ScreenFect™ A plus
- 公司名稱 富士膠片和光（廣州）貿(mào)易有限公司
- 品牌 其他品牌
- 型號(hào)
- 產(chǎn)地 日本
- 廠商性質(zhì) 生產(chǎn)廠家
- 更新時(shí)間 2025/1/14 17:17:21
- 訪問次數(shù) 784
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富士膠片和光（廣州）貿(mào)易有限公司是日本富士膠片和光純藥株式會(huì)社（FUJIFILM Wako Pure Chemical Corporation）在中國的子公司，主營富士膠片和光品牌試劑產(chǎn)品，供應(yīng)產(chǎn)品超50,000種，囊括了生命科學(xué)、藥品生產(chǎn)、品質(zhì)管理領(lǐng)域、合成與材料、分析各個(gè)領(lǐng)域。
基于“想要為科研人員提供幫助”的創(chuàng)業(yè)初衷，富士膠片和光純藥（FUJIFILM Wako）作為一家滿足前沿研究領(lǐng)域需求的綜合試劑制造商，一直致力于生產(chǎn)和開發(fā)高品質(zhì)的產(chǎn)品，并于2022年6月迎來了創(chuàng)業(yè)100周年。通過發(fā)揮企業(yè)優(yōu)勢(shì)“技術(shù)力”，以及三大核心業(yè)務(wù)的試劑業(yè)務(wù)、化成品業(yè)務(wù)和臨床診斷業(yè)務(wù)來滿足學(xué)術(shù)界、企業(yè)以及醫(yī)療相關(guān)企業(yè)的廣泛需求。
憑借100 年的歷史經(jīng)驗(yàn)，富士膠片和光純藥（FUJIFILM Wako）在日本市場(chǎng)占據(jù)高份額，作為全球性的試劑供應(yīng)商，以“成就科學(xué)未來之力，創(chuàng)造幸福源泉”為愿景，致力于高品質(zhì)試劑的生產(chǎn)與開發(fā)。通過提供試劑，為再生醫(yī)療、癌癥、精神/神經(jīng)疾病和抗體藥物等各類基礎(chǔ)研究和前沿研究做貢獻(xiàn)，并獲得 ISO9001等多項(xiàng)國際認(rèn)證?；诳煽康募夹g(shù)和品質(zhì)、以及科研人員之間的信賴，作為富士膠片集團(tuán)的一員將不斷實(shí)現(xiàn)全球化發(fā)展。
主要業(yè)務(wù)——試劑
作為富士膠片和光純藥（FUJIFILM Wako）試劑業(yè)務(wù)的中國子公司，富士膠片和光（廣州）貿(mào)易有限公司可提供各個(gè)領(lǐng)域測(cè)試和研究用途的生命科學(xué)試劑和化學(xué)試劑。
試劑業(yè)務(wù) | ||||||
可廣泛提供生命科學(xué)和化學(xué)領(lǐng)域的測(cè)試研究用產(chǎn)品 | ||||||
生命科學(xué)領(lǐng)域 | 化學(xué)領(lǐng)域 | |||||
● 培養(yǎng)基生產(chǎn) ● 抗體制備 ● 定制服務(wù) |
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● 認(rèn)證標(biāo)準(zhǔn)品 ● 有機(jī)化學(xué) |
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作為優(yōu)質(zhì)的試劑企業(yè)，我們可以提供滿足不同客戶需求的高品質(zhì)產(chǎn)品。試劑業(yè)務(wù)自創(chuàng)業(yè)以來，已持續(xù)不斷地提供了廣泛領(lǐng)域的試劑產(chǎn)品，并致力于成為滿足前沿技術(shù)領(lǐng)域各項(xiàng)研究需求的試劑制造商。今后也將以過往技術(shù)經(jīng)驗(yàn)為基石，發(fā)揮作為可信賴的研究支持合作伙伴的作用。
產(chǎn)品一覽
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● 常規(guī)試劑 ● 有機(jī)合成試劑 ● 環(huán)境分析試劑 ● 精密分析試劑 ● 色譜試劑 | ● 生化學(xué)用試劑 ● 基因研究用試劑 ● 免疫研究用試劑 ● 病理研究用試劑 ● 細(xì)胞培養(yǎng)用試劑 | ● 內(nèi)毒素檢測(cè)用試劑 ● 生物藥生產(chǎn)用培養(yǎng)基 ● 研究用基礎(chǔ)培養(yǎng)基 ● 定制服務(wù) ● 設(shè)備和耗材 |
豐富的產(chǎn)品類目以及快速供應(yīng)體系
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 | 致力于持續(xù)監(jiān)測(cè)市場(chǎng)的需求并跟蹤世界的研究動(dòng)向。為了能夠及時(shí)準(zhǔn)確地響應(yīng)客戶的需求，富士膠片和光建立了以自有品牌為中心的豐富產(chǎn)品體系，為各界的研究和開發(fā)領(lǐng)域提供細(xì)致的服務(wù)與支持 。 |
高品質(zhì)的試劑提供和生產(chǎn)體系
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 | 試劑生產(chǎn)工廠以東京工廠和大阪工廠為中心，發(fā)揮優(yōu)質(zhì)技術(shù)力量建立的高品質(zhì)生產(chǎn)體系。愛知工廠配備齊全的培養(yǎng)基生產(chǎn)設(shè)備，可用于生產(chǎn)再生醫(yī)療和生物制藥生產(chǎn)用的培養(yǎng)基。 |
優(yōu)質(zhì)的客戶服務(wù)和產(chǎn)品信息
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 | 通過定期更新的主頁網(wǎng)站、富士膠片和光生物微信公眾號(hào)、富士膠片和光化學(xué)分析微信公眾號(hào)，以及不定期的富士膠片和光生物視頻號(hào)、網(wǎng)絡(luò)研討會(huì)和線下展會(huì)，致力于為客戶提供優(yōu)質(zhì)的服務(wù)以及不斷更新的產(chǎn)品信息。 |
強(qiáng)化全球化事業(yè)的開展
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 | 建立日本海外銷售體系，通過提供富士膠片和光純藥（FUJIFILM Wako）優(yōu)質(zhì)研發(fā)力量生產(chǎn)的高品質(zhì)產(chǎn)品，積極推進(jìn)全球化業(yè)務(wù)。 |
企業(yè)歷史沿革
年份 | 內(nèi)容 |
1922年6月 | 從武田長兵衞商店（現(xiàn)武田薬品工業(yè)株式會(huì)社）的化學(xué)藥品部門獨(dú)立出來，成立了武田化學(xué)薬品 株式會(huì)社 |
1940年 | 大阪工廠竣工 |
1944年 | 東京工廠竣工 |
1947年 | 更名為和光純薬工業(yè)株式會(huì)社 |
1950年 | 展開化成品業(yè)務(wù) |
1952年 | 總部遷移至大阪 |
1960年 | 展開臨床檢測(cè)藥業(yè)務(wù) |
1968年 | 播磨工廠竣工 |
1972年 | 公司總部竣工 |
1974年 | 成立德國和光純薬有限會(huì)社（今?FUJIFILM Wako Chemicals Europe GmbH） |
1981年 | 成立美國和光純薬株式會(huì)社（今?FUJIFILM Wako Chemicals U.S.A Corporation） |
1989年 | 建設(shè)東部配送中心 |
1991年 | 建設(shè)西部配送中心 |
2004年 | 愛知工廠竣工 |
2012年 | 成立和光純耀（上海）化學(xué)有限公司（今?富士膠片和光純藥（上海）化學(xué)有限公司） |
2015年 | 收購株式會(huì)社シバヤギ（今?群馬辦事處） |
2017年 | 成為FUJIFILM Corporation的全資子公司 |
2018年 | 更名為富士膠片和光純藥株式會(huì)社 |
2019年 | 合并IS Japan Co.,Ltd.（今?戶田辦事處） |
2022年 | 成立100周年 |
生物化學(xué)試劑、儀器和耗材
| 供貨周期 | 一個(gè)月以上 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 化工,生物產(chǎn)業(yè),制藥/生物制藥 |
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ScreenFect A+
DNA & siRNA 轉(zhuǎn)染試劑
通過點(diǎn)擊化學(xué)開發(fā)的新型脂質(zhì)體??！
ScreenFect ™A plus（也稱作ScreenFect ™A+）是通過點(diǎn)擊化學(xué)（Click Chemistry）篩選※1出的新型陽離子脂質(zhì)體組成的轉(zhuǎn)染試劑，適用于各種真核生物來源的細(xì)胞，也可直接添加至含有抗生素或者血清的培養(yǎng)基中。
使用 ScreenFect ™A plus轉(zhuǎn)染試劑可將DNA和siRNA導(dǎo)入通用實(shí)驗(yàn)細(xì)胞系（HeLa、HepG2、MDCK等）、干細(xì)胞（小鼠ES細(xì)胞等）、血細(xì)胞（巨噬細(xì)胞、THP-1、RAW264.7等）、小膠質(zhì)細(xì)胞、原代細(xì)胞（原代培養(yǎng)）和昆蟲細(xì)胞中。其細(xì)胞毒性低，因此轉(zhuǎn)染后無需更換培養(yǎng)基。另外，試劑成分中不含有任何有毒有害物質(zhì)。
※1 Biomaterials. 2012 Nov; 33(32):8160-6. 2012
特點(diǎn)
● DNA和ScreenFect ™A plus試劑混合比例可選范圍更廣
● 使用一步法縮短分析時(shí)間至1天
● 可高效轉(zhuǎn)染難以導(dǎo)入的細(xì)胞
● 成本低
ScreenFect ™A plus 轉(zhuǎn)染性能
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※ MCF-7：人乳腺癌來源細(xì)胞（上皮細(xì)胞樣形態(tài)）（貼壁系）
※ 導(dǎo)入方法：A公司新產(chǎn)品 → 2步法，ScreenFect ™A plus → 1步法
改善難以導(dǎo)入的細(xì)胞的轉(zhuǎn)染效率！ |
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※ MDCK：狗腎小管上皮細(xì)胞來源（貼壁系）
※ 導(dǎo)入方法：A公司新產(chǎn)品 → 2步法，ScreenFect ™A plus → 1步法
改善難以導(dǎo)入的細(xì)胞的轉(zhuǎn)染效率！ |
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※ K562：人慢性髓性細(xì)胞白血病細(xì)胞來源（懸浮系）
※ 導(dǎo)入方法：A公司新產(chǎn)品 → 2步法，ScreenFect ™A plus → 1步法
改善難以導(dǎo)入的細(xì)胞的轉(zhuǎn)染效率！ |
◆應(yīng)用數(shù)據(jù)
1. 向LNCaP細(xì)胞（貼壁系）中導(dǎo)入YFP融合基因的實(shí)驗(yàn)
進(jìn)行向LNCaP細(xì)胞（貼壁系）中導(dǎo)入YFP融合基因的實(shí)驗(yàn)，在熒光顯微鏡下比較導(dǎo)入基因的表達(dá)效率。
使用ScreenFect ™A plus和增強(qiáng)劑SFA P-reagent，可以觀察到與其他公司產(chǎn)品相同或更高的表達(dá)效率。
※ 數(shù)據(jù)刊登于BioWindow No144 (2016年6月號(hào))
LNCap (人前列腺癌) 中的性能比較
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〔接種細(xì)胞數(shù)〕3×105 cells/well 〔質(zhì)粒DNA量〕1 µg/assay 〔轉(zhuǎn)染試劑混合比例〕 pDNA量 (µg) : ScreenFect ™A plus reagent (µL) = 1 : 3 〔孔板〕24孔板 | 〔接種細(xì)胞數(shù)〕1.5×105 cells/well 〔質(zhì)粒DNA量〕1 µg/assay 〔轉(zhuǎn)染試劑混合比例〕 pDNA量 (µg) : ScreenFect ™A plus reagent (µL) = 1 : 3 〔孔板〕24孔板 |
2. 向HeLa細(xì)胞（貼壁系）中導(dǎo)入EGFP_mRNA的實(shí)驗(yàn)
進(jìn)行向HeLa細(xì)胞（貼壁系）中導(dǎo)入EGFP_mRNA的實(shí)驗(yàn)，在熒光顯微鏡下比較EGFP的表達(dá)效率。
使用ScreenFect ™A plus和增強(qiáng)劑SFA P試劑（產(chǎn)品編號(hào)：191-18331、197-18333），可以觀察到與其他公司產(chǎn)品相同或更高的表達(dá)效率。
※ 數(shù)據(jù)刊登于BioWindow No144 (2016年6月號(hào))
HeLa細(xì)胞中的mRNA轉(zhuǎn)染性能比較
〔接種細(xì)胞數(shù)〕0.7 x 105 cells/well
〔mRNA量〕0.1 µg/assay
〔轉(zhuǎn)染試劑混合比例〕mRNA量 (µg) : ScreenFect ™ A plus 試劑(µL) = 1 : 4
〔檢測(cè)時(shí)間〕轉(zhuǎn)染后48 h
〔曝光時(shí)間〕2 s
3. 向hiPSC（201B7株）中導(dǎo)入GFP融合基因的實(shí)驗(yàn)
進(jìn)行將hiPSC（201B7株) 通過反向轉(zhuǎn)染（1-STEP)導(dǎo)入GFP融合基因的實(shí)驗(yàn)，在熒光顯微鏡以及流式細(xì)胞儀下比較導(dǎo)入基因的表達(dá)效率。
使用反向轉(zhuǎn)染法轉(zhuǎn)染hiPS細(xì)胞的效果優(yōu)異，在StemSure® hPSC培養(yǎng)基Δ和mTeSR™ 1兩個(gè)培養(yǎng)基中，ScreenFect ™A plus表現(xiàn)出與其他公司產(chǎn)品相同或更高的導(dǎo)入效率。
※ 數(shù)據(jù)刊登于BioWindow No144 (2016年6月號(hào))
hiPSC（201B7株)中的性能比較
1-step 使用StemSure® hPSC培養(yǎng)基Δ | |
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ScreenFect™A plus的轉(zhuǎn)染條件 〔細(xì)胞數(shù)〕5×105 cells/well 〔質(zhì)粒DNA量〕4 µg/assay 〔轉(zhuǎn)染試劑混合比例〕 pDNA量 (µg) : ScreenFect ™A plus reagent (µL) = 1 : 0.5 〔孔板〕12孔板 〔備注〕SFA plus reagent以及pDNA使用了Opti-MEM® 進(jìn)行稀釋。 | 其他公司產(chǎn)品的轉(zhuǎn)染條件 〔細(xì)胞數(shù)〕5×105 cells/well 〔質(zhì)粒DNA量〕2 µg/assay 〔轉(zhuǎn)染試劑混合比例〕 pDNA量 (µg) : ScreenFect ™A plus reagent (µL) = 1 : 2 〔孔板〕12孔板 |
1-step 使用mTeSR™1培養(yǎng)基 | |
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ScreenFect™A plus和其他公司產(chǎn)品的轉(zhuǎn)染條件 〔細(xì)胞數(shù)〕5×105 cells/well 〔質(zhì)粒DNA量〕1 µg/assay 〔轉(zhuǎn)染試劑混合比例〕 pDNA量 (µg) : ScreenFect ™A plus reagent (µL) = 1 : 2 〔孔板〕12孔板 〔備注〕SFA plus reagent以及pDNA使用了Opti-MEM® 進(jìn)行稀釋。 | |
4. 向HeLa細(xì)胞（貼壁系）中導(dǎo)入PIK3CB siRNA的實(shí)驗(yàn)
使用反向轉(zhuǎn)染（1-STEP）法以及正向轉(zhuǎn)染（2-STEP）法進(jìn)行向HeLa細(xì)胞中導(dǎo)入PIK3CB siRNA的實(shí)驗(yàn)，通過實(shí)時(shí)定量PCR測(cè)量PIK3CB mRNA的表達(dá)水平。
在定量結(jié)果的基礎(chǔ)上與其他公司產(chǎn)品比較敲降效率，結(jié)果顯示ScreenFect ™A plus表現(xiàn)出與其他公司產(chǎn)品相同或更高的敲降效率。
※ 數(shù)據(jù)刊登于BioWindow No149 (2017年3月號(hào))
HeLa細(xì)胞中的性能比較
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〔接種細(xì)胞數(shù)〕1×105 cells/well 〔siRNA〕5 pmol/assay 〔轉(zhuǎn)染試劑混合比例〕ScreenFect ™A plus reagent = 0.5～1.5 µL 其他公司產(chǎn)品 = 1.5 μL 〔孔板〕24孔板 〔檢測(cè)時(shí)間〕48 h后進(jìn)行確認(rèn) | 〔接種細(xì)胞數(shù)〕0.5×105 cells/well 〔siRNA〕5 pmol/assay 〔轉(zhuǎn)染試劑混合比例〕ScreenFect ™A plus reagent = 0.5～1.5 µL 其他公司產(chǎn)品 = 1.5 μL 〔孔板〕24孔板 〔檢測(cè)時(shí)間〕48 h后進(jìn)行確認(rèn) |
◆使用方法、擁有使用實(shí)績的細(xì)胞
1-Step與2-Step 操作比較
產(chǎn)品 | ScreenFect™A plus | A公司新產(chǎn)品(+reagent) | A公司的新產(chǎn)品 |
各條件 | 1-Step | 2-Step | |
實(shí)驗(yàn)方案天數(shù) | 2 Days | 3 Days | |
DNA量 | 少 | 多 | |
是否需要調(diào)整細(xì)胞數(shù) | 可隨時(shí)調(diào)整 | 取決于預(yù)培養(yǎng)條件 | |
是否需要胰-蛋白酶處理 | 轉(zhuǎn)染時(shí) | 預(yù)培養(yǎng)時(shí) | |
基于HTS細(xì)胞檢測(cè)的可操作性 | +++++ | + | |
是否需要更換培養(yǎng)基 | 取決于細(xì)胞 | ||
ScreenFect ™A plus一步法概要
1步法 → 從轉(zhuǎn)染到本分析的時(shí)間可縮短24 h！
ScreenFect ™A plus 轉(zhuǎn)染條件
DNA轉(zhuǎn)染
DNA 轉(zhuǎn)染 (/well) | |||||
孔板類型 | 表面積 | 培養(yǎng)基體積 | SF-DNA 復(fù)合物的總體積 | DNA /稀釋buffer | 轉(zhuǎn)染試劑 /稀釋buffer |
96 wells | 0.3 cm2 | 100 µL | 10 µL | 50 ng/5 μL | 0.15 or 0.2 μL/5 μL |
24 wells | 2 cm2 | 500 µL | 50 µL | 250 ng/25 μL | 0.75 or 1.0 μL/25 μL |
12 wells | 4 cm2 | 1,000 µL | 100 µL | 500 ng/50 μL | 1.5 or 2.0 μL/50 μL |
6 wells | 10 cm2 | 2,000 µL | 250 µL | 1,250 ng/125 μL | 3.75 or 5.0 μL/125 μL |
注：進(jìn)行大規(guī)模轉(zhuǎn)染時(shí)，請(qǐng)?jiān)谵D(zhuǎn)染前準(zhǔn)備多個(gè)微管，之后再進(jìn)行轉(zhuǎn)染。
例：10 cm培養(yǎng)皿轉(zhuǎn)染相當(dāng)于 → 5~6個(gè)樣品（6孔板）
▼ ScreenFect ™A plus 推薦實(shí)驗(yàn)方案
產(chǎn)品隨附的說明書中提供了簡易的實(shí)驗(yàn)方案，請(qǐng)確認(rèn)“相關(guān)資料”中的文件。
ScreenFect™A plus推薦使用1步轉(zhuǎn)染法。在試劑方面，為保證充分的轉(zhuǎn)染效率，推薦質(zhì)粒DNA與轉(zhuǎn)染試劑的混合比例為1 : 3~1 : 4。另外，如希望進(jìn)一步抑制轉(zhuǎn)染時(shí)的細(xì)胞毒性，請(qǐng)使用60~80%匯合度的細(xì)胞。
siRNA轉(zhuǎn)染
siRNA 轉(zhuǎn)染 (/well) | |||||
孔板類型 | 表面積 | 培養(yǎng)基體積 | SF-siRNA 復(fù)合物的總體積 | siRNA /稀釋buffer | 轉(zhuǎn)染試劑 /稀釋buffer |
96 wells | 0.3 cm2 | 100 µL | 10 µL | 1 pmol/5 µL | 0.1～0.3 µL/5 µL |
24 wells | 2 cm2 | 500 µL | 50 µL | 5 pmol/25 µL | 0.5～1.5 µL/25 µL |
12 wells | 4 cm2 | 1,000 µL | 100 µL | 10 pmol/50 µL | 1.0～3 µL/50 µL |
6 wells | 10 cm2 | 2,000 µL | 250 µL | 25 pmol/125 µL | 2.5～7.5 µL/125 µL |
注：雖然ScreenFect ™A plus也可以用于siRNA轉(zhuǎn)染，但更推薦使用ScreenFect ™ siRNA 進(jìn)行siRNA轉(zhuǎn)染。
擁有ScreenFect ™A & A plus 應(yīng)用實(shí)例的細(xì)胞
更多詳細(xì)資料請(qǐng)聯(lián)系富士膠片和光。
No. | 細(xì)胞名稱 | No. | 細(xì)胞名稱 | No. | 細(xì)胞名稱 | No. | 細(xì)胞名稱 |
1 | 143BTK | 22 | GP2-293 | 43 | LLC-MK2 | 64 | OLHNI-2 |
2 | 786-O | 23 | H9C2 | 44 | LO2 | 65 | Mouse overy cell |
3 | A2058 | 24 | HCT116 | 45 | LoVo | 66 | PC12 |
4 | A375 | 25 | HEK293 | 46 | MC3T3 | 67 | Plat-E |
5 | A549 | 26 | HEK293 TN | 47 | MC3T3-E1 | 68 | PLC8024 |
6 | B16 | 27 | HEK293A | 48 | MCF-10 | 69 | Primary Fibroblast |
7 | B16F10 | 28 | HEK293F | 49 | MCF-10A | 70 | RAW264.7 |
8 | Ba/F3-CH1 | 29 | HEK293FT | 50 | MCF-7 | 71 | SH-SY5Y |
9 | BEAS-2B | 30 | HEK293T | 51 | MDCK | 72 | SK-Hep1 |
10 | BEL-7402 | 31 | HeLa | 52 | MEF | 73 | SKOV3 |
11 | BT549 | 32 | HeLa S3 | 53 | mES | 74 | T98G |
12 | C2C12 | 33 | HEp-2 | 54 | mHSC | 75 | TE-13 |
13 | Cell line from killifish 來自鳉魚的細(xì)胞系 | 34 | HepG2 | 55 | Microglia 小膠質(zhì)細(xì)胞 | 76 | THP-1 |
14 | CHO-K1 | 35 | hiPSC | 56 | MLEC | 77 | U-251 MG |
15 | COS-7 | 36 | HK2 | 57 | MS-1 | 78 | U2OS |
16 | DB lymphoma DB淋巴瘤 | 37 | HKC | 58 | Myeloid dendritic cell (MDC) 骨髓樹突狀細(xì)胞 | 79 | U937 |
17 | DC 2.4 | 38 | HL7704 | 59 | NB1RGB | 80 | Vero |
18 | Du145 | 39 | HuH-7 | 60 | NCI-H1703 | 81 | Drosophira ovary somatic cell |
19 | EL4 | 40 | HUVEC | 61 | NE3 | 82 | HT1080 |
20 | Endothelium cell 內(nèi)皮細(xì)胞 | 41 | Ins-1 | 62 | NIH 3T3 | 83 | RH7777 |
21 | EPC(carp) | 42 | L428 | 63 | NK92 | 84 | HaCaT |
富士膠片和光將實(shí)時(shí)更新ScreenFect™數(shù)據(jù)庫中的使用實(shí)例，如對(duì)上述內(nèi)容有疑問，歡迎隨時(shí)聯(lián)系進(jìn)行咨詢。
◆產(chǎn)品列表
| 產(chǎn)品編號(hào) | 產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 |
| 293-73201 | ScreenFect™ A | 0.2 mL |
| 299-73203 | 1 mL | |
| 297-73204 | 1 mL×5 | |
| 293-75901 | ScreenFect™ mRNA | 0.2 mL |
| 299-75903 | 1 mL | |
| 299-75001 | ScreenFect™ siRNA | 0.2 mL |
| 295-75003 | 1 mL | |
| 290-80203 | ScreenFect™ UP-293 | 1 L用 |
| 294-80201 | 100 mL用 | |
| 191-18331 | SFA P-reagent | 100 μL |
| 197-18333 | 500 μL | |
| 194-18181 | ScreenFect™ Dilution Buffer | 50 mL |
【相關(guān)資料】
◆一步法和兩步法實(shí)驗(yàn)流程的比較
產(chǎn)品名稱 | ScreenFect ™ A plus | Ａ廠家新產(chǎn)品 （+試劑） | Ａ廠家產(chǎn)品 |
推薦的實(shí)驗(yàn)流程 | 一步法 | 兩步法 | |
實(shí)驗(yàn)用時(shí) | ２天 | ３天 | |
所需DNA量 | 低 | 高 | |
細(xì)胞數(shù)目調(diào)整 | 靈活 | 不靈活 | |
胰-酶消化 | 需要 | 需要 | |
適于高通量篩選 | +++++ | + | |
培養(yǎng)基的更換 | 取決于細(xì)胞系 | ||
一步法比兩步法節(jié)省24小時(shí)！
高性價(jià)比的高性能基因?qū)朐噭?/strong>
ScreenFect ™ 通信
基因?qū)肴?iPS 細(xì)胞實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)
介紹使用 ScreenFect ™A plus 將基因?qū)肴薸PS細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)結(jié)果和操作步驟。本文記載了作為 iPS 細(xì)胞支架使用的 Matrigel 孔板包被方法、配制含有 Y-27632 的細(xì)胞懸浮液的操作步驟以及推薦的試劑比例，供您參考。
◆導(dǎo)入人iPS細(xì)胞（201B7株）的轉(zhuǎn)染操作實(shí)例
在這里，我們將介紹一些使用 StemSure® hPSC 培養(yǎng)基Δ（產(chǎn)品編號(hào)：197-17571）的操作實(shí)例。該操作步驟的完整版和使用 mTeSR1 培養(yǎng)基的操作步驟，請(qǐng)與富士膠片和光聯(lián)系獲取。
<轉(zhuǎn)染試劑的配制>
將 2.0 μL 的 ScreenFect ™ A plus reagent、4.0 μg 的質(zhì)粒 DNA 加入到 160 μL 的 Opti-MEM 中制成 DNA-lipid complex。
< Matrigel 包被孔板>
1. ４°C下溶解 Matrigel hESC-Qualified Matrix 。為防止發(fā)生凝固，請(qǐng)避免在室溫下溶解。
2. 用 25 mL 冷卻的 D-MEM/Ham's F-12 稀釋 300μL 的 Matrigel。
3. 稀釋后的 Matrigel 溶液按照 1 mL/well 加入到 12 孔板中。
4. 在室溫下孵育１小時(shí)以上。
<細(xì)胞懸液的配制>
1. 將 StemSure® hPSC 培養(yǎng)基Δ在 2-8℃ 下放置數(shù)小時(shí)或過夜緩慢融解。不要在 37° C下解凍，并在一周內(nèi)使用。
2. 將 bFGF（產(chǎn)品編號(hào)：064-05381,068-05384）按照終濃度 35-100ng/mL 添加到融解后的 StemSure® hPSC 培養(yǎng)基△中，配制成完-全培養(yǎng)基（以下稱為 sshPSC 培養(yǎng)基）。
3. 使用前將 sshPSC 培養(yǎng)基恢復(fù)至室溫。不要使用溫水浴。
4. 將 Y-27632 按照終濃度 10 μmol/L 添加到 sshPSC 培養(yǎng)基中（以下稱為 ROCKi+培養(yǎng)基）。
5. 去除 hiPS 細(xì)胞培養(yǎng)孔板中的培養(yǎng)基，用 PBS（-）清洗細(xì)胞一次。
*請(qǐng)?jiān)诩?xì)胞匯片達(dá)到80％且處于對(duì)數(shù)增殖期時(shí)進(jìn)行細(xì)胞轉(zhuǎn)染。
6. 除去 PBS（-），添加 Stempro Accutase。
7. 在 37°C，5％CO2 培養(yǎng)箱中靜置５分鐘。
8. 用 1 mL 微量移液槍添加 ROCKi+培養(yǎng)基，將細(xì)胞從培養(yǎng)板上分離并吹散成單細(xì)胞。
9. 轉(zhuǎn)移至 15 mL離心管中。
10. 室溫下 1000 rpm（約170×g）離心３分鐘。
11. 去除上清，用ROCKi+培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。
12. 計(jì)算活細(xì)胞的數(shù)量。
13. 用 ROCKi+培養(yǎng)基將細(xì)胞濃度調(diào)整至 5×105 cells/mL。
<轉(zhuǎn)染>
添加 1 mL 配制好的 DNA-lipid complex 到細(xì)胞懸液中，使用移液器充分混勻，并接種在 12 孔板中。
※要點(diǎn)
接種 24 小時(shí)后請(qǐng)更換培養(yǎng)基。此時(shí)的培養(yǎng)基不需要含有 Y-27632。
◆實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)
通過反向轉(zhuǎn)染（1-STEP）將 GFP 融合基因?qū)?hiPS 細(xì)胞（201B7株），并通過熒光顯微鏡比較基因的導(dǎo)入效率。
<StemSure® hPSC 培養(yǎng)基Δ的使用>
細(xì)胞數(shù)：5×105 cells/well
質(zhì)粒 DNA 量：4 μg/assay
轉(zhuǎn)染試劑混合比例：DNA 量（μg）：ScreenFect ™ A plus reagent (μL)=1 : 0.5
容器：12 孔板
備注：用 Opti-MEM 稀釋 ScreenFect ™ A plus reagent 和 DNA。
細(xì)胞數(shù)：5 x 105 cells/well
質(zhì)粒 DNA 量：1 μg/assay
轉(zhuǎn)染試劑混合比例：DNA數(shù)量（μg）：ScreenFect ™ A plus reagent (μL)=1 : 2
容器：12 孔板
備注：用 Opti-MEM 稀釋 ScreenFect ™ A plus reagent 和 DNA。
◆使用上的注意
● 建議在單細(xì)胞狀態(tài)下進(jìn)行人iPS細(xì)胞的基因?qū)搿?/span>
● 建議基因?qū)霑r(shí)的細(xì)胞數(shù)約為 5×105 cells/well。
● 當(dāng)質(zhì)粒 DNA 量多時(shí)，導(dǎo)入基因的表達(dá)量高會(huì)引起細(xì)胞死亡。
【請(qǐng)聯(lián)系富士膠片和光獲取PDF】
◆Q＆A
Q1. 基因?qū)胄实驮趺崔k？
A1. 通過優(yōu)化DNA量和試劑用量可提高效率。另有優(yōu)化Protocol（日語版/英語版），可聯(lián)系富士膠片和光獲取。此外，使用ScreenFect™和SFA P-reagent（產(chǎn)
A1. 品編號(hào)：191-18331）也可提高基因?qū)胄省?/span>
Q2. 如何提高表達(dá)效率？
A2. 使用ScreenFect™和SFA P-reagent（產(chǎn)品編號(hào)：191-18331）可提高表達(dá)水平。
Q3. 轉(zhuǎn)染試劑對(duì)細(xì)胞毒性強(qiáng)怎么辦？
A3. 使用ScreenFect™和SFA P-reagent（產(chǎn)品編號(hào)：191-18331）可降低細(xì)胞毒性。
Q4. 從哪些條件實(shí)驗(yàn)開始比較好？
A4. 可參考各ScreenFect™產(chǎn)品的快速Protocol（日語版/英語版），請(qǐng)聯(lián)系富士膠片和光獲取。
Q5. 轉(zhuǎn)染過程是否需要更換培養(yǎng)基？
A5. 更換培養(yǎng)基不是必須的，但在添加轉(zhuǎn)染試劑前更換新鮮的培養(yǎng)基可提高基因?qū)胄?，改善?xì)胞狀態(tài)。
Q6. 培養(yǎng)基中能否含有血清和抗生素？
A6. 根據(jù)細(xì)胞類型、DNA導(dǎo)入量等因素，可能需要更換培養(yǎng)基，以適時(shí)控制培養(yǎng)基含或不含血清/抗生素。請(qǐng)根據(jù)實(shí)驗(yàn)用途進(jìn)行討論。
Q7. 1-Step、2-Step是什么？
A7. 1-Step是一種反向轉(zhuǎn)染方法，即轉(zhuǎn)染前通過在細(xì)胞分離狀態(tài)下添加試劑來導(dǎo)入基因。
A7. 2-Step是一種正向轉(zhuǎn)染法，即提前一天進(jìn)行細(xì)胞的預(yù)培養(yǎng)，然后在細(xì)胞上添加轉(zhuǎn)染試劑后導(dǎo)入基因。
Q8. 能否同時(shí)導(dǎo)入多個(gè)基因？
A8. 可以。請(qǐng)準(zhǔn)備多種耐藥性基因，推薦使用pEBMulti 和 pCAG。
Q9. ScreenFect ™A和ScreenFect ™A plus分別適用于哪種情況？
A9. 通常情況下推薦使用基因?qū)胄矢叩腟creenFect ™A plus。但如果其對(duì)細(xì)胞毒性強(qiáng)或與ScreenFect™A plus相比無性能差異時(shí)，推薦使用細(xì)胞
A1. 毒性低且價(jià)格實(shí)惠的ScreenFect ™A。
Q10. 需要轉(zhuǎn)染siRNA時(shí)，推薦使用哪種ScreenFect ™？
A10. 可使用ScreenFect ™ siRNA。視情況，ScreenFect ™A plus也能有效轉(zhuǎn)染siRNA。使用ScreenFect ™siRNA無法達(dá)到預(yù)期結(jié)果時(shí)，可考慮
A11. 兩種試劑一同使用。
Q11. 需要轉(zhuǎn)染mRNA時(shí)，推薦使用哪種ScreenFect ™？
A11. 可使用ScreenFect ™mRNA。與SFA P-reagent一同使用時(shí)，可有效轉(zhuǎn)染mRNA，提高表達(dá)水平。
A11. 此外，ScreenFect ™A plus和SFA P-reagent共同使用的最適場(chǎng)景因細(xì)胞而異，部分情況下兩者共同使用能達(dá)到優(yōu)良效果。單獨(dú)使用
A11. ScreenFect ™mRNA無法達(dá)到預(yù)期結(jié)果時(shí)，可考慮上述兩種試劑一同使用。
Q12. SFA P-reagent是什么？
A12. 將質(zhì)粒DNA或mRNA導(dǎo)入各種細(xì)胞時(shí)，SFA P-reagent和ScreenFect ™一同使用可提高細(xì)胞導(dǎo)入率和轉(zhuǎn)染分子的表達(dá)水平。此外，已確認(rèn)添加
A11. SFA P-reagent還能顯著降低轉(zhuǎn)染試劑的細(xì)胞毒性。
Q13. 有在哪些細(xì)胞中的應(yīng)用實(shí)例？
A13. 已在通用細(xì)胞系（HeLa、HepG2、MDCK、MCF-7、K562 等）、干細(xì)胞、造血細(xì)胞（巨噬細(xì)胞、THP-1、RAW264.7 等）、小膠質(zhì)細(xì)胞、
A11. 原代細(xì)胞、昆蟲培養(yǎng)細(xì)胞、魚類培養(yǎng)細(xì)胞及其他細(xì)胞中實(shí)現(xiàn)基因?qū)搿?/span>
A11. 更多詳情可查看優(yōu)化Protocol（日語版/英語版），歡迎聯(lián)系富士膠片和光獲取。
Q14. 是否可提供試用裝？
A14. 歡迎向我們聯(lián)系并填寫表格申請(qǐng)?jiān)囉醚b。
Q15. ScreenFect ™是什么試劑？
A15. ScreenFect ™是一種由新型陽離子脂質(zhì)體構(gòu)成的轉(zhuǎn)染試劑。
Q16. 冷凍存儲(chǔ)會(huì)對(duì)產(chǎn)品性能有影響嗎？
A16. 請(qǐng)勿使用冷凍后的產(chǎn)品。
Q17. 如何調(diào)整所用的質(zhì)粒DNA？
A17. 推薦使用陰離子交換柱或氯化銫密度梯度離心法純化的質(zhì)粒DNA。
Q18. 血清會(huì)影響基因?qū)雴幔?/span>
A18. 血清不會(huì)影響本產(chǎn)品的性能，但建議轉(zhuǎn)染時(shí)避免使用EDTA 和硫酸葡聚糖等陰離子抑制劑。此外，轉(zhuǎn)染時(shí)避免使用抗生素也可提高轉(zhuǎn)染效率。
◆參考文獻(xiàn)
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