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Thermo 反相色譜柱使用和維護(hù)說(shuō)明

來(lái)源:濟(jì)南興諾科技發(fā)展有限公司   2016年07月27日 17:06  

首先,感謝您選擇性能*的 Thermo 色譜柱產(chǎn)品。

為了使您的色譜柱能發(fā)揮zui大的性能,敬請(qǐng)先閱讀以下說(shuō)明:

 

1、 適用鍵合相

反相色譜柱鍵合相包括:C18、C8、C4、C1、Phenyl、PFP、aQ、Cyano1等。

 

2、 柱體積

色譜柱的柱體積可以通過(guò)以下公式估算:

                             V = 0.68πr2L

V 為色譜柱柱體積(mL),r 為色譜柱內(nèi)徑(cm),L 為色譜柱的長(zhǎng)度(cm)。

 

3、 色譜柱柱效測(cè)試與保存

    反相色譜柱出廠時(shí)都經(jīng)過(guò)柱效測(cè)試,所用化合物為茶堿、鄰-硝基苯胺、苯甲酸甲酯和二甲苯,如有不同,以柱效報(bào)告為準(zhǔn)。

    在條件允許情況下,請(qǐng)對(duì)新色譜柱進(jìn)行柱效測(cè)試。

    反相色譜柱出廠時(shí)均保存在乙腈-水溶液中。

 

4、 溫度

所有硅膠基質(zhì)色譜柱使用溫度應(yīng)低于 60℃。

 

5、 樣品

    將樣品溶解在流動(dòng)相或極性相近的溶劑中。如果使用梯度洗脫,則需要將樣品溶解在初始流動(dòng)相或極性相近的溶劑中。

樣品溶液不應(yīng)含有任何顆粒物,使用 0.5μm 或更小粒徑的濾膜過(guò)濾。同時(shí)建議在色譜系統(tǒng)中使用在線過(guò)濾器。

樣品溶液如果使用強(qiáng)溶劑(例如,流動(dòng)相為水,樣品溶劑為甲醇),為達(dá)到較好峰形,需要降低進(jìn)樣量(以 250x4.6mm 規(guī)格為例,小于 10μL)。

 

6、 流動(dòng)相

   所有流動(dòng)相,特別是含有緩沖鹽的流動(dòng)相,當(dāng)日實(shí)驗(yàn)當(dāng)日配制;如果使用了前日配制的流動(dòng)相,請(qǐng)確保流動(dòng)相 pH 值沒(méi)有變化,并確保流動(dòng)相沒(méi)有長(zhǎng)菌。

   流動(dòng)相的 pH 值取決于您的應(yīng)用和色譜柱填料類(lèi)型。我們建議在所有的色譜柱上都僅使用 pH 范圍為 2~8 的流動(dòng)相(Hypercarb 可以使用 pH 為 1~14 的流動(dòng)相);如果需要使用pH 更高(2~10)的流動(dòng)相,請(qǐng)選用 Hypersil GOLD、Syncronis C18、Betasil C18 等色譜柱,并請(qǐng)盡量避免使用無(wú)機(jī)緩沖鹽。

請(qǐng)盡量避免在常規(guī)流動(dòng)相中使用很高比例的水(>95%)作為流動(dòng)相,此類(lèi)流動(dòng)相僅適用于中等疏水的鍵合相,例如 Hypersil GOLD aQ、Aquasil C18、Syncronis aQ 等色譜柱。

所有流動(dòng)相都需使用 2μm 濾膜過(guò)濾。

 

7、 色譜柱安裝

請(qǐng)小心操作色譜柱。

不要摔、碰色譜柱,這樣會(huì)損壞色譜柱床,使色譜柱性能下降。

使用合適的連接管路和接頭,確保色譜柱連接處死體積降到zui低(使用不銹鋼接頭時(shí)需要尤其注意)。我們建議使用SLIPFREE 接頭,此接頭與Thermo色譜柱以及其他品牌色譜柱均匹配。

 

8、 色譜柱平衡

在進(jìn)行分析之前,請(qǐng)使用至少 20 倍柱體積的流動(dòng)相沖洗色譜柱,以使色譜柱達(dá)到平衡。

 

9、 色譜柱保護(hù)

    對(duì)于“臟”的樣品以及組分未知的樣品,請(qǐng)盡量使用在線濾器或保護(hù)柱,如果可能,使用 SPE 小柱對(duì)樣品進(jìn)行前處理是更好的選擇。上述做法可以有效延長(zhǎng)色譜柱使用壽命。

 

10、 色譜柱清洗

常規(guī)清洗:

在儲(chǔ)存色譜柱之前,請(qǐng)使用至少 20 倍柱體積的不帶緩沖鹽的流動(dòng)相沖洗色譜柱(去除緩沖鹽),再用更強(qiáng)的溶劑沖洗色譜柱(去除強(qiáng)保留成分,反相色譜通常使用甲醇或乙腈),然后使用合適的溶劑儲(chǔ)存色譜柱。

清洗強(qiáng)保留污染物:

使用如下試劑依次清洗色譜柱

20 倍柱體積不帶緩沖鹽的流動(dòng)相;

20 倍柱體積甲醇或乙腈;

20 倍柱體積異丙醇;

20 倍柱體積正己烷或氯仿;

20 倍柱體積異丙醇;

20 倍柱體積甲醇或乙腈。

 

11、 色譜柱保存

    反相色譜柱,保存溶劑通常是含至少 30% 有機(jī)相的水溶液,也可在常規(guī)清洗后直接保存在有機(jī)相中。

    如果需要長(zhǎng)時(shí)間儲(chǔ)藏,則需要使用較高比例的有機(jī)相(有機(jī)相比例至少大于 50%,但不建議使用純有機(jī)相)。

 

 

 

注意:如果違反上述規(guī)程,可能使色譜柱失去保修。

 

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