PuriMag G-Avidin蛋白磁珠是將來源于蛋清的Avidin蛋白與羧基聚苯乙烯顆粒的共價(jià)偶聯(lián)制備的磁性顆粒。Avidin蛋白是雞蛋清和鳥類組織中存在的蛋白質(zhì)。Avidin蛋白是一種富含色氨酸的糖蛋白，對(duì)酸或蛋白水解酶的變性具有很強(qiáng)的抵抗力。得到的磁珠是在pH范圍為2至11時(shí)穩(wěn)定。它們可用于親和層析純化，測定開發(fā)和免疫沉淀。另外，通過將Biotin摻入一種擴(kuò)增聚合物中，Avidin磁性顆粒特別適用于物理分離聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)中產(chǎn)生的兩條DNA鏈。 PuriMag G-Avidin- Biotin生物分子復(fù)合物易于使用磁鐵與未結(jié)合的生物素 - 生物分子分離，因此提供了一種快速，簡潔的方法來標(biāo)記具有磁性納米顆粒的生物分子。

PuriMag G-Avidin的特點(diǎn)

直徑：200nm
濃度：10mg / ml
配體：抗生物素蛋白（來自雞蛋清）
類型磁化：超順磁性
基質(zhì)：GMA/DVB
表面組密度：1.5  - 2.0μg Avidin/ mg磁珠（每粒子300-400分子Avidin蛋白）

在2-8℃（多3個(gè)月）儲(chǔ)存在緩沖液（25mM tris-HCl，0.15M NaCl，0.05％吐溫20,0.09％NaN 3，pH 7.2）中。不要凍結(jié)試劑。

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重要產(chǎn)品信息

生物素化的分子可以用8M鹽酸胍，pH 1.5或用SDS-PAGE樣品緩沖液煮沸從PuriMag G-抗生物素蛋白中洗脫。這些苛刻的洗脫條件可能導(dǎo)致抗生物素蛋白亞基浸入樣品中。另外，抗生物素蛋白可能因這些亞基的喪失而喪失相當(dāng)大的結(jié)合能力。
注意：這些洗脫條件可能會(huì)不可逆轉(zhuǎn)地?fù)p害目標(biāo)蛋白質(zhì)。如果需要使用非變性條件洗脫生物素化分子，請(qǐng)使用單體抗生物素蛋白磁珠，其允許溫和的洗脫條件以回收生物素化的分子而不會(huì)受到抗生物素蛋白亞基的污染，并且不會(huì)降低樹脂的結(jié)合能力。

•本說明書中包含的協(xié)議是本產(chǎn)品的應(yīng)用示例。特定應(yīng)用和系統(tǒng)需要優(yōu)化。

免疫沉淀的程序

A.所需的其他材料
•結(jié)合緩沖液：磷酸鹽緩沖鹽水（例如，0.1M磷酸鹽，0.15M NaCl; pH 7.2）。為減少可能的非特異性結(jié)合，加入0.1％SDS，1％NP-40或0.5％脫氧膽酸鈉。
•生物素化抗體：使用約30μg生物素化蛋白/ mg珠。在結(jié)合緩沖液中制備濃度為0.2-10mg / mL的0.1-1.2mg生物素化抗體。

•洗脫緩沖液：0.1M甘氨酸•HCl，pH 2.8

B.程序
注意：所需抗原的量和孵育時(shí)間取決于所用的抗體 - 抗原系統(tǒng)，并且必須針對(duì)每個(gè)特定系統(tǒng)進(jìn)行優(yōu)化。為了適當(dāng)混合，確?？偡磻?yīng)體積不能*填充微量離心管。

1.將Avidin磁珠和試劑平衡至室溫。
2.為了形成免疫復(fù)合物，將生物素化抗體加入樣品或裂解液中，在室溫下孵育至少30分鐘或在4℃下孵育過夜。
3.輕輕旋轉(zhuǎn)Avidin磁珠瓶，以獲得均勻的懸浮液。將適量的珠漿移液到微量離心管中。磁性分離并丟棄上清液。
4.加入結(jié)合緩沖液洗滌Avidin磁珠兩次，磁力分離2分鐘。丟棄上清液。
5.將免疫復(fù)合物添加到珠子中并在室溫或4℃下混合孵育1小時(shí)。
6.用結(jié)合緩沖液洗滌抗生物素蛋白結(jié)合的復(fù)合物并磁力分離2分鐘。丟棄上清液。重復(fù)此洗滌程序至少四次。
7.樣品可以在SDS-PAGE樣品緩沖液中煮沸并電泳用于分析。或者，將洗脫緩沖液加入到珠子中以回收抗原。如果使用0.1M甘氨酸•HCl，pH 2.8，則通過加入適當(dāng)?shù)臐饪s緩沖液如1M Tris，pH 7.5（100μL該緩沖液至1mL樣品就足夠）立即去除液體并立即調(diào)節(jié)回收級(jí)分的pH。