沙門氏菌核酸檢測(cè)試劑盒（PCR-熒光探針?lè)ǎ?nbsp;

◆ 產(chǎn)品說(shuō)明 致病菌檢測(cè)系列可針對(duì)食品、飼料等樣品中的致病微生物的特異核酸片段進(jìn)行擴(kuò)增，儀器實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè) 擴(kuò)增過(guò)程中的熒光信號(hào)變化，自動(dòng)判讀結(jié)果。本產(chǎn)品用于沙門氏菌的檢測(cè)。檢出限為 10 3 CFU/mL。 

◆ 產(chǎn)品組成（48 測(cè)試） 011012M 試劑 含量 A-Sal-P 20μL × 8 管× 6 排 NG-P 100μl × 2 支 PG-Sal-P 100μl × 1 支 

◆ 適用儀器 ABI 7500、CFX 96、Mx 3005P、LineGene9600 等實(shí)時(shí)熒光 PCR 儀。 

◆ 自備耗材和儀器 ①冰盒；②移液器（0.5-10μL，10-100μL，100-1000μL）及配套滅菌吸頭；③離心機(jī)；④渦旋混勻器；⑤ 金屬??；⑥均質(zhì)機(jī)、攪拌機(jī)或研缽等研磨器具；⑦電子天平。 

◆ 注意事項(xiàng) 1. 本試劑檢測(cè)靈敏度高。為了防止污染，實(shí)驗(yàn)要分區(qū)操作。 1） 一區(qū)：樣品制備區(qū)。 2） 二區(qū)：模板添加區(qū)。 3） 三區(qū)：擴(kuò)增及產(chǎn)物分析區(qū)。 ★ 分區(qū)之間進(jìn)行物理性隔離，避免人為因素造成的污染。 2. 實(shí)驗(yàn)過(guò)程中穿戴工作服和乳膠手套，不同區(qū)域獨(dú)立使用工具，需更換手套和實(shí)驗(yàn)服。 3. 嚴(yán)格按照操作步驟操作，試劑配制和加樣等步驟請(qǐng)嚴(yán)格按照說(shuō)明書要求在冰盒上操作。 4. 反應(yīng)液中的成分對(duì)光敏感，應(yīng)避光保存。試劑使用前要解凍，但應(yīng)避免反復(fù)凍融，推薦使用前離心 30 秒。 5. 反應(yīng)結(jié)束后，擴(kuò)增管請(qǐng)置于密封袋內(nèi)丟棄，當(dāng)日清理，開蓋易造成氣溶膠污染，禁止開蓋。 6. 不同批號(hào)試劑請(qǐng)勿混合使用，在有效期內(nèi)使用。 

◆ 樣品處理 參照《GB 4789.4-2016 食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 沙門氏菌檢驗(yàn)》中的 5.1 或其他標(biāo)準(zhǔn)處理樣品， 對(duì)樣品進(jìn)行前增菌，制備的菌液保存待用。 稱取 25 g（ml）樣品放入盛有 225 mL BPW 的無(wú)菌均質(zhì)杯中，以 8000 rpm/min～10000 rpm/min 均質(zhì) 1 min～ 2 min，或置于盛有 225ml BPW 的無(wú)菌均質(zhì)袋中，用拍擊式均質(zhì)器拍打 1 min～2 min。若樣品為液態(tài)，不需要均 質(zhì)， 振蕩混勻。如需測(cè)定 pH 值，用 1 mol/ml 無(wú)菌 NaOH 或 HCl 調(diào) pH 至 6.8 ± 0.2 。無(wú)菌操作將樣品轉(zhuǎn)至 500 ml 錐形瓶中，如使用均質(zhì)袋，可直接進(jìn)行培養(yǎng)，于 36 ℃±1 ℃培養(yǎng) 8 h～18 h。 如為冷凍產(chǎn)品，應(yīng)在 45 ℃以下不超過(guò) 15 min，或 2 ℃～5 ℃不超過(guò) 18 h 解 凍。詳細(xì)步驟請(qǐng)按照標(biāo)準(zhǔn)操作。 

◆ 實(shí)驗(yàn)操作SM-011012M-D01 2 陽(yáng)性對(duì)照 空白對(duì)照 1. 模板制備（樣本制備區(qū)） 建議使用病原微生物提取試劑盒等商品化試劑盒，具體過(guò)程詳見(jiàn)產(chǎn)品說(shuō)明書。 2. 添加模板（模板添加區(qū)，放置于冰盒中進(jìn)行） 剪下所需測(cè)試數(shù)的已含有反應(yīng)液的 PCR 管，放置在室溫待解凍后，離心 30 秒后揭開封口膜，向每管反應(yīng)液中分 別加入 5μL 模板，順序?yàn)?NG、待測(cè)樣品模板、PG-Sal-P。蓋好配套的 PCR 管蓋后，渦旋混勻 30s，離心 1min， 立 即進(jìn)行 PCR 擴(kuò)增反應(yīng)。 3. 擴(kuò)增反應(yīng)（擴(kuò)增及產(chǎn)物分析區(qū)） 使用熒光定量PCR 儀，熒光基團(tuán)選擇 FAM，淬滅基團(tuán)選擇 NONE。 按下列條件設(shè)置擴(kuò)增反應(yīng)： PCR 循環(huán) 熒光收集位點(diǎn) 去污染 37℃ 10 分鐘 1 個(gè)循環(huán) — 預(yù)變性 95℃ 1 分鐘 1 個(gè)循環(huán) — 擴(kuò)增 95℃ 15 秒 40 個(gè)循環(huán) — 60℃ 30 秒 ※ 4.基線和閾值設(shè)定 基線調(diào)整取 3-15 個(gè)循環(huán)的熒光信號(hào)，閾值線應(yīng)超過(guò)陰性對(duì)照擴(kuò)增曲線的高點(diǎn)。 

◆ 結(jié)果判定 檢測(cè)樣品Ct≥40，曲線為直線或輕微斜線，無(wú)“S”型擴(kuò)增曲線，可報(bào)告樣品陰性，不含有沙門氏菌或含量低于檢 測(cè)限； 檢測(cè)樣品Ct≤35，曲線呈“S”型擴(kuò)增曲線，可直接報(bào)告樣品陽(yáng)性，含有沙門氏菌； 檢測(cè)樣品 35＜Ct＜40，需進(jìn)行一次重復(fù)實(shí)驗(yàn)，若 Ct 值≥40 則為陰性，不含有沙門氏菌或含量低于檢測(cè)限； 否則為陽(yáng)性，含有沙門氏菌。 ★ NG 反應(yīng)為平滑直線，PG 反應(yīng)為“S”型擴(kuò)增曲線且 Ct 值＜30，此次檢測(cè)結(jié)果有效，否則無(wú)效。如重復(fù)檢測(cè)結(jié)果仍為無(wú)效，請(qǐng) 與技術(shù)支持人員聯(lián)系。