |
Adenylate kinase (ADK, myokinase) |
Ceatine kinase (CK) |
Pyrophosphatase (PPiase) |
PUREfrex®1.0 Solution III組分 |
Ribosome |
定制應(yīng)用舉例
（-）RF1 | 用于通過(guò)如下圖所示的琥珀抑制合成含有非天然氨基酸的蛋白質(zhì)。 |
（-）T7 RNA polymerase | 可用于檢測(cè)其他RNA聚合酶性能，如大腸桿菌RNA聚合酶。 |
（-）特異性氨基酸和（或）20種氨酰tRNA合成酶 | 用于合成含非天然氨基酸或少于20個(gè)氨基酸的蛋白質(zhì)。 |
圖3.琥珀抑制途徑合成含有非天然氨基酸的蛋白質(zhì)示意圖
當(dāng)您的蛋白質(zhì)需要分子伴侶的幫助或形成二硫鍵以形成正確的構(gòu)象時(shí)，只需向PUREfrex®1.0中添加補(bǔ)充試劑即可。
分子伴侶-幫助蛋白正確折疊，合成可溶形式蛋白質(zhì)
產(chǎn)品貨號(hào) | 產(chǎn)品名稱(chēng) | 規(guī)格 |
GFK-PF003-0.5-EX | DnaK Mix | 500 µl Equivalents |
GFK-PF003-10ML-EX | DnaK Mix | 5 x 2 ml Equivalents |
GFK-PF004-0.5-EX | GroE Mix | 500 µl Equivalents |
GFK-PF004-10ML-EX | GroE Mix | 5 x 2 ml Equivalents |
幫助形成二硫鍵的添加物
產(chǎn)品貨號(hào) | 產(chǎn)品名稱(chēng) | 規(guī)格 |
GFK-PF005-0.5-EX | DsbC Set | 500 µl Equivalents |
GFK-PF005-10ML-EX | DsbC Set | 5 x 2 ml Equivalents |
GFK-PF006-0.5-EX | PDI Set | 500 µl Equivalents |
GFK-PF006-10ML-EX | PDI Set | 5 x 2 ml Equivalents |
更多產(chǎn)品詳情請(qǐng)聯(lián)系Cosmo Bio中國(guó)授權(quán)代理-欣博盛生物
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