一．產(chǎn)品簡(jiǎn)介

1、產(chǎn)品名稱：人肺癌腫瘤成纖維永生化細(xì)胞

2、組織來(lái)源：肺癌組織

3、產(chǎn)品規(guī)格：25cm2培養(yǎng)瓶/5×105cells

4、細(xì)胞簡(jiǎn)介：

人肺癌組織源細(xì)胞分離自患有肺癌組織的病人；肺癌是起源于肺部支氣管黏膜或腺體的惡性腫瘤，發(fā)病率和死亡率增長(zhǎng)最快，對(duì)人群健康和生命威脅最大的惡性腫瘤之一。

本公司生產(chǎn)的永生化人肺癌組織源細(xì)胞采用酶液消化法、離心純化和SV40T制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×105cells，細(xì)胞純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

5、培養(yǎng)基信息：

培養(yǎng)基內(nèi)容：基礎(chǔ)培養(yǎng)基、FBS、Penicillin、Streptomycin等；

為保證細(xì)胞體外培養(yǎng)最佳狀態(tài)我們推薦使用永生化人肺癌組織源細(xì)胞專用培養(yǎng)基作為體外培養(yǎng)永生化人肺癌組織源細(xì)胞專用培養(yǎng)基。

細(xì)胞發(fā)貨及鑒定圖片

細(xì)胞狀態(tài)照片：細(xì)胞發(fā)貨時(shí)發(fā)送至少3張細(xì)胞發(fā)貨前白光電子照片；

細(xì)胞鑒定照片：提供一套細(xì)胞鑒定圖片（可用于發(fā)文章）；若要用于文章多套使用，需額外增加鑒定費(fèi)用，提供3套鑒定圖片；

使用方法

在技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)操作流程下，人肺癌組織源細(xì)胞可傳15-20代左右；建議您收到細(xì)胞后盡快進(jìn)行相關(guān)實(shí)驗(yàn)。

一、客戶收到細(xì)胞操作如下

取出25cm2培養(yǎng)瓶，75%酒精消毒，拆下封口膜，放入37℃，5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)；

觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況，細(xì)胞密度低于80%時(shí)，貼壁細(xì)胞倒去瓶中培養(yǎng)液，留下8ml作用繼續(xù)培養(yǎng)；細(xì)胞密度大于80%時(shí)，即可進(jìn)行傳代；

吸出25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用PBS洗滌3次；

添加0.25%ydbm消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中，37℃溫浴2-3min左右；倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞回縮變圓，透亮?xí)r即可終止消化，加入雙倍培養(yǎng)液輕輕吹打細(xì)胞使其變成單細(xì)胞懸液；

收集細(xì)胞懸液至離心管內(nèi)，1000rpm離心5min，觀察細(xì)胞沉淀；

加入1ml的培養(yǎng)液，輕輕吹打成單細(xì)胞懸液，均勻分配至細(xì)胞培養(yǎng)瓶中，初次傳代建議按照1：2比例進(jìn)行

待細(xì)胞貼壁后，培養(yǎng)觀察。之后每隔2-3天更換新鮮的培養(yǎng)基。

二、細(xì)胞凍存管復(fù)蘇

提前室溫預(yù)熱培養(yǎng)基，將水浴鍋調(diào)至37℃；

在超凈工作臺(tái)內(nèi)提前準(zhǔn)備好15ml離心管，并加入5ml的培養(yǎng)基；

將凍存管快速放入水浴鍋中，不斷晃動(dòng)凍存管，直至管內(nèi)冰塊全部融化

然后快速取出，噴灑酒精，轉(zhuǎn)移至超凈工作臺(tái)；

擰開(kāi)凍存管螺紋蓋，用移液槍將細(xì)胞懸液輕輕吸出，轉(zhuǎn)移至含5ml培養(yǎng)基的15ml離心管中，1000rpm離心5min；

離心結(jié)束后，觀察有無(wú)細(xì)胞沉淀，將上清棄去，加入1ml新鮮的培養(yǎng)基，用移液槍輕輕吹打成細(xì)胞懸液；將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25培養(yǎng)瓶中，T25培養(yǎng)瓶建議培養(yǎng)基加入量5-7ml，輕輕晃動(dòng)培養(yǎng)瓶使細(xì)胞分散均勻，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

細(xì)胞凍存

凍存條件：55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO或者無(wú)血清凍存液

保存條件：液氮存儲(chǔ)

四、注意事項(xiàng)

培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個(gè)月；

細(xì)胞收到操作注意事項(xiàng)，請(qǐng)參考《細(xì)胞操作指導(dǎo)》

由于使用所用試劑、操作環(huán)境、操作手法不同，以上僅供各實(shí)驗(yàn)室參考！