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產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

本產(chǎn)品是用于熒光探針檢測(cè)的即用型 qPCR 試劑，可以對(duì)靶片段進(jìn)行實(shí)時(shí)定量 PCR 分析（Quantitative PCR, qPCR）。產(chǎn)品含有經(jīng)過優(yōu)化的緩沖液組分、熱啟動(dòng) Taq DNA聚合酶、dNTPs、MgCl2 和穩(wěn)定劑等所有 qPCR 所需要的成分，用戶只需加入基因組 DNA 或 cDNA 模板、引物和探針即可進(jìn)行探針法 qPCR 反應(yīng)。

產(chǎn)品特點(diǎn)：

1.以 2×Mix 提供，用戶只需準(zhǔn)備模板、引物、探針和 ROX 染料（取決于 qPCR 儀器） 即可以進(jìn)行探針法 qPCR 實(shí)驗(yàn)，非常方便快捷，降低了操作誤差。

2.各成分的濃度和比例都經(jīng)過精心優(yōu)化，反應(yīng)的靈敏度高、特異性強(qiáng)。靈敏度最高時(shí)可以達(dá)到 50 拷貝/反應(yīng)（跟模板質(zhì)量，引物設(shè)計(jì)等相關(guān)）。

3.既可用于TaqMan 探針 qPCR，也可用于分子信標(biāo)探針 qPCR。

4.靈敏度和專一性比染料法 qPCR 更高。

5.含 UNG 防污染檢測(cè)系統(tǒng)添加 UNG（Uracil N-Glycosylase，尿-嘧-啶-N-糖基化酶），可以有效防止因 PCR 產(chǎn)物污染造成的假陽性結(jié)果。

6.可用于基因表達(dá)分析、SNP 分析、拷貝數(shù)分析等實(shí)驗(yàn)。也可以用于定性檢測(cè)。

7.本產(chǎn)品反復(fù)凍融 20 次對(duì)擴(kuò)增效果沒有任何影響。

8.本產(chǎn)品足夠 100 次 20 μL 體系的探針法 qPCR 反應(yīng)。

9.2×探針法 qPCR MasterMix（含 UNG 酶）只能用于科研。

產(chǎn)品參數(shù)：

成分規(guī)格包裝

2×探針法 qPCR Master Mix

（含UNG 酶）1 mL1.5 mL 本色蓋

使用手冊(cè)1 份無

運(yùn)輸及保存

低溫運(yùn)輸，-20℃保存, 不凍融時(shí)保存期限為 24 個(gè)月。如果需要每天使用，可在 4℃放置三周。

自備試劑

DNA 模板、引物、超純水。

使用方法：

1. 如果有 N 個(gè)樣品并且做定量分析，最好設(shè)置 N+7 個(gè)反應(yīng)，多出的 7 個(gè)中，6 個(gè)是做標(biāo)準(zhǔn)曲線的陽性對(duì)照，一個(gè)是陰性對(duì)照（NC）。在 N+7 個(gè) PCR 管中，加入下列成分。如果是做定性分析，則 6 個(gè)做標(biāo)準(zhǔn)曲線的樣品縮減成一個(gè)陽性對(duì)照（PC），用戶

自己需要根據(jù)下表進(jìn)行適當(dāng)修改（把 6 個(gè)標(biāo)曲反應(yīng)改成 1 個(gè)陽性對(duì)照反應(yīng)）。

成分N 個(gè)樣品管6 個(gè)標(biāo)準(zhǔn)

曲線管NC 管

2×探針法

qPCR MasterMix

各 10 μL

各 10 μL

10 μL

自備引物 1（10 μM）各 1 μL各 1 μL1 μL

自備引物 2（10 μM）各 1 μL各 1 μL1 μL

自備模板 DNA

基因組 DNA10-100 ng不加不加

或 cDNA1-10 ng不加不加

自備陽性對(duì)照模板（6 個(gè)梯度）

不加各 1 μL

（各加 1

個(gè)梯度）

不加

陰性對(duì)照模板（一般用水）不加不加1 μL

自備探針（0.5 μM）各 1 μL各 1 μL1 μL

自備 50×自備

ROX I 或 ROX II 染料（見注）各 0.4 μL各 0.4 μL0.4 μL

補(bǔ)超純水到20 μL20 μL20 μL

2.放入熒光 PCR 儀中進(jìn)行擴(kuò)增, 下表的擴(kuò)增參數(shù)僅供參考，一定需要根據(jù)靶分子長度， 引物和探針的 Tm 值、標(biāo)記染料的種類等進(jìn)行調(diào)節(jié)。一般選擇三步法PCR：

如果引物 Tm 值接近 60℃，也可以選擇兩步法 PCR：

3.數(shù)據(jù)處理

如果把本試劑盒用于定量檢測(cè)，則以陽性對(duì)照濃度的 log 值為橫軸，以 Ct 值為縱軸， 繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。再以待測(cè)樣品的 Ct 值從標(biāo)準(zhǔn)曲線上推算出樣品 DNA 濃度的 log 值， 再推算出其濃度。

如果把本試劑盒用于定性檢測(cè)，只判斷陽性或陰性。一般情況下，陰性對(duì)照 Ct 大于

或等于 40。陽性對(duì)照必須有熒光對(duì)數(shù)增長，有典型擴(kuò)增曲線，Ct 值應(yīng)該小于或等于

30。對(duì)待測(cè)樣品，如果其 Ct 大于或等于 40 則為陰性，如果小于或等于 35 則為陽性。如果在 35-40 之間，則重復(fù)一次。重復(fù)實(shí)驗(yàn)的 Ct 值如果大于或等于 40 則為陰性，如果小于 40，則為陽性。

附：

下列信息僅供參考，具體以 qPCR 儀器的使用手冊(cè)為準(zhǔn)。

1.不需要 ROX 的機(jī)型：Agilent MX3000 和 MX4000、iCycler IQ、LightCycler 480、 Smart Cycler System、Thermal Cycler Dice Real Time System 等型號(hào)的熒光 PCR 儀器不需要加 ROX 染料，但加入的話也不會(huì)影響整個(gè) qPCR 分析。

2.需要使用 ROX I 的機(jī)型：ABI Prism7000、7300、7700、7900HT、Step One、 Step One Plus。

3.需要使用 ROX II 的機(jī)型：ABI Prism7500、7500 Fast、MJ Opticon、MJ

Chromo4、Corbett RotorGene 3000。

選擇我們的2×探針法 qPCR MasterMix（含 UNG 酶），就是選擇精準(zhǔn)、高效、可靠的檢測(cè)方案，為您的科研實(shí)驗(yàn)保駕護(hù)航！