美國藥典第<86>章允許使用非動物來源的試劑進行細菌內毒素檢測，包括使用重組級聯(lián)試劑（rCR，Recombinant Cascade Reagent）和重組C因子試劑（rFC，Recombinant Factor C）。本文展示了Sievers®Eclipse細菌內毒素（BET，Bacterial Endotoxins Testing）檢測儀與rCR試劑在化驗各種藥品時的適用性和相容性，為鱟試劑（LAL，Limulus Amoebocyte Lysate）細菌內毒素檢測提供了高效、非動物來源的替代方法。
我們對7種已發(fā)布的市售產品進行了方法適用性和優(yōu)化分析。我們用Sievers Eclipse細菌內毒素檢測儀運行了一個批次的市售重組級聯(lián)試劑（rCR），并對比了同一生產商的動態(tài)顯色法鱟試劑。在本研究中測試的7種市售產品列于表1中。
表1：用Eclipse測試的產品
Sievers Eclipse細菌內毒素檢測儀采用動態(tài)方法來分析標準曲線和最多21個帶陽性對照（PPC，Positive Product Controls）的樣品。Sievers Eclipse微孔板預置來自參考標準內毒素（RSE，Reference Standard Endotoxin）的標準品和陽性對照（PPC），用戶僅需使用1 mL的鱟試劑即可運行每次最多5點的標準曲線（范圍：50 – 0.005 EU/mL）的化驗。
市售的rCR試劑與顯色法試劑類似，具有LAL級聯(lián)結構。本研究旨在確定這種rCR試劑在進行現(xiàn)實生活樣品測試時的表現(xiàn)是否確實與傳統(tǒng)的動態(tài)顯色法鱟試劑相似。我們用Sievers Eclipse對每種產品分別使用rCR試劑和動態(tài)顯色法試劑進行測試。
我們通過測試不同稀釋倍數(shù)的細菌內毒素檢查用水（LRW，LAL Reagent Water）來對全部產品進行初步篩選，以確定哪種稀釋度可以實現(xiàn)最佳PPC回收率和克服樣品干擾。我們分析的稀釋倍數(shù)包括1:1、1:10、1:20、1:50、1:100。表2是初步篩選出來的各種試劑類型的品名和稀釋倍數(shù)。在測試產品時，我們對胰島素、紅霉素、氯化鉀進行了多種稀釋倍數(shù)的測試，以便在完成產品篩選后得到更多的結果并克服樣品干擾。
表2：產品的稀釋倍數(shù)
測試結果總結如下。表3和表4是標準曲線的結果，表5-10是樣品的結果。
表3：動態(tài)顯色法鱟試劑的5點標準曲線結果：使用Sievers Eclipse測試
表4：重組級聯(lián)試劑的5點標準曲線結果：使用Sievers Eclipse測試
氯化鉀
表5：Sievers Eclipse測試的氯化鉀液結果（每個板上有3或5份重復樣品）
紅霉素
表6：Sievers Eclipse測試的紅霉素液結果（每個板上有3或5份重復樣品）
*一個重復樣品有分孔
**所有3個重復樣品中都有分孔
***一個重復樣品的%CV > 15
5%葡萄糖
表7：Sievers Eclipse測試的5%葡萄糖液結果（每個板上有3份重復樣品）
0.9%氯化鈉
表8：Sievers Eclipse測試的0.9%氯化鈉液結果（每個板上有3份重復樣品）
乳酸林格氏液
表9：Sievers Eclipse測試的乳酸林格氏液結果（每個板上有3份重復樣品）
人胰島素注射液
表10：Sievers Eclipse測試的人胰島素注射液結果（連續(xù)編號的板上有3、5或6份重復樣品）
*一個重復樣品有分孔
注射用水
表11：Sievers Eclipse測試的注射用水結果（每個板上有3份重復樣品）
對于本研究中的大多數(shù)現(xiàn)實生活樣品類型來說，Sievers Eclipse與市售的重組級聯(lián)試劑有適用性和相容性。紅霉素和胰島素樣品均有多個分孔，很可能是由于樣品干擾。如果實驗室考慮使用非動物來源的試劑進行符合USP <86>標準的細菌內毒素檢測，則可以用Sievers Eclipse微孔板來優(yōu)化rCR試劑。
為了便于以后分析，在比較rCR試劑和鱟試劑時，必須進行樣品篩選以確定每種產品的最佳稀釋倍數(shù)。當有更多批次的市售試劑可用時，也應對其進行測試以確認結果的準確度和可重復性。
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