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當(dāng)前位置:武漢艾美捷科技有限公司>>技術(shù)文章>>Csf1r(小鼠)ELISA試劑盒測定原理&樣本準(zhǔn)備指南
集落刺激因子1受體(CSF1R),也稱為M-CSFR和CD115,是一種細胞表面蛋白,在人類中由CSF1R基因編碼。該基因位于5號染色體的長臂(5q32)上,位于Crick(負)鏈。編碼的蛋白是一種酪氨酸激酶跨膜受體,屬于酪氨酸蛋白激酶的CSF1/PDGF受體家族。編碼的蛋白是一種單次跨膜I型膜蛋白,作為集落刺激因子1的受體,這是一種控制巨噬細胞產(chǎn)生、分化和功能的細胞因子。CSF1R及其配體集落刺激因子1在乳腺腺體的發(fā)育中起著重要作用,可能參與乳腺腺體癌變的過程。
Csf1r(小鼠)ELISA試劑盒是一種夾心酶免疫測定法,用于定量測量小鼠Csf1r。
艾美捷Csf1r(小鼠)ELISA試劑盒:
貨號:KA3348
校準(zhǔn)范圍:62.5至4000皮克/毫升
適用樣本:細胞培養(yǎng)上清液、細胞裂解液、血漿(EDTA、肝素)、血清。
樣本體積:100微升
標(biāo)記:HRP偶聯(lián)
檢測方法:比色法
法規(guī)狀態(tài):僅限研究使用(RUO)
反應(yīng)性:小鼠
應(yīng)用:定量
儲存說明:在4℃下可儲存6個月,在-20℃下可儲存12個月。避免多次凍融循環(huán)。
Entrez GeneID:12978
基因符號:Csf1r
基因別名:AI323359、CD115、CSF-1R、Csfmr、Fim-2、Fms、M-CSFR
僅限研究使用(RUO)
Csf1r(小鼠)ELISA試劑盒測定原理:
Csf1r(小鼠)ELISA試劑盒是一種固相免疫測定法,專門設(shè)計用于測量小鼠Csf1r。該試劑盒使用預(yù)包被有針對Csf1r特異性抗體的96孔條板。檢測抗體是針對Csf1r的生物素化抗體。捕獲抗體是大鼠來源的單克隆抗體,檢測抗體是山羊來源的多克隆抗體。試劑盒包含重組小鼠Csf1r,免疫原:表達系統(tǒng)為標(biāo)準(zhǔn):NS0;免疫原序列:A20-S511。試劑盒已通過即用型試劑進行了分析驗證。要測量小鼠Csf1r,將標(biāo)準(zhǔn)品和樣本加入孔中,然后加入生物素化的檢測抗體。用PBS或TBS緩沖液洗滌孔,然后加入鏈霉親和素-生物素-過氧化物酶復(fù)合物(ABC-HRP)。用PBS或TBS緩沖液洗去未結(jié)合的ABC-HRP,然后加入TMB。TMB是HRP的底物,會被催化產(chǎn)生藍色產(chǎn)物,加入酸性終止液后變?yōu)辄S色。黃色產(chǎn)物在450納米處的吸光度與樣本中的小鼠Csf1r成線性比例。使用酶標(biāo)儀讀取每個孔中黃色產(chǎn)物的吸光度,并將樣本孔的讀數(shù)與標(biāo)準(zhǔn)曲線進行對比,以確定樣本中小鼠Csf1r的濃度。
樣本準(zhǔn)備:
? 樣本準(zhǔn)備和儲存
這些樣本收集說明和儲存條件僅供參考,樣本穩(wěn)定性尚未評估。
樣本稀釋比例應(yīng)通過預(yù)實驗確定(對樣本進行系列稀釋,查看哪種稀釋比例的結(jié)果理想,接近標(biāo)準(zhǔn)范圍的中間值)。一般來說,高濃度樣本可以稀釋1:100,中等濃度樣本1:10,低濃度樣本1:2或直接使用。
• 細胞培養(yǎng)上清液:通過離心清除顆粒,立即測定或在-20℃儲存樣本。
• 血清:使用血清分離管(SST),讓血清在室溫下凝固約四小時。然后,以大約1000 x g的離心力離心15分鐘。立即測定或在-20℃儲存樣本。
• 血漿:使用肝素或EDTA作為抗凝劑收集血漿。以大約1000 x g的離心力離心15分鐘。立即測定或在-20℃儲存樣本。
*注意:重要的是不要使用上述以外的抗凝劑處理血漿,因為其他抗凝劑可能會阻斷抗體結(jié)合位點。
• 細胞裂解液:裂解細胞,確保沒有可見的細胞沉淀。以大約10000 x g的離心力離心細胞裂解液5分鐘。收集上清液。
• 樣本收集注意事項
建議樣本制備后立即使用。
避免所有樣本的反復(fù)凍融循環(huán)。
如果打算使用上述未列出的樣本類型與試劑盒一起使用,建議客戶進行驗證實驗,以確保結(jié)果的可靠性。
由于化學(xué)干擾,使用化學(xué)裂解緩沖液制備的組織或細胞提取樣本可能會導(dǎo)致結(jié)果不準(zhǔn)確。
由于細胞活性、細胞數(shù)量或采樣時間等因素,細胞培養(yǎng)上清液樣本可能無法被試劑盒檢測到。
在進行測定之前,樣本應(yīng)恢復(fù)至室溫(18-25℃),無需額外加熱。
在使用測定之前,應(yīng)預(yù)測樣本濃度。如果樣本濃度不在標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍內(nèi),用戶必須確定其特定實驗的最佳樣本稀釋比例。
? 樣本稀釋指南
用戶需要估計樣本中目標(biāo)蛋白的濃度,并使用適當(dāng)?shù)南♂屢蜃?,使稀釋后的目?biāo)蛋白濃度落在標(biāo)準(zhǔn)曲線的O.D.值范圍內(nèi)。使用提供的稀釋緩沖液稀釋樣本。每種樣本類型都需要進行稀釋系列的預(yù)實驗。必須將樣本與樣本稀釋液充分混合。
標(biāo)準(zhǔn)曲線僅用于演示,不應(yīng)用于計算未知量。每次進行測定時,應(yīng)生成標(biāo)準(zhǔn)曲線。
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