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植物赤霉素（GA）酶聯(lián)免疫分析（ELISA）
試劑盒使用說(shuō)明書(shū)
本試劑僅供研究使用              目的：本試劑盒用于測(cè)定植物組織，細(xì)胞及其
它相關(guān)樣本中植物赤霉素（GA）含量。
實(shí)驗(yàn)原理：
    本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中植物赤霉素（GA）水平。用純化的植物赤霉素（GA）
抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入植物赤霉素（GA）抗原，再
與 HRP 標(biāo)記的赤霉素（GA）抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過(guò)*洗滌后加
底物TMB顯色。 TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。
顏色的深淺和樣品中的赤霉素（GA）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在 450nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD
值），通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中植物赤霉素（GA）濃度。
試劑盒組成：
試劑盒組成 48 孔配置 96 孔配置 保存
說(shuō)明書(shū) 1 份 1 份
封板膜 2 片（48） 2 片（96）
密封袋 1 個(gè) 1 個(gè)
酶標(biāo)包被板 1×48 1×96 2-8℃保存
標(biāo)準(zhǔn)品：135pmol/L 0.5ml×1 瓶 0.5ml×1 瓶 2-8℃保存
標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 1.5ml×1 瓶 1.5ml×1 瓶 2-8℃保存
酶標(biāo)試劑 3 ml×1 瓶 6 ml×1 瓶 2-8℃保存
樣品稀釋液 3 ml×1 瓶 6 ml×1 瓶 2-8℃保存
顯色劑A 液 3 ml×1 瓶 6 ml×1 瓶 2-8℃保存
顯色劑B液 3 ml×1 瓶 6 ml×1 瓶 2-8℃保存
終止液 3ml×1 瓶 6ml×1 瓶 2-8℃保存
濃縮洗滌液 （20ml×20 倍）×1 瓶 （20ml×30 倍）×1 瓶 2-8℃保存
標(biāo)本要求：
1．標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能
馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融
2．不能檢測(cè)含NaN3的樣品，因 NaN3抑制辣根過(guò)氧化物酶的（HRP）活性。
操作步驟：
1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋與加樣：在酶標(biāo)包被板上設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品孔 10 孔，在*、第二孔中分別加標(biāo)
準(zhǔn)品 100μl，然后在*、第二孔中加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混勻；然后從*孔、第二
孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，2
混勻；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉，再各取50μl分別加到第五、第六孔
中，再在第五、第六孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50ul，混勻；混勻后從第五、第六孔中各
取 50μl 分別加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 50μl，混
勻后從第七、第八孔中分別取 50μl 加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分別加標(biāo)準(zhǔn)
品稀釋液50μl，混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。（稀釋后各孔加樣量都為50μl，
濃度分別為90pmol/L，60pmol/L，30pmol/L，15pmol/L ，7.5pmol/L）。
2. 加樣：分別設(shè)空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、待測(cè)樣
品孔。在酶標(biāo)包被板上待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測(cè)樣品10μl（樣
品zui終稀釋度為 5 倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混
勻。
3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30 分鐘。
4. 配液：將 30（48T的 20倍）倍濃縮洗滌液用蒸餾水30（48T的 20倍）倍稀釋后備用。
5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒后棄去，如此
重復(fù) 5次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。
7. 溫育：操作同 3。
8. 洗滌：操作同 5。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑 A50μl，再加入顯色劑 B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色
15 分鐘.
10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。
11. 測(cè)定：以空白空調(diào)零，450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（OD值）。 測(cè)定應(yīng)在加終止
液后 15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
注意事項(xiàng)：
1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開(kāi)封后如未
用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
2．濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗滌時(shí)不影響結(jié)果。
3．各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性，以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間
控制在5 分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。
4．請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線，做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過(guò)高（樣本OD值
大于標(biāo)準(zhǔn)品孔*孔的OD值），請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n 倍）后再測(cè)定，計(jì)
算時(shí)請(qǐng)zui后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。
5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6．底物請(qǐng)避光保存。
7．嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)的操作進(jìn)行，試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).
8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
9．本試劑不同批號(hào)組分不得混用。
10.  如與英文說(shuō)明書(shū)有異，以英文說(shuō)明書(shū)為準(zhǔn)。3
計(jì)算：
以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)，      
在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品的OD          
值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋        
倍數(shù)；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)        
準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值        
代入方程式，計(jì)算出樣品濃度，再乘以稀釋        
倍數(shù)，即為樣品的實(shí)際濃度。                                
  
                                                                                          
（此圖僅供參考）
試劑盒性能：
1.樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.95以上。
2.批內(nèi)與批見(jiàn)應(yīng)分別小于9%和 11%
檢測(cè)范圍：                                                                                          
3pmol/L -100pmol/L                                                                              
                                                      
保存條件及有效期：
1.試劑盒保存：；2-8℃。
2．有效期：6個(gè)月4
Plant   Gibberellic Acid
FOR RESEARCH USE ONLY
Drug Names
Generic Name：Plant Gibberellic Acid （GA） ELISA Kit.
Purpose
This kit allows  for  the determination of GA concentrations  in Plant tissue  ,cell and other
samples.
Principle of the assay
The  kit  assay  Plant GA level  in  the  sample，use  Purified  Plant GA antibody  to  coat
microtiter plate wells, make solid-phase antibody, then add GA to wells, Combined GA antibody
which  With  HRP  labeled  , become  antibody  -  antigen  -  enzyme-antibody  complex,  after
washing Compley, Add TMB substrate solution,TMB substrate becomes blue color At HRP
enzyme-catalyzed, reaction  is  terminated by  the addition of a sulphuric acid solution and  the
color  change  is  measured  spectrophotometrically  at  a  wavelength  of  450  nm.  The
concentration of GA in the samples is then determined by comparing the O.D. of the samples to
the standard curve.
RD5
Materials provided with the kit
Materials provided with
the kit
48determinations 96 determinations Storage
User manual 1 1
Closure plate
membrane
2 2
Sealed bags 1 1
Microelisa stripplate 1 1 2-8℃
Standard：135pmol/L 0.5ml× 1 bottle 0.5ml× 1 bottle 2-8℃
Standard diluent 1.5ml× 1 bottle 1.5ml× 1 bottle 2-8℃
HRP-Conjugate reagent 3ml× 1 bottle 6ml× 1 bottle 2-8℃
Sample diluent 3ml× 1 bottle 6ml× 1 bottle 2-8℃
Chromogen Solution A 3ml× 1 bottle 6ml× 1 bottle 2-8℃
Chromogen Solution B 3ml× 1 bottle 6ml× 1 bottle 2-8℃
Stop Solution 3ml× 1 bottle 6ml× 1 bottle 2-8℃
wash    solution
（20ml×20 fold）
×1bottle
（20ml×30 fold）
×1bottle
2-8℃
Specimen requirements
1. extract as  soon  as  possible  after  Specimen  collection,and according  to  the  relevant
literature,  and  should  be  experiment  as  soon  as  possible  after  the  extraction.  If  it  can’t,
specimen can be kept in -20 ℃ to preserve, Avoid repeated freeze-thaw cycles.
2. Can’t detect the sample which contain NaN3, because NaN3 inhibits HRP active.
Assay procedure
1.Dilute and add sample  to Standard: set 10 Standard wells on  the ELISA plates coated, add
Standard 100μl to the first and the second well, then add Standard dilution 50μl to the first and
the second well, mix; take out 100μl form the first and the second well then add it to the third
and  the  forth  well  separay.  then  add  Standard  dilution 50μl  to  the  third  and  the  forth
well ,mix ; then take out 50μl from the third and the forth well discard, add 50μl to the fifth and
the sixth well ,then add Standard dilution 50μl to the fifth and the sixth well, mix ; take out 50μl
from the fifth and the sixth well and add to the seventh and the eighth well, then add Standard
dilution 50μl to the seventh and the eighth well ,mix ; take out 50μl from the seventh and the 6
eighth well and add to the ninth and the tenth well, add Standard dilution 50μl to the ninth and
the tenth well, mix , take out 50μl from the ninth and the tenth well discard（add Sample 50μl to
each well after Diluting ,（density: 90pmol/L，60pmol/L，30pmol/L，15pmol/L ，7.5pmol/L）
2.add  sample：Set  blank  wells  separay  （blank  comparison  wells  don’t  add  sample  and
HRP-Conjugate reagent, other each step operation is same）. testing sample well. add Sample
dilution  40μl  to  testing  sample  well,  then  add  testing  sample  10μl  （sample  final  dilution  is
5-fold）, add sample to wells , don’t touch the well wall as far as possible, and Gently mix.
3.Incubate: After closing plate with Closure plate membrane ,incubate for 30 min at 37℃.
4.Configurate  liquid: 30-fold （or 20-fold）wash  solution diluted 30-fold （or 20-fold） with distilled
water and reserve.
5.washing：Uncover Closure plate membrane, discard Liquid, dry by swing, add washing buffer
to every well, still for 30s then drain, repeat 5 times, dry by pat.
6.add enzyme：Add HRP-Conjugate reagent 50μl to each well, except   blank well.
7.incubate：Operation with 3.
8.washing：Operation with 5.
9.color：Add Chromogen Solution A 50ul and Chromogen Solution B  to each well, evade  the
light preservation for 15 min at 37℃
10.Stop  the  reaction：Add Stop  Solution50μl  to  each well,  Stop  the  reaction（the  blue  color
change to yellow color）.
11.assay：take blank well as zero , Read absorbance at 450nm after Adding Stop Solution and
within 15min.
Important notes
1. The kit  takes out  from  the  refrigeration environment should be balanced 15-30 minutes  in
the room temperature, ELISA plates coated if has not use up after opened, the plate should
be stored in Sealed bag.
2. washing  buffer will Crystallization  separation,  it  can  be  heated  the  water  helps  dissolve
when dilute . Washing does not affect the result.
3. add  Sample  with  sampler  Each  step,  And  proofread  its  accuracy  frequently,  avoids  the 7
experimental  error.  add  sample  within  5  mins,  if  the  number  of  sample  is  much  ,
recommend to use Volley .
4. if the testing material content is excessively higher （The sample OD is bigger than the first
standard well ）,please dilute Sample （n-fold）, Please diluente and multiplied by the dilution
factor.（× n× 5）.
5. Closure plate membrane only limits the disposable use, to avoid cross-contamination.
6. The substrate evade the light preservation.
7. Please  according  to  use  instruction  strictly,  The  test  result  determination must  take  the
microtiter plate reader as a standard.
8. All samples, washing buffer and each kind of  reject should according  to  infective material
process.
9. Do not mix reagents with those from other lots.
Calculate
Assay range
3pmol/L -100pmol/L
Storage and validity
Take  the  standard  density  as  the  horizontal,  the  OD
value  for  the  vertical  ,draw  the  standard  curve  on  graph
paper, Find out  the  corresponding density according  to  the
sample  OD  value  by  the  Sample  curve,  multiplied  by  the
dilution  multiple,  or  calculate  the  straight  line  regression
equation of the standard curve with the standard density and
the  OD  value  ,with  the  sample  OD  value  in  the  equation,
calculate the sample density, multiplied by the dilution factor,
the result is the sample actual density.
This chartis for reference only8
1．Storage：    2-8℃.
2．validity：  six months.