大豆內(nèi)源檢測(cè)試劑盒（PCR-熒光探針法） 

◆ 產(chǎn)品說明 轉(zhuǎn)基因檢測(cè)系列產(chǎn)品可針對(duì)食品、飼料等樣品中轉(zhuǎn)基因成分的特異核酸片段進(jìn)行擴(kuò)增，通過實(shí)時(shí)擴(kuò) 增曲線判定結(jié)果。本產(chǎn)品參照《GB/T 19495.4-2018 轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品檢測(cè) 實(shí)時(shí)熒光定性聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）檢測(cè)方 法》和《SN/T 1204-2016 植物及其加工產(chǎn)品中轉(zhuǎn)基因成分實(shí)時(shí)熒光 PCR 定性檢驗(yàn)方法》等標(biāo)準(zhǔn)開發(fā)，用于大豆內(nèi) 源基因成分的檢測(cè)，檢出限為 0.01%。

◆ 產(chǎn)品組成（48 測(cè)試） 043012M 試劑 含量 A-Lectin-P 20 μL × 8 管× 6 排 NG-P 100 μL × 2 支 PG-Lectin-P 100 μL × 1 支

◆ 適用儀器 ABI 7500、CFX 96、Mx 3005P、LineGene9600 等實(shí)時(shí)熒光 PCR 儀。 

◆ 自備耗材和儀器 ①冰盒；②移液器（0.5-10 μL，10-100 μL，100-1000 μL）及配套滅菌吸頭；③離心機(jī)；④渦旋混勻器；⑤金 屬??；⑥均質(zhì)機(jī)、攪拌機(jī)或研缽等研磨器具；⑦電子天平。 

◆ 注意事項(xiàng) 1．本試劑檢測(cè)靈敏度高。為了防止污染，實(shí)驗(yàn)要分區(qū)操作。 1）一區(qū)：樣本制備區(qū)。 2）第二區(qū)：模板添加區(qū)。 3）第三區(qū)：擴(kuò)增及產(chǎn)物分析區(qū)。 ★ 分區(qū)之間好進(jìn)行物理性隔離，避免人為因素造成的污染。 2．實(shí)驗(yàn)過程中穿戴工作服和乳膠手套，不同區(qū)域獨(dú)立使用工具，需更換手套和實(shí)驗(yàn)服。 3．嚴(yán)格按照操作步驟操作，試劑配制和加樣等步驟請(qǐng)嚴(yán)格按照說明書要求在冰盒上操作。 4．反應(yīng)液中的成分對(duì)光敏感，應(yīng)避光保存。試劑使用前要解凍，但應(yīng)避免反復(fù)凍融，推薦使用前離心 30 秒。 5．反應(yīng)結(jié)束后，擴(kuò)增管請(qǐng)置于密封袋內(nèi)丟棄，當(dāng)日清理，開蓋易造成氣溶膠污染，禁止開蓋。 6．不同批號(hào)試劑請(qǐng)勿混合使用，在有效期內(nèi)使用。 

◆ 樣品處理 參照《GB/T 19495.3-2004 轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品檢測(cè) 核酸提取純化方法》或其他標(biāo)準(zhǔn)處理樣品，除了處于食物和（或） 飼料鏈起始端的農(nóng)產(chǎn)品和粗加工材料（如粉碎的產(chǎn)品），大多數(shù)工業(yè)加工的食品經(jīng)過了物理、化學(xué)及酶的處理。這 些處理會(huì)降低的含量及純度。因此，每一方法的適用性及重復(fù)性會(huì)隨特異樣品而異，一種特定的  提取方 法的性質(zhì)特征依賴于被研究的食品種類。實(shí)驗(yàn)室樣品的代表性應(yīng)符合《GB/T 19495.7-2004 轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品檢測(cè) 抽樣和 制樣方法》。制備的樣本保存待用。 ★ 若使用非一次性研磨器研磨樣品，一定要清洗研磨器并充分干燥后再進(jìn)行下一份樣品的研磨，防止交叉污染。 

◆ 實(shí)驗(yàn)操作 1．模板制備（樣本制備區(qū)） 建議使用配套植物基因組提取試劑盒，具體過程詳見產(chǎn)品說明書。SM-043012M-D01 2 2．添加模板（模板添加區(qū)，放置于冰盒上進(jìn)行） 剪下所需測(cè)試數(shù)的已含有反應(yīng)液的 PCR 管，放置在室溫待解凍后，離心 30 秒后揭開封口膜，向每管反應(yīng)液 中分別加入 5 μL 模板，順序?yàn)?NG、待測(cè)樣品模板、PG-Lectin-P。蓋好配套的 PCR 管蓋后，渦旋混勻，離心 30 秒， 立即進(jìn)行 PCR 擴(kuò)增反應(yīng)。 3．?dāng)U增反應(yīng)（擴(kuò)增及產(chǎn)物分析區(qū)） 使用熒光定量 PCR 儀，熒光基團(tuán)選擇 FAM，淬滅基團(tuán)選擇 NONE。 按下列條件設(shè)置擴(kuò)增反應(yīng)： PCR 循環(huán) 熒光收集位點(diǎn) 去污染 37℃ 10 分鐘 1 個(gè)循環(huán) — 預(yù)變性 95℃ 5 分鐘 1 個(gè)循環(huán) — 擴(kuò)增 95℃ 15 秒 40 個(gè)循環(huán) — 60℃ 1 分鐘 ※ 4．基線和閾值設(shè)定 基線調(diào)整取 3-15 個(gè)循環(huán)的熒光信號(hào)，閾值線應(yīng)超過空白對(duì)照擴(kuò)增曲線的高點(diǎn)。

◆ 結(jié)果判定 測(cè)試樣品檢測(cè) Ct 值≥40，曲線為直線或輕微斜線，無“S”型擴(kuò)增曲線，可判定樣品不含有大豆內(nèi)源基因或含量 低于檢出限； 測(cè)試樣品檢測(cè) Ct 值≤36，曲線呈“S”型擴(kuò)增曲線，可判定樣品含有大豆內(nèi)源基因； 測(cè)試樣品檢測(cè) Ct 值在 36～40 之間，應(yīng)調(diào)整模板濃度，重做實(shí)時(shí)熒光 PCR。再次擴(kuò)增后的樣品檢測(cè) Ct 值＜40， 則可判定樣品含有大豆內(nèi)源基因；再次擴(kuò)增后的樣品檢測(cè) Ct 值≥40，則可判定該樣品不含有大豆內(nèi)源基因或含量 低于檢出限。 ★NG 反應(yīng)為平滑直線，PG 反應(yīng)為“S”型擴(kuò)增曲線，此次檢測(cè)結(jié)果有效，否則無效。如重復(fù)檢測(cè)結(jié)果仍為無效，請(qǐng)與技術(shù)支持人 員聯(lián)系。 參考結(jié)果圖