在細胞代謝研究與臨床診斷領域，乳酸檢測扮演著關鍵角色。精準把握乳酸檢測工作原理，有助于科研人員與醫(yī)務工作者更好地運用相關技術。

樣本采集與前處理

乳酸檢測始于樣本采集。血液、組織勻漿、培養(yǎng)上清等常見樣本，各有其采集規(guī)范。以血液為例，需采用專用采血管，避免細胞代謝持續(xù)改變乳酸濃度。采集后，樣本需及時離心，分離出血清或血漿，此過程溫度控制至關重要，低溫環(huán)境可抑制細胞殘余活性，防止乳酸濃度在檢測前發(fā)生偏移。對于組織樣本，精確稱重后加入相應比例的預冷生理鹽水或磷酸鹽緩沖液，使用勻漿器充分研磨，制備成均勻懸液，隨后離心取上清，確保后續(xù)檢測體系均一性。

檢測反應體系構建

乳酸檢測試劑盒核心在于構建精準反應體系。體系中，乳酸氧化酶是關鍵酶。當樣本中乳酸與乳酸氧化酶接觸，氧化反應瞬間啟動。乳酸作為底物，被氧化生成丙酮酸，此過程伴隨電子轉移，產生過氧化氫。這看似簡單反應，實則對反應條件極為敏感。體系 pH 值需嚴格調控在 7.0 - 7.4 之間，偏離此范圍，乳酸氧化酶活性將呈拋物線式下降。溫度亦然，37℃是多數試劑盒設定的黃金溫區(qū)，溫度波動 ±2℃，酶促反應速率會偏離標準曲線 ±15%，直接干擾檢測結果準確性。

信號轉換與捕捉機制

生成的過氧化氫需轉化為可被儀器捕捉的信號?；谏孜镲@色法是經典途徑。過氧化氫在過氧化物酶催化下，將無色色原底物氧化為有色產物。此有色物質光吸收特性是定量關鍵。分光光度計登場，特定位點波長（多為 500 - 550nm）下，光束穿透反應溶液，部分光被有色分子吸收。儀器精準測量吸光度值，依據朗伯 - 比爾定律，吸光度與乳酸初始濃度呈線性關系，線性范圍 typically 在 0.1 - 10mmol/L，超出此區(qū)間，反應體系可能因底物過量或酶飽和，導致結果失真。

干擾因素排除策略

然而，生物樣本復雜性使檢測面臨干擾。內源性抗壞血酸、尿酸，外源性藥物酚類成分，均能模擬過氧化氫效應，造成吸光度虛高。優(yōu)秀試劑盒會添加特異性干擾抑制劑，如抗壞血酸氧化酶可特異性清除抗壞血酸，猶如為反應體系安裝精準 “過濾網”。同時，反應體系離子強度調節(jié)劑發(fā)揮作用，維持離子平衡，避免鈣、鎂離子與試劑成分形成絡合物，沉淀于反應容器壁，干擾光信號傳輸。

質控品全程監(jiān)控要點

為確保每批次檢測可靠性，質控品全程陪伴。低、中、高三個濃度質控品，分別代表臨床常見樣本濃度區(qū)間。檢測流程中，質控品與樣本同步經歷反應體系構建、信號轉換捕捉。其結果猶如檢測系統(tǒng)的 “健康報告”，若低濃度質控品偏差超 ±10%，提示試劑敏感性下滑；高濃度偏差超 ±8%，暗示酶活性或抗體結合力衰減，此時檢測數據需謹慎評估，及時追溯問題源頭，是儀器光路漂移，還是試劑儲存不當，都需排查。