BCIP/NBT顯色試劑盒BCIP 即 5- 溴 -4- 氯 -3- 吲 哚 - 磷 酸 鹽 （ 5-bromo-4-chloro-3-inodlylphosphate）。NBT即四唑淡藍(lán)（Nitro-Blue-Tetrazolium），為深藍(lán)色無(wú)定形微溶物質(zhì)。當(dāng)二者存在時(shí)，在堿性磷酸酶（Alkaline phosphatase, AP）作用下，
NTB 被還原形成不溶性的藍(lán)色（在硝酸纖維素膜上）或紫色（在尼龍膜上）沉淀，
據(jù)此顏色反應(yīng)來(lái)鑒定堿性磷酸酶。該反應(yīng)的示意圖如下：
BCIP/NBT顯色試劑盒就是基于上述原理開(kāi)發(fā)，它具有下列特點(diǎn)：
1. 即開(kāi)即用，省去自配溶液的麻煩。
2. 條件經(jīng)過(guò)優(yōu)化，zui低可以檢測(cè)到 0.5fmol 的靶分子（在硝酸纖維素膜上），
并且背景低，不需要自己摸索。
3. 與硝酸纖維素膜和尼龍膜兼容，也可用于瓊脂糖凝膠原位雜交。
4. 適用于中等靈敏度檢測(cè)各種印跡膜檢測(cè)，包括Southern雜交、Northern
雜交、Western blot 沉淀、免疫組化等。如果要高靈敏度檢測(cè)，zui使
用 ECL 檢測(cè)。
5. 肉眼觀察實(shí)驗(yàn)結(jié)果，直觀簡(jiǎn)單，不需要額外的試劑和儀器。
規(guī)格及成分 成份 編號(hào) 100 mL 塑料袋包裝
25×BCIP 81224B 1 mL
25×NBT 81224A 1 mL
AP 緩沖液，10× 81224C 50 mL
使用手冊(cè) 81224sc 1 份
注意：本產(chǎn)品可以配制 100mL BCIP/NBT 顯色液，具體使用次數(shù)與膜的大小密
切相關(guān)。
運(yùn)輸及保存 常溫運(yùn)輸，4℃避光保存，有效期一年。
自備試劑 超純水、結(jié)合有 AP 標(biāo)記的探針或抗體的印跡膜
使用方法
一：配制溶液
1. 按每 cm2印跡膜需要 0.1mL BCIP/NBT 顯色液的比例計(jì)算所需顯色液的用
量，并按下表的配方配制的所需量的 BCIP/NBT 顯色液待用。說(shuō)明：下表以
10 mL 為例，用戶需要根據(jù)計(jì)算得到的所需顯色液體積按比例增減各成分用
量。
成份 用量
超純水 9 mL
AP 緩沖液，10× 1 mL
BCIP 溶液 50 uL
NBT 溶液 50 uL
注意：此溶液必須在 1 小時(shí)內(nèi)使用。
2. 用 10×AP 緩沖液配制跟 NBT-BCIP 顯色液等體積的 1×AP 緩沖液待用。
二：顯色
3. 同鈍頭鑷子將印跡膜浸入到新鮮配制的 1×AP 緩沖液中，脫色搖床上搖晃 5
分鐘。本方法也可以用于瓊脂糖凝膠原位雜交，處理方法一樣，只是把經(jīng)過(guò)
AP 標(biāo)記探針或抗體雜交的印跡膜改成經(jīng)過(guò) AP 標(biāo)記探針或抗體雜交的凝膠。
4. 同鈍頭鑷子將印跡膜浸入到新鮮配制的 BCIP/NBT 顯色液中（每 cm2 印跡
膜需要 0.1 mL BCIP/NBT 顯色液），室溫避光靜置顯色直到看見(jiàn)所需條帶。
在硝酸纖維素膜上，條帶將呈現(xiàn)藍(lán)色；在尼龍膜上，條帶將呈現(xiàn)紫棕色。注
意：顯色過(guò)程中不要搖晃，否則有色沉淀物不容易聚集。高豐度的靶分子可
能只需 5-30 分鐘顯色，低豐度的靶分子可能需要 24 小時(shí)顯色。顯色反應(yīng)一
般會(huì)在 24 小時(shí)結(jié)束，所以顯色時(shí)間沒(méi)有必要超過(guò) 24 小時(shí)。37℃放置可加速
顯色反應(yīng)，縮短顯色時(shí)間。
5. 顯色結(jié)束后，將印跡膜轉(zhuǎn)移到盛有超純水的托盤(pán)中搖晃以終止顯色反應(yīng)。數(shù)
分鐘后需要換水，共三次。
6. 用吸水紙吸干膜上的水分，照相或掃描處理后避光干燥保存印跡膜。對(duì)硝酸
纖維素膜，如果用二甲苯將膜浸濕，則條帶會(huì)增強(qiáng)約 5 倍（膜變得透明，使
背景變低，條帶更明顯所致）。
7. 如果不避光保存條，印跡膜上的條帶會(huì)逐漸褪色。硝酸纖維素膜上的顏色不
能脫去，如果想脫去尼龍膜上條帶的顏色，可以將膜浸入到裝在玻璃容器的
DMF 溶液中，再進(jìn)行熱水浴直到顏色脫去（需要在通風(fēng)柜中進(jìn)行）。硝酸纖
維素膜上的條帶不能脫去。
關(guān)聯(lián)產(chǎn)品 堿性磷酸酶 ECL 檢測(cè)試劑盒