現(xiàn)貨供應(yīng)HRP 辣根過(guò)氧化物酶

過(guò)氧化物酶，通常來(lái)源于辣根(因此稱(chēng)辣根過(guò)氧化物酶)，是臨床檢驗(yàn)試劑中的常用酶。該產(chǎn)品不但廣泛用于多個(gè)生化檢測(cè)項(xiàng)目，也廣泛運(yùn)用于免疫類(lèi)(ELISA)試劑盒。過(guò)氧化物酶作為多個(gè)試劑盒顯色體系

⒈水提取:

稱(chēng)取 10斤用水沖刷干凈的鮮辣根(辣根皮中亦含有豐富的HRP)，用菜刀切成小碎塊，在攪肉機(jī)中攪碎1~2次。碎渣漿用1倍體積的水在低溫下攪拌提取過(guò)夜(亦可采用高速抽提法)。次日用甩干機(jī)(或離心機(jī))甩干，收集濾液，碎渣再用1/4倍體積水浸泡提取一次，合并兩次濾液，量總體積和度，0。

⒉硫酸銨分級(jí)分離:

在不斷攪拌下，每升濾液中慢慢加入226克硫酸銨粉末(相當(dāng)于0.40飽和度)，大約在1~2小時(shí)內(nèi)加完，置冷室中放置過(guò)夜。次日將上清液小心地用虹吸管移出，下面渾濁液以3000轉(zhuǎn)/分離心15分鐘，棄沉淀，合并上清液。再按每升上清液加258克硫酸銨粉末(0.8飽和度)隨加隨攪拌，當(dāng)硫酸銨全部溶解后，置冷室過(guò)夜。次日，虹吸出上清液，沉淀部分在冰凍離心機(jī)中以13000轉(zhuǎn)/分離心20分鐘，棄去上清液，收集沉淀。將沉淀懸浮于100~150毫升蒸餾水中(加水量要使沉淀全部溶解為止)，分裝于透析袋內(nèi)，放在流動(dòng)自來(lái)水中進(jìn)行透析1~2天，直到硫酸銨透析完畢為止(可用5%乙酸鋇溶液或奈氏試劑進(jìn)行檢查)。然后改換成用蒸餾水透析，中間更換2~3次，用0.1 mol/L硝酸銀溶液檢查透析外液無(wú)氯離子為止。

將透析液合并，在冰凍離心機(jī)中以 4000轉(zhuǎn)/分離心 15分鐘;去沉淀，量上清液的體積。

⒊丙酮分級(jí)分離:

將上清液倒入燒杯并置冰鹽浴中，在不斷攪拌下，用細(xì)滴管沿杯壁加入1倍體積預(yù)冷至-15℃的丙酮，放置片刻，在冰凍離心機(jī)中以4，000/分離心15分鐘，棄去沉淀。上清液再加入0.8體積(按原上清液體積)-15℃丙酮，(操作同上)，靜置后，在冰凍離心機(jī)中離心收集沉淀。將沉淀溶于少量蒸餾水中，透析除丙酮。可得Rz值近于1的酶溶液。

⒋精制:

將上步酶液適當(dāng)稀釋?zhuān)渭?M硫酸鋅溶液，使酶液中鋅離子濃度為10-3M，5000轉(zhuǎn)/分離心10分鐘，得上清液。再將沉淀用少量蒸餾水洗滌，離心，洗液與清液合并，分裝于透析袋內(nèi)，對(duì)水透析除鹽，用微孔濾膜過(guò)濾，進(jìn)行真空冷凍干燥(約得20毫克)，產(chǎn)品呈米黃色纖維狀松軟物，HRP產(chǎn)品的Rz值可達(dá)3.0左右，置真空干燥器中低溫保存。

現(xiàn)貨供應(yīng)HRP 辣根過(guò)氧化物酶