一．產品簡介

1、產品名稱：永生化人結腸成纖維細胞     

2、組織來源：結腸組織

3、產品規(guī)格：25cm2培養(yǎng)瓶/5×105cells

4、細胞簡介：

永生化人結腸成纖維細胞分離自結腸組織；結腸在右髂窩內續(xù)于盲腸，在第3骶椎平面連接直腸。結腸分升結腸、橫結腸、降結腸和乙狀結腸4部分，大部分固定于腹后壁，結腸的排列酷似英文字母“M”，將小腸包圍在內。結腸橫切面由內到外依次為：黏膜（上皮層、固有層、黏膜肌層），黏膜下層（疏松結締組織），肌層（內環(huán)形、外縱行兩層平滑?。?，外膜（纖維膜或漿膜）。結腸成纖維細胞主要分布于外膜（纖維膜或漿膜）結締組織內。成纖維細胞分泌富含I型和III型膠原的非剛性細胞外基質。該細胞負責結蹄組織中細胞外基質的大量合成。許多疾病均與成纖維細胞有關，或是因為該細胞可涉及這些疾病的病因學，或是因為呈纖維化會對組織中其它細胞類型造成傷害。

本公司生產的永生化人結腸成纖維細胞采用混合酶和SV40T制備而來，細胞總量約為5×105個/瓶；細胞經Vimentin免疫熒光鑒定，細胞純度可達90%以上，且不含有HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

5、培養(yǎng)基信息：

培養(yǎng)基內容：基礎培養(yǎng)基、FBS、Penicillin、Streptomycin等；

為保證細胞體外培養(yǎng)最佳狀態(tài)我們推薦使用CTCC人結腸成纖維細胞專用培養(yǎng)基（CTCC-181HCM）作為體外培養(yǎng)人結腸成纖維細胞專用培養(yǎng)基。

細胞發(fā)貨及鑒定圖片

細胞狀態(tài)照片：細胞發(fā)貨時發(fā)送至少3張細胞發(fā)貨前白光電子照片；

細胞鑒定照片：提供一套帶logo的鑒定圖片（不能用于發(fā)表文章）；若要用于文章發(fā)表或多套使用，需額外增加鑒定費用，提供3套鑒定圖片；

使用方法

在CTCC技術部標準操作流程下，永生化人結腸成纖維細胞可傳20代；建議您收到細胞后盡快進行相關實驗。

一、客戶收到細胞操作如下

取出25cm2培養(yǎng)瓶，75%酒精消毒，拆下封口膜，放入37℃，5%CO2細胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h，以穩(wěn)定細胞狀態(tài)；

觀察細胞生長情況，細胞密度低于80%時，貼壁細胞倒去瓶中培養(yǎng)液，留下8ml作用繼續(xù)培養(yǎng)；細胞密度大于80%時，即可進行傳代；

吸出25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用PBS洗滌3次；

添加0.25%ydbm消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中，37℃溫浴2-3min左右；倒置顯微鏡下觀察細胞回縮變圓，透亮時即可終止消化，加入雙倍培養(yǎng)液輕輕吹打細胞使其變成單細胞懸液；

收集細胞懸液至離心管內，1000rpm離心5min，觀察細胞沉淀；

加入1ml的培養(yǎng)液，輕輕吹打成單細胞懸液，均勻分配至細胞培養(yǎng)瓶中，初次傳代建議按照1：2比例進行

待細胞貼壁后，培養(yǎng)觀察。之后每隔2-3天更換新鮮的培養(yǎng)基。

二、細胞凍存管復蘇

提前室溫預熱培養(yǎng)基，將水浴鍋調至37℃；

在超凈工作臺內提前準備好15ml離心管，并加入5ml的培養(yǎng)基；

將凍存管快速放入水浴鍋中，不斷晃動凍存管，直至管內冰塊全部融化

然后快速取出，噴灑酒精，轉移至超凈工作臺；

擰開凍存管螺紋蓋，用移液槍將細胞懸液輕輕吸出，轉移至含5ml培養(yǎng)基的15ml心管中，1000rpm離心5min；

離心結束后，觀察有無細胞沉淀，將上清棄去，加入1ml新鮮的培養(yǎng)基，用移液槍輕輕吹打成細胞懸液；將細胞懸液轉移至T25培養(yǎng)瓶中，T25培養(yǎng)瓶建議培養(yǎng)基加入量5-7ml，輕輕晃動培養(yǎng)瓶使細胞分散均勻，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

細胞凍存

凍存條件：55% 基礎培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO或者無血清凍存液

保存條件：液氮存儲

四、注意事項

培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個月；

細胞收到操作注意事項，請參考《細胞操作指導》

細胞售后政策，請參考《原代細胞售后告知書》

由于使用所用試劑、操作環(huán)境、操作手法不同，以上僅供各實驗室參考！