Chromatrap ChIP相關試劑盒
Chromatrap公司技術領域。
Chromatrap為Porvair Science公司旗下的產(chǎn)品。該品牌產(chǎn)品主要為ChIP相關試劑盒。Chromatrap® ChIP 測定技術比傳統(tǒng)磁珠法的效率更高，原因是與蛋白質 A 或 G結合的固相多孔聚合物捕獲染色質的效率更高。盡管同樣是使用離心柱法，但其優(yōu)勢是瓊脂糖珠或磁珠遠不可相比的
介紹
在轉錄過程中，新生RNA可以與DNA模板鏈雜交，使非模板DNA鏈成為單鏈。這些結構被稱為 R 環(huán)，它們的持續(xù)形成會對基因組完整性造成有害影響，這可能是由于未配對的單鏈 DNA （ssDNA）
盡管R環(huán)有可能在基因組的很大一部分上形成，但它們并不是轉錄的簡單結果。由于 DNA 序列、轉錄、拓撲和染色質環(huán)境的復雜相互作用，它們發(fā)生在特定的保守位點上 （切丹， 2016）。在具有未甲基化 CpG 島啟動子的活性哺乳動物蛋白質編碼基因上，R 環(huán)富集在啟動子和終止位點上并增強激活，并且它們與活性轉錄的組蛋白標記相關，例如組蛋白 H3 賴氨酸 4 的單甲基化和三甲基化 （H3K4me1/3） 和 H3 乙?；?R-loops可以作為轉錄激活因子，但它們也可以通過各種機制誘導不同細胞類型的轉錄抑制.R環(huán)在激活或抑制中的這種“雙重"功能強烈表明，R環(huán)的形成在不同的情況下可以具有不同的作用和機制。
Polycomb 組（PcG） 蛋白是轉錄抑制的主要表觀遺傳調節(jié)因子，它們需要沉默胚胎干細胞 （ESC） 中富含 CpG 的發(fā)育調節(jié)基因，并維持在細胞承諾期間建立的基因表達模式 它們組裝在兩個主要的多亞基復合物中：Polycomb 抑制復合物 1 （PRC1） 和 PRC2。PRC1 和 PRC2 的催化組分分別為 RING1B 和 EZH2。RING1B 單泛素化賴氨酸 119 （H2Aub1） 中的組蛋白 H2A，EZH2 是一種甲基轉移酶，負責賴氨酸 27 （H3K27me2/3） 中 H3 的二甲基化和三甲基化。
Polycomb介導的轉錄抑制機制尚不wan全清楚。盡管它們在抑制中起作用，但小鼠胚胎干細胞 （mESC） 中的 PcG 靶基因顯示活性染色質標記 H3K4me3、RNA 聚合酶 II （Pol II） 和一般轉錄因子。Pol II 在 PcG 抑制基因的啟動子和編碼區(qū)上檢測到，并表現(xiàn)出其 C 末端結構域 （CTD） 的絲氨酸 5 磷酸化 （Ser5P），但不表現(xiàn)出 Ser2P 或 Ser7P，后者是生產(chǎn)性轉錄延伸的標志物.與沉穩(wěn)的Pol II的存在一致，在一些PcG靶標
例如，轉錄本身起著一定的作用，因為僅基因沉默就可以促進PRC2募集到CpG島啟動子.建議通過PRC2（Wang 等人，2004,Boyer 等人，2006 年）。然而，非經(jīng)典 PRC1（含有 RYBP 而不是 CBX）也可以通過 KDM2B 賴氨酸去甲基化酶
迄今為止，已經(jīng)在人類 ESC 中探索了 PcG 靶基因上 R 環(huán)的存在，其中基于生物信息學分析檢測到正相關 （Ginno 等人2013 年），在分化的小鼠成纖維細胞（NIH 3T3 系）中，報告了負相關 （Sanz 等人，2016 年).因此，目前尚不清楚PcG抑制機制是否以及如何受到R環(huán)的調節(jié)。
在這里，我們使用 mESC 來探索 R 環(huán)對 PcG 抑制機制的貢獻。我們發(fā)現(xiàn) R 環(huán)在 PcG 靶標處形成，R 環(huán)丟失導致 PcG 募集不足和 Pol II 的鎮(zhèn)定狀態(tài)改變，導致基因去抑制。全基因組分析表明，R環(huán)的形成不是低轉錄水平的微不足道的結果，并且僅發(fā)生在PcG抑制基因的一個子集上。單獨敲除組成型 EZH2 （PRC2） 不足以影響 R 環(huán)或 RING1B （PRC1） 募集，也不會導致 R 環(huán)陽性基因的轉錄去抑制。相反，在這些情況下去除 R 環(huán)會導致基因激活并減少 RING1B 募集。在抑制 EZH2 催化活性后，R 環(huán)和 RING1B 可以抑制 PcG 靶標。我們的研究結果揭示了 R 環(huán)和 PRC1 募集之間意想不到的相互作用，這有助于 PcG 抑制。
結果
R-環(huán)在 PcG 抑制基因上形成為了研究 R 環(huán)是否在 PcG 介導的轉錄沉默中發(fā)揮作用，我們使用 DNA-RNA 免疫沉淀（DIP 或 DRIP）分析 （Skourti-Stathaki 等人，2011 年,Ginno 等人，2012 年,Ginno 等人，2013 年,Skourti-Stathaki 等人，2014 年,Sanz 等人，2016 年） 在 mESC 中。我們選擇了五個先前表征的基因，即 Msx1、Math1、Nkx2.2、Nkx2.9 和 Gata4。這些基因具有注釋良好的 CpG 島啟動子，在其啟動子和編碼區(qū)富含 GC，并且在 mESC 中由 PRC1、PRC2 和穩(wěn)固的 Ser5P Pol II （Stock 等人，2007 年,Brookes 等人，2012 年,Ferrai 等人，2017 年).用 RNA-DNA 雜交特異性抗體 S9.6 （Boguslawski 等人，1986 年），并使用位于含有轉錄起始位點 （TSS） 的啟動子 （P） 區(qū)域和基因體編碼 （C） 區(qū)域內的引物分析純化的 DNA。作為陽性對照，我們使用了高表達的活性基因 β-肌動蛋白，它在 P 和 C 區(qū)域形成 R 環(huán) （Skourti-Stathaki 等人，2011年,Skourti-Stathaki 等人，2014 年).作為陰性對照，我們使用不形成 R 環(huán)的活性基因 CyclinB1（Skourti-Stathaki 等人，2014 年）和在mESC中既不表達也不與PcG或Pol II相關的基因Myf5（Stock 等人，2007 年,Brookes 等人，2012 年).正如預期的那樣，R-環(huán)在β-肌動蛋白上富集，但在CyclinB1或Myf5上未檢測到。值得注意的是，在所有五個 PcG 抑制基因的 P 和 C 區(qū)域，R 環(huán)都特異性富集。
以下為Chromatrap公司熱銷產(chǎn)品
產(chǎn)品名稱 | 貨號 | 規(guī)格 |
Chromatrap ChIP-seq Pro A | 500189 | 24 |
Chromatrap Enzymatic ChIP-seq Pro A | 500191 | 24 |
Chromatrap ChIP qPCR Pro A | 500071 | 24 |
Chromatrap Enzymatic Shearing | 500165 | 請咨詢 |
Chromatrap Enzymatic ChIP-seq Pro G | 500192 | 24 |
Chromatrap Premium Enzymatic ChIP qPCR Pro A | 500167 | 24 |
Lysis Buffer for sonication 10ml | 100001 | 1 |
Hyptonic Buffer 50ml | 100007 | 1 |
DNA Extraction Columns (50) | 500260 | 50 |
DNA Extraction plate (2x96) | 500261 | 2x96 |
Size Selection Columns (5) | 500262 | 5 |
Size selection Plate (2x96) | 500263 | 2x96 |
Chromatrap® DNA Purification (columns) | 500218 | 50 |
Chromatrap® Gel Purification (columns) | 500219 | 50 |
UniqSeq plus library prep sonication pro A | 500264 | 請咨詢 |
UniqSeq plus library prep sonication pro G | 500265 | 請咨詢 |
UniqSeq plus library prep enzymatic pro A | 500266 | 請咨詢 |
UniqSeq plus library prep enzymatic pro G | 500267 | 請咨詢 |
5mC | 700005 | 100ul |
H3K9me2 | 700023 | 100ul |
Positive Primer Set 9 | 800013 | 請咨詢 |
Negative Primer Set 6 | 800014 | 請咨詢 |
Negative Primer Set 7 | 800015 | 請咨詢 |
ChIP Validated H3K4me1 Antibody with Positive and Negative Primer Sets | 900023 | 請咨詢 |
ChIP Validated H4K5ac Antibody with Positive and Negative Primer Sets | 900024 | 請咨詢 |
ChIP Validated H4K12ac Antibody with Positive and Negative Primer Sets | 900025 | 請咨詢 |
ChIP Validated H3K9me1 Antibody with Positive and Negative Primer Sets | 900026 | 請咨詢 |
ChIP Validated H3K9me2 Antibody with Positive and Negative Primer Sets | 900027 | 請咨詢 |
ChIP Validated H3K4me1 Antibody with Positive Primer Set | 900028 | 請咨詢 |
ChIP Validated H4K5ac Antibody with Positive Primer Set | 900029 | 請咨詢 |
ChIP Validated H4K12ac Antibody with Positive Primer Set | 900030 | 請咨詢 |
ChIP Validated H3K9me1 Antibody with Positive Primer Set | 900031 | 請咨詢 |
ChIP Validated H3K9me2 Antibody with Positive Primer Set | 900032 | 請咨詢 |
ChIP Validated H3, Clone RM188 Antibody with Positive Primer Set | 900033 | 請咨詢 |
ChIP Validated H2Az Antibody with Positive Primer Set | 900034 | 請咨詢 |
ChIP Validated H4 Antibody with Positive Primer Set | 900035 | 請咨詢 |
Chromatrap ChIP-seq Pro G | 500190 | 24 |
Chromatrap HT ChIP-seq Pro A | 500214 | 96 |
Chromatrap HT ChIP-seq Pro G | 500215 | 96 |
Chromatrap HT Enzymatic ChIP-seq Pro A | 500216 | 96 |
Chromatrap HT Enzymatic ChIP-seq Pro G | 500217 | 96 |
Chromatrap ChIP qPCR Pro G | 500117 | 24 |
Chromatrap Premium ChIP qPCR Pro A | 500115 | 24 |
Chromatrap Premium ChIP qPCR Pro G | 500116 | 24 |
H3K9ac | 700024 | 100ul |
H3K36me2 | 700025 | 100ul |
Chromatrap HT ChIP-qPCR Pro A | 500161 | 96 |
Chromatrap HT ChIP-qPCR Pro G | 500163 | 96 |
Chromatrap HT Enzymatic ChIP-qPCR Pro A | 500162 | 96 |
Chromatrap HT Enzymatic ChIP-qPCR Pro G | 500164 | 96 |
