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ELISA試劑盒檢測(cè)方法的原理

閱讀:2493發(fā)布時(shí)間:2016-6-20

目前,酶聯(lián)免疫(ELISA試劑盒)檢測(cè)技術(shù)廣泛用于免疫學(xué)、微生物學(xué)、寄生蟲(chóng)學(xué)等。由于其具有靈敏度高、試劑穩(wěn)定、設(shè)備簡(jiǎn)單、操作安全等優(yōu)點(diǎn),近幾年也將其應(yīng)用到食品領(lǐng)域中來(lái)檢測(cè)某些食品中的生理活性物質(zhì)。


酶聯(lián)免疫吸附法(elisa試劑盒檢測(cè)方法)原理:

原理:ELISA可用于測(cè)定抗體,也可用于檢測(cè)杭原。其基本原理是采用抗原與抗體的特異反應(yīng)將待測(cè)物與酶連接,然后通過(guò)酶與底物產(chǎn)生顏色反應(yīng),用于定量測(cè)定。測(cè)定的對(duì)象可以是抗體也可以是抗原。3種必要的試劑: ①固相的抗原或抗體(免疫吸附劑); ②酶標(biāo)記的抗原或抗體(標(biāo)記物); ③酶作用的底物(顯色劑)。

ELISA過(guò)程包括:抗原吸附在固相載體上,這個(gè)過(guò)程稱(chēng)為包被,加待測(cè)抗體, 再加相應(yīng)酶標(biāo)記抗體,生成抗原--待測(cè)抗體--酶標(biāo)記抗體的復(fù)合物,再與該酶的底物反應(yīng)生成有色產(chǎn)物。借助分光光度計(jì)的光吸收計(jì)算抗體的量。


根據(jù)檢測(cè)目的和操作步驟不同,有以下三種類(lèi)型的常用方法:

1.間接法 
此法是測(cè)定抗體zui常用的方法。將已知抗原吸附于固相載體。加人待檢標(biāo)本(含相應(yīng)抗體)與之結(jié)合。洗滌后,加人酶標(biāo)抗球蛋白抗體(酶標(biāo)抗抗體)和底物進(jìn)行測(cè)定。

2.雙抗體夾心法 
此法常用于測(cè)定抗原。將已知抗體吸附于固相載體,加人待檢標(biāo)本(含相應(yīng)抗原)與之結(jié)合。溫育后洗滌,加人酶標(biāo)板中。

3.競(jìng)爭(zhēng)法 
此法可用于抗原和半抗原的定量測(cè)定,也可用于測(cè)定抗體。以測(cè)定抗原為例,將特異性抗體吸附于固相載體。加入待測(cè)抗原和一定量的酶標(biāo)已知抗原,使二者竟?fàn)幣c固相抗體結(jié)合;經(jīng)過(guò)洗滌分離,zui后結(jié)合于固相的酶標(biāo)抗原與待測(cè)抗原含量呈負(fù)相關(guān)。


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