Dopa黑色素反應法染色試劑盒產(chǎn)品及特點 本產(chǎn)品利用 Pfu DNA polymerase 所具有 3’到 5’的聚合酶活性和5’到 3’外切酶活性，將 3’和/或 5’突出的 DNA 段轉化成平末端, 用于克隆工作。

1. 簡單，精心優(yōu)化過的 2 X Polishing Buffer 中含有所需要的所有成
分，不需要單獨準備。
2. 適用于任何平末端的 DNA 載體。
規(guī)格及成分 成 份 編 號 20 次包裝
2 X Polishing Buffer 60107A 0.5 mL
Pfu DNA Polymerase（3U/uL） 60107B 20 ul
使用手冊 60107sc 1 份
運輸及保存 低溫運輸，-20℃保存，保存期限為一年。
自備試劑 DNA 段
Dopa黑色素反應法染色試劑盒使用方法 1. DNA 段的準備：
無論是來源 Taq, Tth, T7, Klenow 和 Vent 等 DNA 聚合酶合成的 DNA
片段，還是用限制性內(nèi)切酶制備的 DNA 段，粘轉平之前均需要將 DNA 沉
淀以便去除反應液中的無關成份。沉淀 DNA 的方法包括經(jīng)典的鹽/純沉淀法，
離心柱 DNA 吸附法和天澤基因的一管式非醇超快 DNA 沉淀法。
2. 設置粘轉平（Polishing）反應：
在一個干凈的離心管中，分別加入
10-500 ng 3’或 5’突出的 DNA 段
25 uL 2 X Polishing Buffer
1 uL Pfu DNA polymerase
補水到 50 uL
72℃保溫 2 小時。
DNA粘轉平試劑盒注意：如果不使用熱蓋式 PCR 儀器加熱，則需要在反應管中再加入適量
液體石蠟以防反應過程中水份蒸發(fā)。
3. 反應后處理
粘轉平反應后，樣品可以放-20℃長期保存，也可以直接用于 T4 DNA 連
接酶催化的連接反應。對 10 uL 的連接反應體系，一般需要加入 1-2 uL 粘
轉平反應液。由于 Pfu DNA polymerase 在連接反應的溫度條件下幾乎沒有
活性，所以不必去除。但文獻報道，去除后連接效率更高。
相關資料
常見 DNA 聚合酶的粘轉平效率
聚合酶 5’突出的堿基種類
A C G T 平均（%）
Taq 4 10 1 75 22.5
Klenow 12 3 20 67 25.5
T4 89 86 96 91 90.5
Pfu 93 89 93 89 91
 ----NAR 22:2423, 1994
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