裸鼠皮下成瘤模型構(gòu)建
- 公司名稱 上海申知心生物科技有限公司
- 品牌 其他品牌
- 型號
- 產(chǎn)地 上海市寶山區(qū)高境鎮(zhèn)
- 廠商性質(zhì) 代理商
- 更新時間 2025/5/9 17:14:13
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心血管疾病動物模型，動脈粥樣硬化模型，高血脂癥動物模型，缺血性心臟病動物模型，心肌病動物模型，高血壓動物模型，肺動脈高壓動物模型，心血管模型，心血管相關(guān)原代分離
一、模型構(gòu)建流程與核心技術(shù)
1. 實驗動物選擇
品系選擇：
常用品系：BALB/c nu/nu裸鼠（T細胞缺陷）、NOD-SCID（T/B/NK細胞缺陷）、NSG（NOD-SCID-IL2Rγ-/-，全免疫缺陷）。
性別與周齡：優(yōu)先選擇雄性裸鼠（6-8周齡，體重18-20 g），減少激素干擾。
飼養(yǎng)條件：SPF級環(huán)境，溫度22-25℃，濕度40-70%，12小時光照/黑暗周期。
2. 腫瘤細胞準備
細胞株選擇：
高成瘤細胞：HCT-116（結(jié)直腸癌，成瘤率100%）、SKOV3（卵巢癌）、SGC-7901（胃癌）。
爭議性細胞：如Hep-G2（肝癌）需高細胞密度（1×10? cells/只）接種。
細胞預處理：
傳代要求：取對數(shù)生長期細胞（活力>95%），胰酶消化后離心（1000 rpm，5分鐘），重懸于PBS或基質(zhì)膠（Matrigel）中（體積比1:1）。
濃度調(diào)整：常規(guī)接種濃度1×10?~1×10? cells/mL（具體依細胞株特性調(diào)整）。
3. 皮下接種操作
注射部位：
腋下：右腋皮下（淋巴引流明確，便于觀察轉(zhuǎn)移）。
背部：中線兩側(cè)（避免動物抓撓）。
操作步驟：
麻醉：1%戊ba比妥鈉（50 mg/kg）或異氟烷吸入麻醉。
注射：使用1 mL注射器（22-25G針頭），緩慢注入0.1-0.2 mL細胞懸液（避免滲漏）。
退針后輕壓注射點，防止細胞液反流。
4. 術(shù)后監(jiān)測與數(shù)據(jù)記錄
成瘤時間：
快速成瘤型：HCT-116（7天可見結(jié)節(jié)）。
慢速成瘤型：原代細胞或低侵襲性細胞需2-4周。
監(jiān)測指標：
腫瘤體積：游標卡尺測量長徑（L）和短徑（W），按公式V=1/2×L×W2計算。
動物狀態(tài)：體重變化、活動度、腫瘤潰瘍情況。
二、模型評價體系與驗證方法
1. 成瘤率與生長曲線
成功標準：瘤體體積≥100 mm3（通常接種后2-4周）。
生長曲線分析：繪制腫瘤體積-時間曲線，計算倍增時間（如HCT-116約3天）。
2. 組織病理學驗證
HE染色：觀察腫瘤細胞異型性、核分裂象及間質(zhì)浸潤。
免疫組化：檢測Ki-67（增殖指數(shù)）、CD31（微血管密度）等標志物。
3. 分子生物學檢測
基因表達：qPCR或Western blot驗證目標基因（如PRDX4、ASAP1）在瘤體中的表達。
信號通路分析：檢測PI3K/AKT、VEGF等通路關(guān)鍵蛋白。
4. 功能成像技術(shù)
小動物PET/CT：18F-FDG示蹤腫瘤代謝活性。
活體熒光成像：適用于標記熒光素酶（Luc）的腫瘤細胞。
三、技術(shù)優(yōu)化與常見問題解決
1. 提高成瘤率的策略
細胞預處理：
基質(zhì)膠混合：增強細胞黏附與血管生成（如SKOV3聯(lián)合Matrigel）。
低溫操作：細胞懸液全程冰上保存，減少凋亡。
動物選擇優(yōu)化：
年輕裸鼠：4-6周齡代謝活躍，成瘤更快。
免疫強化品系：NSG小鼠適用于低成瘤性細胞。
2. 常見問題與解決方案
| 問題類型 | 可能原因 | 解決方案 |
|---|---|---|
| 無腫瘤形成 | 細胞活力低/接種量不足 | 提高細胞濃度至1×10? cells/mL，檢測臺盼藍染色 |
| 腫瘤體積差異大 | 注射不均勻或滲漏 | 使用細針頭（25G），退針后按壓30秒 |
| 動物死亡 | 麻醉過量或感染 | 控制戊ba比妥鈉劑量≤50 mg/kg，術(shù)后給予抗生素 |
3. 特殊模型構(gòu)建技巧
原位移植模型：
皮下傳代后切取瘤塊（1 mm3）移植至靶器官（如胃壁），模擬轉(zhuǎn)移。
基因編輯模型：
CRISPR/Cas9敲除目標基因（如KMT2D）后接種，研究基因功能。
四、應(yīng)用場景與案例分析
1. 抗腫瘤藥物篩選
案例：卡培他濱抑制HCT-116裸鼠瘤體生長，腫瘤體積減少60%。
評價指標：瘤重抑制率=（對照組瘤重-實驗組瘤重）/對照組瘤重×100%。
2. 基因功能研究
案例：sh-PRDX4組瘤體體積較對照組下降50%，證實PRDX4促癌作用。
驗證方法：shRNA慢病毒轉(zhuǎn)染+皮下成瘤。
3. 轉(zhuǎn)移機制探索
案例：過表達miR-449a抑制Bel-7402肝癌細胞轉(zhuǎn)移，肺轉(zhuǎn)移灶減少80%。
技術(shù)延伸：結(jié)合淋巴結(jié)解剖與HE染色分析轉(zhuǎn)移率。
五、倫理規(guī)范與實驗設(shè)計
1. 倫理原則
3R原則：
替代（Replacement） ：優(yōu)先使用體外模型預實驗。
減少（Reduction） ：每組≥5只裸鼠（統(tǒng)計學意義）。
優(yōu)化（Refinement） ：術(shù)中麻醉+術(shù)后鎮(zhèn)痛（布洛芬5 mg/kg）。
2. 實驗記錄標準化
數(shù)據(jù)記錄：詳細記錄接種時間、細胞批次、動物編號。
病理存檔：瘤體福爾馬林固定或液氮凍存，供后續(xù)分析。
六、總結(jié)與未來方向
裸鼠皮下成瘤模型因其操作簡便、成本可控和高重復性，成為腫瘤研究的核心工具。未來發(fā)展趨勢包括：
多組學整合：單細胞測序解析瘤內(nèi)異質(zhì)性。
動態(tài)監(jiān)測技術(shù)：納米探針聯(lián)合micro-CT實現(xiàn)微轉(zhuǎn)移灶無創(chuàng)檢測。
人源化升級：PDX（人源腫瘤異種移植）模型替代傳統(tǒng)CDX模型，提高臨床預測性。
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