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技術(shù)原理
       首先設(shè)計根據(jù)需求設(shè)計shRNA引物一套，完成引物退火。將載體進行雙酶切反應，雙酶切后割膠回收。將shRNA和雙酶切回收后的載體，使用試劑盒進行重組成環(huán)狀片段，轉(zhuǎn)入制備好的細菌感受態(tài)細胞，對長出的單克隆菌落送測序公司進行測序鑒定，比對正確的克隆即為構(gòu)建成功的shRNA表達載體。
       shRNA的靶點選擇決定著對靶向基因的表達敲低效果，通常涉及3-4個shRNA靶點同時進行實驗，根據(jù)后續(xù)檢測結(jié)果確定最佳靶點后，安排后續(xù)實驗。
實驗方法

技術(shù)總結(jié)
       體內(nèi)抑制效果強：
       shRNA表達載體生物體內(nèi)的抑制效果強于普通合成的siRNA，且能與組織特異性定位啟動子協(xié)同作用。 
       誘導表達功能：
       科研人員可以通過shRNA表達載體服務建立可誘導表達系統(tǒng)，控制siRNA的表達。
       轉(zhuǎn)染細胞易富集：
       載體上可附加抗生素抗性，篩除未轉(zhuǎn)染的細胞，輕松富集有沉默潛力的細胞。
       干擾效果長期有效：
       shRNA表達載體能幫助研究人員獲得穩(wěn)定細胞系，并保證RNA干擾的長期性。 
       實驗操作簡便：
       shRNA表達載體將以質(zhì)粒的形式寄給客戶，這種形式比一般合成的siRNA更加穩(wěn)定，操作也更加簡單。同時，由于載體可重復操作，客戶使用更加方便。 
       優(yōu)惠的價格：
       shRNA表達載體的可重復操作性降低了其高通量應用的價格，滿足了siRNA客戶的大量需求。 
       可用于基因治療：
       構(gòu)建在病毒載體上的shRNA能被應用于感染基因治療核心細胞系。