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為什么有的試劑盒是采用競爭ELISA法?

來源:上海勁馬實驗設(shè)備有限公司   2015年08月17日 09:27  

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根據(jù)我司資深技術(shù)分析:小分子抗原或半抗原因為缺乏可作夾心法的兩個以上的位點,因此不能用雙抗體夾心法進行測定,可以采用競爭法。其原理是標(biāo)本中的抗原和固相載體上的抗原競爭生物素化抗體上的結(jié)合位點,標(biāo)本中抗原量含量愈多,結(jié)合在固相上的生物素化抗體愈少,zui后的顯色也愈淺,即顯色深淺與樣本中的抗原濃度成反比。小分子激素、藥物等ELISA測定多用此法。ELISA可用于測定抗原,也可用于測定抗體。在這種測定方法中有三個必要的試劑:

(1)固相的抗菌素原或抗體,即"免疫吸附劑"(immunosorbent);

(2)酶標(biāo)記的抗原或抗體,稱為"結(jié)合物"(conjugate);

(3)酶反應(yīng)的底物。根據(jù)試劑的來源和標(biāo)本的情況以及檢測的具體條件,可設(shè)計各種不同類型的檢測方法。用于臨床檢驗的ELISA主要有以下幾種類型:競爭法測抗體當(dāng)抗原材料中的干擾物質(zhì)不易除去,或不易得到足夠的純化抗原時,可用此法檢測特異性抗體。其原理為標(biāo)本中的抗體和一定量的酶標(biāo)抗體競爭與固相抗原結(jié)合。標(biāo)本中抗體量越多,結(jié)合在固相上的酶標(biāo)抗體愈少,因此陽性反應(yīng)呈色淺于陰性反應(yīng)。如抗原為高純度的,可直接包被固相。如抗原中會有干擾物質(zhì),直接包被不易成功,可采用捕獲包被法,即先包被與固相抗原相應(yīng)的抗體,然后加入抗原,形成固相抗原。洗滌除去抗原中的雜質(zhì),然后再加標(biāo)本和酶標(biāo)抗體進行競爭結(jié)合反應(yīng)。競爭法測抗體有多種模式,可將標(biāo)本和酶標(biāo)抗體與固相抗原競爭結(jié)合ELISA一般采用此法。另一種模式為將標(biāo)本與抗原一起加入到固相抗體中進行競爭結(jié)合,洗滌后再加入酶標(biāo)抗體,與結(jié)合在固相上的抗原反應(yīng)??笻Be的檢測一般采用此法。

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