大鼠肺大靜脈平滑肌原代細(xì)胞

大鼠肺大靜脈平滑肌細(xì)胞分離自肺大靜脈組織；肺大靜脈在用肺呼吸的脊椎動(dòng)物中，把動(dòng)脈血由肺送回心臟的靜脈，是一個(gè)靜脈里流動(dòng)脈血的血管。左右1對(duì)，共4條，兩條連接右肺，兩條連接左肺。肺靜脈異位引流是指肺靜脈未能直接與左心房連接，而與右心房或體靜脈系統(tǒng)連接的先天性心血管異位。肺靜脈淤血性肺動(dòng)脈高壓，是由于肺靜脈內(nèi)血液淤滯而引起的肺動(dòng)脈高壓。正常情況下，肺循環(huán)具有血壓低、阻力小和順應(yīng)性大的特點(diǎn)，肺動(dòng)脈壓力高低取決于單位時(shí)間內(nèi)肺動(dòng)脈血流量和肺血管的阻力，要維持肺循環(huán)的低壓、低阻的狀態(tài)，必須保證整個(gè)肺循環(huán)系統(tǒng)的暢通無(wú)阻，血液順利地由肺動(dòng)脈經(jīng)毛細(xì)血管進(jìn)入肺靜脈，再入左心室，經(jīng)過(guò)左心室收縮進(jìn)入體循環(huán)，才能避免肺動(dòng)脈內(nèi)壓力升高。肺大靜脈平滑肌細(xì)胞原代分離培養(yǎng)3天后，可見(jiàn)細(xì)胞貼壁伸展，細(xì)胞形態(tài)大小不一，呈梭形、不規(guī)則形、三角形或扇形，核卵圓形、居中；2周后細(xì)胞匯合，多數(shù)細(xì)胞伸展呈長(zhǎng)梭形，胞漿豐富，有分枝狀突起，細(xì)胞平行排列成單層或部分區(qū)域多層重疊生長(zhǎng)，高低起伏；細(xì)胞密度低時(shí)，常交織成網(wǎng)狀；密度高時(shí)，則排列為旋渦狀或柵欄狀。傳代后細(xì)胞生長(zhǎng)較快，4-6天即可匯合，并保持上述形態(tài)學(xué)特征和生長(zhǎng)特點(diǎn)。該細(xì)胞參與血管壁炎癥反應(yīng)，保持靜脈管腔的通暢，還是多數(shù)動(dòng)脈疾病的靶細(xì)胞。

產(chǎn)品名稱(chēng)：大鼠肺大靜脈平滑肌細(xì)胞

組織來(lái)源：肺靜脈組織

產(chǎn)品規(guī)格：5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶

培養(yǎng)基 含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長(zhǎng)特性 貼壁

細(xì)胞形態(tài) 成纖維細(xì)胞樣

傳代特性 可傳5代左右；3代以?xún)?nèi)狀態(tài)最佳

消化液 0.25%

方法簡(jiǎn)介

普諾賽實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠肺大靜脈平滑肌采用 - 膠原酶聯(lián)合消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測(cè)

普諾賽實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠肺大靜脈平滑肌經(jīng)α-SMA免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個(gè)瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；

③1-2min后，顯微鏡下觀(guān)察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；

④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；

⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；

⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。

2、細(xì)胞復(fù)蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時(shí)間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。

②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。

3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后，顯微鏡下觀(guān)察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；

③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；

④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存。

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過(guò)夜）。第二天換液并 檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤(rùn)洗細(xì)胞 1-2 次。

2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀(guān)察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。

3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。

4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類(lèi)；

1. 細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，細(xì)胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。

小鼠能a1A受體(ADRA1A)ELISA 試劑盒

Kappa aibodies to human immunoglobulin light chain (-IgLC) ELISA Kit 輕鏈kappa抗體(κ-IgLC)試劑盒

HumanleucocyteaigenB27,HLA-B27ELISAKit 人類(lèi)白細(xì)胞抗原B27(HLA-B27)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

FishhighsensitivityC-ReactiveProtein,hs-CRP試劑盒魚(yú)類(lèi)超敏C反應(yīng)蛋白(hs-CRP)試劑盒規(guī)格：96T/48T

真菌/酵母蛋白巰基/結(jié)合巰基含量比色法定量試劑盒20次

MouseComplemefragme3a,C3aELISAKit小鼠補(bǔ)體片斷3a(C3a)試劑盒規(guī)格：96T/48T

小鼠B6(VB6)ELISA 試劑盒 96T/48T

Rat bone morphogenetic protein 6 (BMP-6) ELISA Kit 大鼠骨形成蛋白6(BMP-6)試劑盒

HumanCCAAT/enhancerbindingproteinbeta,C/EBPβELISAKit 人CCAAT增強(qiáng)子結(jié)合蛋白β(C/EBPβ)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

ChickenLipopolysaccharides,LPS試劑盒雞脂多糖/內(nèi)毒素(LPS)試劑盒規(guī)格：96T/48T

載玻片細(xì)胞MAPK蛋白表達(dá)熒光顯微鏡試劑盒10/20次

MouseGasoiestinalcancerMarker-CA199ELISAKit小鼠胃腸癌標(biāo)志物CA199試劑盒規(guī)格：96T/48T

整合素α2β1   英文名稱(chēng)：   Iegrin α2β1   規(guī)格：      英文縮寫(xiě)：   Iegrin α2β1

整合素α5β3   英文名稱(chēng)：   Iegrin α5β3   規(guī)格：      英文縮寫(xiě)：   Iegrin α5β3

β-整合素   英文名稱(chēng)：   β-Iegrin   規(guī)格：      英文縮寫(xiě)：   β-Iegrin

誘導(dǎo)型合酶   英文名稱(chēng)：   induced niic oxide syhas   規(guī)格：      英文縮寫(xiě)：   iNOS

MERTK重組人 MERTK / Mer 蛋白 (His & Fc 標(biāo)簽) Protein

銅藍(lán)蛋白(CP)重組蛋白 Recombinant Ceruloplasmin (CP)

RPN2重組人 RPN2 / Ribophorin II 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein

AGO1 Protein Human 重組人 AGO1 / Argonaute 1 / EIF2C1 蛋白 (His 標(biāo)簽)

HA Protein H5N1 重組甲型流感 H5N1 (A/Egypt/2321-NAMRU3/2007) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白 (His 標(biāo)簽)

ACVR2B Others Human 人 ACVR2B / ActivinR-IIB 人細(xì)胞裂解液   前列腺上皮細(xì)胞生長(zhǎng)添加物PEpiCGS  DLL4 Others Mouse 小鼠 DLL4 / Delta4 人細(xì)胞裂解液   非洲綠猴腎細(xì)胞;VERO  LCC1 豬原代骨骼肌細(xì)胞 大鼠原代下丘腦神經(jīng)元細(xì)胞

大鼠肺大靜脈平滑肌原代細(xì)胞神經(jīng)顆粒素(NRGN)重組蛋白 Recombinant Neurogranin (NRGN)

IL3RA Protein Human 重組人 IL3RA / CD123 蛋白 (His & Fc 標(biāo)簽)

FKBP1A重組人 FKBP12 蛋白 Protein

HA Protein Influenza 重組甲型流感 H1N1 (A/England/195/2009) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白

LPAL2重組人 LPAL2 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) Protein