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產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

牛 TdT 牛末端脫氧核糖核苷轉(zhuǎn)移酶，14 U/uL催化 dNTP 聚合于單鏈或雙鏈 DNA 的 3’-OH 末端的反應(yīng)，該反應(yīng)不需要模板，但引物必須是至少有 3 個(gè)以上堿基的寡核苷酸。本產(chǎn)品的用途包括通過(guò) Okayama-Berg 法給載體或 cDNA 加上互補(bǔ)同聚尾，以及使用 dNTP、

ddNTP 來(lái)標(biāo)記 DNA 的 3’末端。

產(chǎn)品參數(shù)：

產(chǎn)品規(guī)格

5×末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶緩沖液的配方是：500 mM HEPES，pH 7.2，40

mM 氯化鎂，0.5 mM DTT。（該緩沖液含有在 DNA 3’末端添加dNTP 實(shí)驗(yàn)的主要成分）

活性定義：以DNase 處理后的熱變性小牛胸腺 DNA 為起始物，37℃，pH 7.2

的條件下，1 小時(shí)內(nèi)使 1 nmol 的[3H]dTTP 摻入酸不溶性沉淀物所需的酶量定義為 1 個(gè)活性單位(unit)。

活性定義反應(yīng)液：100 mM 二甲胂酸鈉pH 7.2，8 mM 氯化鎂，0.1 Mm

DTT，0.024%牛血清白蛋白，160 μg/mL 激活的小牛胸腺 DNA，0.5 mM [3H]dTTP。

酶貯存溶液：60 mM 磷酸鉀 pH 7.2，150 mM 氯hua鉀，1 mM DTT，50%甘油。

保存和運(yùn)輸

低溫運(yùn)輸，-20℃保存，有效期 12 個(gè)月。

自備試劑

DNA，NaCl，EDTA，滅菌水，苯-酚/氯仿/異戊醇，無(wú)水乙醇

使用方法：

1. 按下表設(shè)置反應(yīng)體系。

成分用量

自備的 DNA4-5 pmol(3’-termini)

5×末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶緩沖液10 uL

0.1%牛血清白蛋白5 uL

自備的 dGTP（脫氧鳥(niǎo)苷三磷酸）0.05-0.5 mM（終濃度）

TdT（末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶）10-15 U

                自備的滅菌水到 50 uL

2.37℃反應(yīng) 30 分鐘。

3.加入 5 uL 自備的 5 M NaCl 和 1 uL 的 0.5 M EDTA（pH 8.0）。

4.加入 50 uL 自備的（等量）的苯-酚/氯仿/異戊醇（25：24：1），充分

5.混勻，再用冷的自備無(wú)水乙醇沉淀 DNA。

注：影響反應(yīng)的因素有：添加的堿基種類(lèi)(dATP，dTTP，dCTP，dGTP)，緩沖液中的二價(jià)陽(yáng)離子(Mg2+，Mn2+，Co2+)，DNA 末端結(jié)構(gòu)(3’-OH 突出末端，平末端，3’-OH 凹陷末端)。因此，每個(gè)反應(yīng)都需要摸索最適條件。

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