SYBR Green I(10000×)電泳用

SYBR Green I是高靈敏的DNA熒光染料，適用于各種電泳分析，操作簡(jiǎn)單：無(wú)須脫色或沖洗。至少可檢出20pg DNA，高于EB染色法25-100倍。SYBR Green I 與dsDNA結(jié)合熒光信號(hào)會(huì)增強(qiáng)800-1000倍，用SYBR Green I染色的凝膠樣品熒光信號(hào)強(qiáng)，背景信號(hào)低?？蛇m用于多種電泳分析。

SYBR Green I適合于多種凝膠電泳方法：瓊脂糖凝膠，聚丙烯酰胺凝膠電泳，脈沖電場(chǎng)凝膠電泳，和毛細(xì)管電泳等。

SYBR Green I與雙鏈DNA的親和力非常高，因此可以用做電泳前染色，對(duì)分子生物學(xué)中常用的酶（如：Taq酶、逆轉(zhuǎn)錄酶、內(nèi)切酶、T4連接酶等）沒(méi)有抑制作用。另外，SYBR Green I與EB相比，誘變能力大大降低。

SYBR Green I核酸染料特點(diǎn)

高靈敏：至少可檢出20pg DNA，高于EB染色法25-100倍。

信噪比高：樣品熒光信號(hào)強(qiáng)，背景信號(hào)低。

操作簡(jiǎn)單：無(wú)須脫色或沖洗。

適用范圍廣：可適用于多種電泳分析。

使用方便：不影響其它修飾酶作用。

安全性高：分子克隆上明確誘變能力很低

使用方法

SYBR Green I預(yù)染方法

1. 該方法適于瓊脂糖凝膠電泳和PAGE凝膠電泳
2. 工作液的配制：用電泳緩沖液將10000×的SYBR GreenⅠ稀釋100倍，即為SYBR GreenⅠ工作液。SYBR GreenⅠ工作液可以置2-8℃冷藏一個(gè)月以上。
3. 制膠：按常規(guī)方法制膠，不含任何染料。
4. 樣品染色：向分析樣品中加入SYBR GreenⅠ工作液和載樣緩沖液，室溫放置10分鐘，使SYBR GreenⅠ與樣品中DNA充分結(jié)合。SYBR GreenⅠ工作液加入量為總上樣量的1/10。
5. DNA Marker染色：將5μL DNA Marker和1μLSYBR GreenⅠ工作液混勻，室溫放置5分鐘，使SYBR GreenⅠ與DNA充分結(jié)合。（商品Marker稀釋2-5倍后再電泳，否則電泳條帶會(huì)變形，特別是大片段。）
6. 上樣、電泳：按常規(guī)操作。

SYBR Green I后染方法

1. 按照常規(guī)方法進(jìn)行電泳。
2. 用PH=7.0-8.5的緩沖液（如：TAE，TBE或TE），按照10000：1的比例稀釋SYBR GreenⅠ濃縮液，混勻，制成染色溶液。
3. 將染色溶液倒入合適的聚丙烯容器中，放入凝膠，用鋁箔等蓋住容器使染料避光。室溫振蕩染色10-30分鐘，染色時(shí)間因凝膠濃度和厚度而定。聚丙烯酰胺凝膠直接在玻璃平皿上染色，將配好的工作溶液輕輕地倒在膠板上，讓工作液均勻地覆蓋整個(gè)膠板，并染色30分鐘。玻璃平皿必須預(yù)先經(jīng)過(guò)硅烷化溶液處理（避免染料吸附在玻璃表面上）。
4. 用紫外儀觀測(cè)。

SYBR Green I使用注意事項(xiàng)

1. 在"SYBR GreenⅠ預(yù)染色方法"中，電泳時(shí)間不要超過(guò)2小時(shí)，否則SYBR GreenⅠ會(huì)從DNA上分離出來(lái)，會(huì)產(chǎn)生彌散狀條帶。
2. 在常規(guī)用酒精沉淀核酸的過(guò)程中，SYBR Green I可以全部從雙鏈核酸上去掉。
3. 如果想對(duì)用 SYBR Green I 染過(guò)的膠進(jìn)行Southern blots，建議在預(yù)雜化和雜化溶液中加入0.1%- 0.3%的SDS。
4. 在紫外照射透視下，與雙鏈DNA接合的SYBR Green I呈現(xiàn)綠色熒光。如果膠中含有單鏈DNA則顏色為橘黃而不是綠色。
5. SYBR Green對(duì)玻璃和非聚丙烯材料具有一定親合力。建議在稀釋、貯存、染色等使用過(guò)程中用聚丙烯類容器。