人腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體4試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法（Sandwich ELISA）檢測樣品中靶蛋白的的濃度，其原理見圖2。靶蛋白特異的單克隆捕獲抗體已預(yù)包被于酶標板上，當加入標準品或樣品時，其中的靶蛋白會與捕獲抗體結(jié)合。當加入生物素化的抗靶蛋白抗體后，生物素化抗靶蛋白抗體與靶蛋白結(jié)合，形成夾心的免疫復(fù)合物

 人腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體4試劑盒Annexin V-EGFP細胞凋亡檢測試劑盒(Annexin V-EGFP Apoptosis Detection Kit)是用EGFP標記的重組人Annexin V來檢測細胞凋亡時出現(xiàn)在細胞膜表面的磷酯酰絲氨酸的一種細胞凋亡檢測試劑盒?？梢允褂昧魇郊毎麅x、熒光顯微鏡或其它熒光檢測設(shè)備進行檢測。
      Annexin是一類廣泛分布于真核細胞細胞漿內(nèi)鈣離子依賴的磷酯結(jié)合蛋白，參與細胞內(nèi)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)。但僅Annexin V被報道可以調(diào)控一些PKC的活性。
      Annexin V選擇性結(jié)合磷酯酰絲氨酸(phosphatidylserine，簡稱PS)。磷酯酰絲氨酸主要分布在細胞膜內(nèi)側(cè)，即與細胞漿相鄰的一側(cè)。在細胞發(fā)生凋亡的早期，不同類型的細胞都會把磷酯酰絲氨酸外翻到細胞表面，即細胞膜外側(cè)。磷酯酰絲氨酸暴露到細胞表面后會促進凝血和炎癥反應(yīng)。而Annexin V和外翻到細胞表面的磷酯酰絲氨酸結(jié)合后可以阻斷磷酯酰絲氨酸的促凝血和促炎癥反應(yīng)活性。
      用帶有綠色熒光的熒光探針EGFP標記的Annexin V，即Annexin V-EGFP，就可以用流式細胞儀或熒光顯微鏡非常簡單而直接地檢測到磷酯酰絲氨酸的外翻這一細胞凋亡的重要特征。
       人腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體4試劑盒還提供了碘化丙啶染色液，碘化丙啶(Propidium Iodide, PI)可以染色壞死細胞或凋亡晚
期喪失細胞膜完整性的細胞，呈現(xiàn)紅色熒光。對于壞死細胞，由于細胞膜的完整性已經(jīng)喪失，Annexin V-EGFP可以進入到細胞漿內(nèi)，與位于細胞膜內(nèi)側(cè)的磷酯酰絲氨酸結(jié)合，從而也使壞死細胞呈現(xiàn)綠色熒光。
      綜上所述，用Annexin V-EGFP和碘化丙啶染色后，正常的活細胞不被Annexin V-EGFP和碘化丙啶染色；凋亡早期的細胞僅被Annexin V-EGFP染色，碘化丙啶染色呈陰性；壞死細胞和凋亡晚期的細胞可以同時被Annexin V-EGFP和碘化丙啶染色。
      一個包裝的本試劑盒共可以檢測50個樣品。 
注意事項：
      如果有細菌或真菌污染，會嚴重影響檢測效果。
      染色后宜盡快檢測，時間過長可能會導(dǎo)致凋亡或壞死細胞的數(shù)量增加。
      如果細胞收集過程中使用了胰酶，需注意設(shè)法去除殘留的胰酶。殘留的胰酶會消化并降解Annexin V-EGFP，zui終導(dǎo)致染色失敗。
      熒光物質(zhì)均易發(fā)生淬滅，在進行熒光觀察時，盡量縮短觀察時間，同時在操作和存放過程中也盡量注意避光保存。
      需自備PBS。
       僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
      為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

人神經(jīng)母細胞瘤細胞    SH-SY5Y    DMEM+10% FBS     貼壁/懸浮混合    上皮細胞樣
大鼠乳腺癌細胞    SHZ-88    RPMI-1640+10% FBS    貼壁    上皮細胞樣
人子宮頸鱗癌細胞    SiHa    DMEM+10% FBS    貼壁    上皮細胞樣
人乳腺癌細胞    SK-BR-3    DMEM+10% FBS    貼壁    上皮細胞樣
人肝癌細胞    SK-Hep-1    MEM+10% FBS    貼壁    上皮細胞樣
人肺鱗癌細胞    SK-MES-1    MEM +10% FBS    貼壁    上皮細胞樣
人神經(jīng)母細胞瘤細胞    SK-N-SH    MEM+10% FBS    貼壁    上皮細胞樣
人卵巢癌細胞    SK-OV-3    McCoy’s 5A +10% FBS    貼壁    上皮細胞樣
人肝癌細胞    SMMC-7721    RPMI-1640+10% FBS    貼壁    上皮細胞樣
小鼠骨髓瘤細胞    SP2/0    RPMI-1640+10% FBS    懸浮    淋巴細胞樣
人肺癌細胞    SPC-A-1    DMEM+10% FBS    貼壁    上皮細胞樣
豬睪丸細胞    ST    DMEM+10% FBS    貼壁    成纖維細胞
小鼠胚成纖維細胞    STO    DMEM+10% FBS    貼壁    成纖維細胞
小鼠淋巴結(jié)內(nèi)皮細胞    SVEC4-10    DMEM+10% heat-inactivated FBS    貼壁    上皮細胞樣
人膀胱上皮永生化細胞    SV-HUC-1    F-12K+10% FBS    貼壁    上皮細胞樣
人結(jié)腸癌細胞    SW480    L-15+10% FBS(不需CO2)    貼壁    上皮細胞樣
人甲狀腺鱗癌細胞      SW579    L-15+10% FBS(不需CO2)    貼壁    上皮細胞樣
人結(jié)腸癌細胞    SW620    L-15+10% FBS(不需CO2)    貼壁    上皮細胞樣
人卵巢癌細胞    SW626    L-15+10% FBS(不需CO2)    貼壁    上皮細胞樣
人膀胱移行細胞癌細胞    T24    RPMI-1640+10% FBS    貼壁    上皮細胞樣
人乳腺管癌細胞    T-47D    DMEM+10% FBS    貼壁    上皮細胞樣
人結(jié)腸腺癌肺轉(zhuǎn)移細胞    T84    DMEM:F12 +5% FBS    貼壁    上皮細胞樣
人舌鱗癌細胞    Tca-8113    RPMI-1640+20% FBS    貼壁    上皮細胞樣
人食管癌細胞    TE-1    RPMI-1640+10% FBS    貼壁    上皮細胞樣
人血液白血病細胞    TF-1    RPMI-1640+2ng/mL rhGM-CSF+10% FBS    半懸浮    淋巴母細胞
人髓系白血病單核細胞    THP-1    RPMI-1640+10% FBS    懸浮    單核細胞
小鼠睪丸間質(zhì)細胞    TM3    DMEM/F12+5%馬血清+2.5% FBS                                                                                                                                                                                                                      貼壁    上皮細胞樣
人舌鱗癌細胞    TSCCa            
人骨肉瘤細胞    U-2 OS    McCoy's 5A+10% FBS    貼壁    上皮細胞樣
人神經(jīng)膠質(zhì)瘤細胞    U251    DMEM+10% FBS    貼壁    成纖維細胞樣
人腦星形膠質(zhì)母細胞瘤細胞    U-87 MG    MEM+10% FBS    貼壁    上皮細胞樣
人組織細胞淋巴瘤細胞    U-937    RPMI-1640+10% FBS    懸浮    單核細胞
倉鼠肺細胞    V79    RPMI-1640+20% FBS    貼壁    成纖維細胞
人前列腺癌細胞    VCaP    DMEM+10% FBS    貼壁    上皮細胞樣
非洲綠猴腎細胞    Vero    MEM+10% FBS    貼壁    上皮細胞樣
人胚肺細胞    WI-38    MEM+10% FBS    貼壁    成纖維細胞
人羊膜細胞    WISH    MEM+10% FBS    貼壁    上皮細胞樣
小鼠腎上腺皮質(zhì)細胞    Y1(Y-1)    RPMI-1640+10% FBS    貼壁    上皮細胞樣
小鼠淋巴瘤細胞    YAC-1    RPMI-1640+10% FBS    懸浮    淋巴母細胞
人乳腺癌細胞    ZR-75-1    RPMI-1640+10% FBS    貼壁    上皮細胞樣
人乳腺癌細胞    ZR-75-30    RPMI-1640+10% FBS    貼壁    上皮細胞樣
人支氣管上皮樣細胞    16HBE    RPMI-1640+10% FBS    貼壁    上皮細胞樣
人巨細胞性肺癌細胞    801-D     RPMI-1640+10% FBS    貼壁    上皮細胞樣
小鼠胚胎成骨細胞前體細胞    MC3T3-E1 Subclone 24    DMEM+10% FBS    貼壁    成纖維細胞樣
人腺樣囊性癌細胞    A2     RPMI-1640+10% FBS    貼壁    上皮細胞樣
人肺癌細胞    A-427    MEM+10% FBS    貼壁    上皮細胞樣
人腎癌細胞    A-498    MEM+10% FBS    貼壁    上皮細胞樣
人黑色素瘤細胞    A875    MEM+10% FBS    貼壁    多角樣
人腺樣囊性癌細胞（高轉(zhuǎn)移）    AM     RPMI-1640+10% FBS    貼壁    上皮細胞樣
人乳腺癌細胞    BC-009    DMEM+10% FBS    貼壁    上皮細胞樣
人乳腺癌細胞    BC-019    DMEM+10% FBS    貼壁    上皮細胞樣
人乳腺癌細胞    BC-020    DMEM+10% FBS    貼壁    上皮細胞樣
人乳腺癌細胞    BC-021        貼壁    上皮細胞樣
人乳腺癌細胞    BC-022        貼壁    上皮細胞樣
人神經(jīng)母細胞瘤細胞    BE(2)-M17    MEM:F12+10% FBS    貼壁    神經(jīng)母細胞樣
小鼠白血病克隆細胞系    L6565    RPMI-1640+10% FBS    懸浮    淋巴母細胞樣
人眼脈絡(luò)黑色素瘤細胞    C918    RPMI-1640+10% FBS    貼壁    多角形
人舌鱗癌細胞    CAL 27    DMEM+10% FBS    貼壁    上皮細胞樣
人結(jié)腸腺癌細胞    LS 180    MEM+10% FBS    貼壁    上皮細胞樣
人鼻咽癌細胞    CNE-2Z     RPMI-1640+10% FBS    貼壁    上皮細胞樣
人結(jié)直腸腺癌細胞    COLO 201    RPMI-1640+10% FBS    懸浮混有少量貼壁細胞    成纖維細胞
人結(jié)腸癌細胞    CW-2    DMEM+10% FBS    貼壁    上皮細胞樣
人神經(jīng)膠質(zhì)瘤細胞    CRT     DMEM(高糖)+10% FBS    貼壁    成纖維細胞
人腦髓母細胞瘤細胞    D283 Med    MEM+10% FBS    貼壁    成纖維細胞
人臍靜脈細胞融合細胞    EA.hy926    DMEM+10% FBS    貼壁    上皮細胞樣
人臍靜脈內(nèi)皮細胞    ECV-304    MEM+10% FBS    貼壁    上皮細胞樣
人膀胱癌細胞    EJ     RPMI-1640+10% FBS    貼壁    上皮細胞樣
人肺腺癌細胞    NCI-H1395    RPMI-1640+10% FBS    懸浮    淋巴母細胞
人高轉(zhuǎn)移肝癌細胞    H-97     DMEM+10% FBS    貼壁    上皮細胞樣
人子宮鱗癌細胞（高分化）    HCC 94(HCC941122)    RPMI-1640+10% FBS    貼壁    上皮細胞樣
人高轉(zhuǎn)移肝癌細胞    HCCLM3    DMEM+10% FBS    貼壁    上皮細胞樣
雞胚成纖維細胞    UMNSAH/DF-1    DMEM+10% FBS    貼壁    成纖維細胞
人紅白細胞白血病細胞    HEL     RPMI-1640+10% FBS    懸浮/貼壁混合    淋巴母細胞樣
人胚肺成纖維細胞    HELF     DMEM+10% FBS    貼壁    成纖維細胞
人高轉(zhuǎn)移卵巢癌細胞    HO-8910PM     RPMI-1640+10% FBS    貼壁    上皮細胞樣
人子宮內(nèi)膜癌細胞    Ishikawa     RPMI-1640+10% FBS    貼壁    上皮細胞樣
中國倉鼠卵巢細胞    CTLA4 Ig-24    DMEM+10% FBS    貼壁    上皮細胞樣
小鼠胚胎成纖維細胞    3T6-Swiss albino    DMEM+10% FBS    貼壁    成纖維細胞
小鼠白血病細胞    M1    RPMI-1640+10% FBS    懸浮    淋巴母細胞
人黑色素瘤細胞    M14     DMEM+10% FBS    貼壁    上皮細胞樣