詳細(xì)介紹
HEPES液(1M)
Hepes緩沖液的主要成分是(2-[4-(2-Hydroxyethyl)-1-piperazinyl]ethanesulfonic acid),HEPES是一種非離子兩性緩沖液,其在pH 7.2 - 7.4 范圍內(nèi)具有較好的緩沖能力。其優(yōu)點(diǎn)是在開放式培養(yǎng)或細(xì)胞觀察時(shí)能維持較恒定的PH值.在這種培養(yǎng)條件下,細(xì)胞培養(yǎng)瓶的蓋子應(yīng)擰緊,以防止培養(yǎng)液中所需的少量碳酸鹽散入空氣中。
大多數(shù)培養(yǎng)液中含有酚紅作為pH指示劑,酸性培養(yǎng)液呈橙黃色,堿性培養(yǎng)液呈深紅色.HEPES有些昂貴,在高濃度時(shí)對一些細(xì)胞可能有毒. 原則上,hepes緩沖液可用來代替碳酸氫鹽,以解除需要高濃度CO2培養(yǎng)環(huán)境的限制.實(shí)際操作中并非如此簡單。溶解的CO2與碳酸氫鹽對良好的細(xì)胞生長也是很重要的。
HEPES液(1M)
含238.3g/L HEPES。2-8℃保存
至于選擇何種培養(yǎng)基并沒有一定的標(biāo)準(zhǔn),有幾點(diǎn)建議可供參考:
(1)建立某種細(xì)胞株所用的培養(yǎng)基應(yīng)該是培養(yǎng)這種細(xì)胞的培養(yǎng)基??梢圆殚唴⒖嘉墨I(xiàn),或在購買細(xì)胞株時(shí)咨詢。也可以在一些生物公司的網(wǎng)站上搜索,如Invitrogen網(wǎng)站上有一個(gè)Cell Line Database的工具,選擇你感興趣的細(xì)胞類型,它就會(huì)彈出推薦的培養(yǎng)基、血清和轉(zhuǎn)染試劑等,有時(shí)還有優(yōu)化好的轉(zhuǎn)染步驟,很方便。
(2) 其它實(shí)驗(yàn)室慣用的培養(yǎng)基不妨一試,許多培養(yǎng)基可以適合多種細(xì)胞。
(3) 根據(jù)細(xì)胞株的特點(diǎn)、實(shí)驗(yàn)的需要來選擇培養(yǎng)基。如小鼠細(xì)胞株多選RPMI1640 。
(4) 用多種培養(yǎng)基培養(yǎng)目的細(xì)胞,觀察其生長狀態(tài),可以用生長曲線、集落形成率等指標(biāo)判斷,根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果選擇培養(yǎng)基,這是客觀的方法,但比較繁瑣。