二手安捷倫1200液相色譜儀基本原理    一、實驗目的  1. 了解高效液相色譜法分離的基本原理； 2. 了解高效液相色譜儀的基本構造； 3. 了解高效液相色譜儀的基本操作。 

二、基本原理  高效液相色譜（HPLC）法是以高壓下的液體為流動相，并采用顆粒極細的高效固定相的柱色譜分離技術。高效液相色譜對樣品的適用性廣，不受分析對象揮發(fā)性和熱穩(wěn)定性的限制，因而彌補了氣相色譜法的不足。

二手安捷倫1200液相色譜儀分析原理：  （一）高效液相色譜分析的流程：由泵將儲液瓶中的溶劑吸入色譜系統(tǒng)，然后輸出，經流量與壓力測量之后，導入進樣器。被測物由進樣器注入，并隨流動相通過色譜柱，在柱上進行分離后進入檢測器，檢測信號由數(shù)據(jù)處理設備采集與處理，并記錄色譜圖。廢液流入廢液瓶。遇到復雜的混合物分離（極性范圍比較寬）還可用梯度控制器作梯度洗脫。 （二）高效液相色譜的分離過程：同其他色譜過程一樣，HPLC也是溶質在固定相和流動相之間進行的一種連續(xù)多次交換過程。它借溶質在兩相間分配系數(shù)、親和力、吸附力或分子大小不同而引起的排阻作用的差別使不同溶質得以分離。

開始樣品加在柱頭上，假設樣品中含有３個組分，Ａ、Ｂ和Ｃ，隨流動相一起進入色譜柱，開始在固定相和流動相之間進行分配。分配系數(shù)小的組分Ａ不易被固定相阻留，較早地流出色譜柱。分配系數(shù)大的組分Ｃ在固定相上滯留時間長，較晚流出色譜柱。組分Ｂ的分配系數(shù)介于Ａ，Ｃ之間，第二個流出色譜柱。若一個含有多個組分的混合物進入系統(tǒng)，則混合物中各組分按其在兩相間分配系數(shù)的不同先后流出色譜柱，達到分離之目的。

不同組分在色譜過程中的分離情況，首先取決于各組分在兩相間的分配系數(shù)、吸附能力、親和力等是否有差異，這是熱力學平衡問題，也是分離的首要條件。其次，當不同組分在色譜柱中運動時，譜帶隨柱長展寬，分離情況與兩相之間的擴散系數(shù)、固定相粒度的大小、柱的填充情況以及流動相的流速等有關。所以分離終效果則是熱力學與動力學兩方面的綜合效益。

 三、系統(tǒng)構成  1.主機：Waters Allance 2695高效液相色譜儀,分為①分離單元Allance2695；②紫外－可見檢測器2487；③熒光檢測器2474；④示差折光檢測器2414。 2.操作控制系統(tǒng)：DELL Dimmsen 4550微機；Waters Millunnium32 V4.0 色譜管理器軟件。