蛋白酶氫/氘交換質(zhì)譜檢測技術(shù)服務(wù)詳情介紹

氫/氘交換質(zhì)譜（Hydrogen/Deuterium Exchange Mass Spectrometry，簡稱HDX-MS）是一種在結(jié)構(gòu)生物學(xué)和生物化學(xué)中用于研究dànbáizhì結(jié)構(gòu)和動態(tài)的強(qiáng)大工具。該技術(shù)基于dànbáizhì在溶液中氫原子與溶劑中的氘原子交換的能力。在dànbáizhì結(jié)構(gòu)的表面或者部分暴露的氨基酸殘基的氫原子可以在一定條件下與溶劑中的氘原子交換。HDX-MS能夠提供關(guān)于dànbáizhì三維結(jié)構(gòu)、折疊、相互作用、動態(tài)以及穩(wěn)定性的信息。

一、實(shí)驗(yàn)流程：

1、氫/氘交換： 將dànbáizhì樣品置于含有重水（D?O）的溶液中，允許dànbáizhì中的可交換氫原子（主要是胺基酸側(cè)鏈和脊椎氨基群的氫原子）與氘發(fā)生交換。

2、交換反應(yīng)停止：

通過將樣品的pH值迅速降低并降低溫度（通常到0°C或更低）來減緩或停止氫/氘交換反應(yīng)。

3、酶切： 使用蛋白酶（如yídànbáiméi）在低溫和低pH下迅速將dànbáizhì分解成肽段。這一步是在盡可能保留氫/氘交換水平的情況下進(jìn)行的

4、質(zhì)譜分析：

酶解得到的肽段通過液相色譜與質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)（LC-MS）進(jìn)行分析。在質(zhì)譜圖中，氫/氘交換導(dǎo)致肽段的質(zhì)量增加，通過測量質(zhì)量的變化，可以推斷dànbáizhì各部分的氫/氘交換速率。

圖1

5、數(shù)據(jù)分析和解釋：

通過比較不同實(shí)驗(yàn)條件（例如，存在或缺乏配體）下的氫/氘交換程度，可以獲得關(guān)于dànbáizhì折疊、動力學(xué)、相互作用界面以及配體結(jié)合對dànbáizhì結(jié)構(gòu)的影響的見解。

二、應(yīng)用：

1、dànbáizhì結(jié)構(gòu)和動態(tài)：

HDX-MS可以揭示dànbáizhì不同區(qū)域的結(jié)構(gòu)和動態(tài)信息，幫助理解dànbáizhì的折疊和運(yùn)動。

2、dànbáizhì-dànbáizhì相互作用：

通過比較dànbáizhì在與其它分子相互作用前后的氫/氘交換模式的變化，可以找出dànbáizhì的相互作用區(qū)域和界面。

3、藥物發(fā)現(xiàn)：

HDX-MS可用于鑒定小分子與dànbáizhì相互作用的區(qū)域，進(jìn)而在藥物發(fā)現(xiàn)中找出潛在的藥物靶點(diǎn)。

4、穩(wěn)定性和構(gòu)象變化：

通過分析dànbáizhì在不同條件下的氫/氘交換模式，可以了解其穩(wěn)定性和構(gòu)象變化。

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