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36次dànbáizhì組學(xué)測(cè)序?qū)悠返馁|(zhì)量和處理有著嚴(yán)格的要求,以確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可重復(fù)性。以下是進(jìn)行dànbáizhì組測(cè)序時(shí)對(duì)樣品的主要要求:
圖1. dànbáizhì質(zhì)譜測(cè)序原理
一、樣品純度
高純度:樣品中的dànbáizhì需要盡可能純凈,避免核酸、脂質(zhì)和其他非dànbáizhì成分的干擾。
去污染:避免外源性dànbáizhì(如酶、抗體等)的污染,這些可能來(lái)自實(shí)驗(yàn)材料或操作過程。
二、樣品濃度
適宜濃度:樣品的dànbáizhì濃度需要達(dá)到質(zhì)譜分析的zuì低要求,通常需要使用特定的方法(如BCA、Bradford或Lowry)準(zhǔn)確測(cè)定。過低或過高的dànbáizhì濃度都會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。過低的濃度可能導(dǎo)致目標(biāo)dànbáizhì在質(zhì)譜分析中難以檢測(cè),而過高的濃度可能導(dǎo)致儀器過載或樣品處理困難。
三、樣品量
足夠的樣品量:除了濃度,總的樣品量(即總蛋白量)也是一個(gè)重要考慮因素。根據(jù)所使用的質(zhì)譜儀器和分析方法,所需的樣品量可以從微克到毫克不等。
四、樣品保存和處理
適當(dāng)保存:樣品應(yīng)在適當(dāng)?shù)臈l件下保存,通常是在-80°C下冷凍保存,避免反復(fù)凍融,以防dànbáizhì降解或變性。
溫和處理:樣品處理過程應(yīng)盡量溫和,避免使用強(qiáng)力的物理或化學(xué)方法,以防dànbáizhì變性或降解。
五、樣品兼容性
質(zhì)譜兼容性:樣品處理過程中使用的試劑和緩沖液應(yīng)與后續(xù)的質(zhì)譜分析相兼容,避免使用可能干擾質(zhì)譜檢測(cè)的試劑,如含有高濃度鹽、去垢劑或某些防腐劑。
六、特殊樣品
對(duì)于凝膠條帶,SDS-PAGE凝膠分離的dànbáizhì樣品,KOMAS和SYPRO Ruby染色的dànbáizhì條帶與質(zhì)譜鑒定具有良好的兼容性。但對(duì)于銀染蛋白,不得使用戊二醛作為固定劑,否則會(huì)影響后續(xù)的質(zhì)譜分析。
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