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分光光度計(jì)的工作原理及應(yīng)用?

時(shí)間:2024/10/15閱讀:692
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梅特勒托利多超越系列分光光度計(jì)的工作原理是怎樣的?

我們的分光光度計(jì)利用陣列式技術(shù),測量光線透過比色皿內(nèi)樣品溶液之前和之后的強(qiáng)度。 包含的主要組件有光源(例如:氙燈)、樣品支架、將光分為不同波長的分光設(shè)備和適合的檢測器(如光電二極管檢測器)。 觀看下方視頻了解詳細(xì)信息。

我們的分光光度計(jì)的工作原理以下列步驟為基礎(chǔ):

測量溶液透光強(qiáng)度的空白溶液測量:

  1. 將溶劑(例如:水或酒精)添加至適合的透明和非吸光容器(比色皿)內(nèi)。

  2. 光源釋放的光束透過裝有溶劑的比色皿。

  3. 然后使用放置在比色皿身后的檢測器對不同波長的透光強(qiáng)度進(jìn)行測量并且記錄。


對空白溶液測量之后,測量樣品:

  1. 將樣品溶解于溶劑中,然后添加至比色皿。

  2. 光源釋放的光束透過裝有樣品的比色皿。

  3. 當(dāng)光線透過比色皿時(shí),一部分由溶液內(nèi)的樣品分子吸收。

  4. 然后使用檢測器測量透光。

  5. 不同波長時(shí)光強(qiáng)度會(huì)發(fā)生變化,可通過將樣品溶液的透光強(qiáng)度除以空白溶液的相應(yīng)值計(jì)算得出。 然后使用記錄器將此比例存儲(chǔ)。

紫外可見分光光度計(jì)有哪些應(yīng)用?


制藥行業(yè)

紫外可見分光光度計(jì)對于定性和定量分析過程起到重要作用,并且在控制藥品中活性藥物成分(API)的純度和計(jì)量方面。 例如,可使用紫外可見分光光度計(jì)快速分析布洛芬的API,以確定標(biāo)準(zhǔn)液和樣品在264 nm和273 nm時(shí)的消光系數(shù)。 標(biāo)準(zhǔn)液與樣品在消光系數(shù)百分比方面的差值可作為質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn),根據(jù)美國藥典(USP) 專著,此差值必須小于3.0 %。


生物技術(shù)行業(yè)

紫外可見分光光度法是生物技術(shù)實(shí)驗(yàn)室每天使用的標(biāo)準(zhǔn)方法。 它可用于測定核酸與蛋白質(zhì)的濃度(例如:使用A260與A280吸光度),也可用于檢驗(yàn)DNA的純度(例如:使用260/280吸光度比)。 在可見光譜上使用其他波長(例如:對Bradford法使用595 nm,以及對Lowry法使用750 nm),可以對生物樣品中的蛋白質(zhì)含量進(jìn)行定量。

此外,利用紫外可見分光光度法測定在600 nm波長(即:OD600)下細(xì)胞培養(yǎng)樣品的光學(xué)密度,可以估算細(xì)菌或其他細(xì)胞(例如:大腸桿菌)的數(shù)量。

通過生命科學(xué)應(yīng)用手冊了解更多內(nèi)容。


食品與飲料行業(yè)

紫外可見分光光度法用于監(jiān)測和改進(jìn)產(chǎn)品質(zhì)量。 例如,通過觀察200 nm與400 nm波長之間1%異丙醇溶液的吸光度行為測定橄欖油,因?yàn)樵诖朔秶鷥?nèi)吸光度的升高表示油被氧化,因此降低了質(zhì)量。

葡萄酒內(nèi)的污染物(例如:細(xì)菌生長)會(huì)導(dǎo)致葡萄酒的顏色發(fā)生變化,可利用紫外可見分光光度法對其評估

分光光度法還通常被啤酒釀造企業(yè)用于監(jiān)測質(zhì)量控制。 通常測量顏色、苦味、異α和α酸、總碳水化合物,游離氨基氮(FAN)。

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化工行業(yè)

紫外吸收分光光度法是用于測定有機(jī)溶液純度的最佳方法之一。 以化工行業(yè)對酒精純度的控制為例,該過程會(huì)受到苯污染。 苯在280 nm波長時(shí)吸光,而酒精會(huì)在210 nm波長時(shí)吸光,如果光譜上在280 nm處出現(xiàn)一個(gè)額外高峰,則表明受到苯污染。

在化工行業(yè),利用分光光度計(jì)進(jìn)行顏色測量得到廣泛應(yīng)用。 例如,ASTM D1209方法描述的用于透明液體的鉑鈷(Pt / Co)色度適用于目視測量化學(xué)藥品和石油化學(xué)產(chǎn)品的顏色,例如甘油、增塑劑、溶劑、四氯化碳和石油精。


公共事業(yè)

分光光度計(jì)是公共事業(yè)公司和機(jī)構(gòu)中水和廢水光度分析的理想儀器。 它可以非常準(zhǔn)確地測量上百種參數(shù)(例如:COD、銨,硬度,氯等)并且可提供快速結(jié)果,以確保及時(shí)進(jìn)行質(zhì)量控制。

此外,許多電廠被要求監(jiān)測離子(例如:鐵、硅酸鹽)至ppb級(jí),在這方面可使用分光光度計(jì),無需進(jìn)行鍋爐校正。

了解關(guān)于使用紫外可見分光光度法進(jìn)行水檢測的更多內(nèi)容

掃描分光光度計(jì)和陣列式分光光度計(jì)有什么不同?

根據(jù)光學(xué)系統(tǒng)中光譜記錄組件的幾何結(jié)構(gòu),可將紫外可見分光光度計(jì)分為兩類:

  • 掃描式分光光度計(jì)

  • 陣列式分光光度計(jì)

不斷改變光的波長(即:掃描)獲得掃描式紫外可見分光光度計(jì)的光譜,通過轉(zhuǎn)動(dòng)反射光柵使光分別透過樣品(如下圖所示)。 在陣列式分光光度計(jì)中,透光樣品的全波長光由位于比色皿身后的反射光柵衍射,然后由陣列式檢測器(例如:CCD傳感器)接收。這樣可以在短時(shí)間內(nèi)同時(shí)測量光的所有波長。 因此,陣列式分光光度計(jì)可在幾秒內(nèi)提供全譜掃描光譜(例如:200-800 nm),而掃描式分光光度計(jì)需要至少幾分鐘才能完整相同任務(wù)。

掃描式分光光度計(jì)的機(jī)械轉(zhuǎn)動(dòng)元件會(huì)對波長的準(zhǔn)確度和重現(xiàn)性產(chǎn)生影響。 為了避免這種情況,需要定期重新校準(zhǔn)并且涉及到相關(guān)維護(hù)費(fèi)用。 陣列式分光光度計(jì)不包括任何移動(dòng)的光學(xué)部件,這意味著不會(huì)由于機(jī)械不精確造成波長發(fā)生偏差。

陣列式分光光度計(jì)的另外一個(gè)優(yōu)點(diǎn)是不會(huì)受到環(huán)境光線的影響,這與其光學(xué)設(shè)計(jì)有關(guān),這意味著無需使用一個(gè)封閉的樣品室,因此更容易自動(dòng)進(jìn)樣。


鎢鹵燈、氘燈與氙燈之間的差別是什么?

鎢鹵燈是分光光度計(jì)中常用的光源。 它由封裝在玻璃燈泡中的鎢絲和一部分鹵素組成,以回收蒸發(fā)鎢。 這種燈提供了可見光到近紅外區(qū)從330到1100 nm的有用波長范圍,使用壽命大概為3000小時(shí)。

氘燈是一種燈泡中密封有氣態(tài)氘的放電光源。 氘燈涵蓋了從190到450 nm的紫外區(qū),具有穩(wěn)定的光強(qiáng)分布,使用壽命大約為1000小時(shí)。

上述兩種燈通常組合使用,以覆蓋整個(gè)范圍紫外與可見光。

氙燈是一種將氙氣密封在石英燈泡中的放電光源。 它可生成從紫外到近紅外的持續(xù)光譜,波長為190——1100 nm。 氙氣閃光燈通過脈沖點(diǎn)火生成光,在一個(gè)時(shí)間段內(nèi)聚集以達(dá)到一次完整的光譜掃描,無需預(yù)熱。 這種脈沖光生成幾乎不會(huì)產(chǎn)生熱,使用壽命長,在常態(tài)操作條件下50 Hz頻率閃爍時(shí)為5500小時(shí)。 使用氙燈可減少維護(hù)工作量以及延長燈的使用壽命。

梅特勒托利多提供的FastTrack™技術(shù)由氙氣閃光燈、石英玻璃纖維和陣列式檢測器組成。



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