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我國科學家利用結(jié)構(gòu)預(yù)測和交聯(lián)質(zhì)譜 完善冷凍電鏡的綜合表征
2022年11月28日 14:09:03 來源:化工儀器網(wǎng) 作者:宋池 點擊量:4870

近日,華中農(nóng)業(yè)大學和北京大學的研究團隊在Cell Research發(fā)表了一項研究成果,利用結(jié)構(gòu)預(yù)測和交聯(lián)質(zhì)譜獲得RNAm6A甲基轉(zhuǎn)移復(fù)合體的結(jié)構(gòu)模型,搭建了冷凍電鏡中的“缺失”結(jié)構(gòu)。

  【化工儀器網(wǎng) 項目成果】近日,華中農(nóng)業(yè)大學和北京大學的研究團隊在Cell Research發(fā)表了一項研究成果,利用結(jié)構(gòu)預(yù)測和交聯(lián)質(zhì)譜獲得RNAm6A甲基轉(zhuǎn)移復(fù)合體的結(jié)構(gòu)模型,搭建了冷凍電鏡中的“缺失”結(jié)構(gòu)。
 
  RNA是體現(xiàn)細胞生命活動的重要載體,通過轉(zhuǎn)錄和轉(zhuǎn)錄后調(diào)控的方式對遺傳信息進行解碼和重編碼,并參與到細胞的生長代謝中。RNA上有超過150種修飾,6-甲基腺嘌呤(m6A)是高等生物mRNA中含量最多的甲基化修飾形式之一,在RNA的動態(tài)調(diào)節(jié)中發(fā)揮重要作用,影響了胚胎發(fā)布、神經(jīng)元刁姐和腫瘤發(fā)生等眾多生物學過程。
 
  mRNA的m6A修飾由m6A甲基化轉(zhuǎn)移酶復(fù)合體(MTC)催化產(chǎn)生,該復(fù)合體包含核心催化蛋白METTL3和METTL14,以及多個調(diào)節(jié)蛋白,包括WTAP、VIRMA、HAKAI、ZC3H13和RBM15等。對于這一復(fù)合體的結(jié)構(gòu)解析,有助于解釋甲基化修飾的序列選擇性、位點特異性,以及“讀寫”的時空動態(tài)性。
 
  RNA結(jié)構(gòu)研究常用的冷凍電鏡技術(shù)觀察到的主要是WTAP和VIRMA這兩個輔助蛋白,難以觀察METTL3和METTL14核心催化酶。為解決這一問題,研究人員發(fā)展整合結(jié)構(gòu)生物學方法,將交聯(lián)質(zhì)譜和AI結(jié)構(gòu)預(yù)測等多種研究手段和冷凍電鏡聯(lián)合。
 
  對蛋白復(fù)合體進行化學交聯(lián),再用高分辨質(zhì)譜,就能得到相鄰氨基酸之間的距離信息。在此基礎(chǔ)上通過對接,可以獲得m6A甲基轉(zhuǎn)移酶中各個亞基及結(jié)構(gòu)單元的大致空間關(guān)系。同時研究團隊利用AlphaFold2及Colabfold,得到復(fù)合體中蛋白間的各種可能互作方式,將實驗與AI預(yù)測互相比對、迭代和優(yōu)化,最后就得到了RNAm6A甲基轉(zhuǎn)移復(fù)合體的結(jié)構(gòu)模型。
 
  這一模型可以對冷凍電鏡中的電子密度給出更好的歸屬和解釋,而核心結(jié)構(gòu)酶的催化中心緊挨著VIRMA的一側(cè),為后者介導(dǎo)的甲基化修飾的特異性提供了一種解釋。
 
  m6A的失調(diào)與腫瘤等多種疾病有關(guān),該研究是RNA m6A甲基酶復(fù)合物作用機制研究新的突破,將為腫瘤等疾病的防治提供幫助。同時該研究確立的建模計算方法也可以用于其他蛋白質(zhì)體系的研究中。
 
  (資料來源:北京大學新聞網(wǎng))
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