腸產(chǎn)毒性大腸埃希氏菌（enterotoxigenic Escherichia coli）是2012年全國科學(xué)技術(shù)名詞審定委員會公布的微生物學(xué)名詞。產(chǎn)生熱穩(wěn)定毒素和(或)熱不穩(wěn)定毒素的大腸埃希氏菌。

一、菌種簡介

平臺編號：Bio-56937

規(guī)格：甘油/培養(yǎng)物

拉丁屬名：Escherichia Coli ETEC

中文名稱：腸產(chǎn)毒性大腸埃希氏菌

屬名：Escherichia

種名加詞：coli ETEC

其它中心編號：SCDC SH12E131

收藏時間：2013.4.15

原始編號：CN-3-349

模式菌株：非模式菌株

主要用途：研究

特征特性：革蘭氏陰性桿菌，在麥康凱培養(yǎng)基上生長成紅色菌落，菌落圓而突起，能發(fā)酵乳糖。其藥敏結(jié)果為對鏈霉素、甲氧芐啶、磺胺異噁唑和阿莫西林耐藥，對頭孢曲松、氯霉素、頭孢噻肟、左氧氟沙星、阿米卡星、慶大霉素、卡那霉素、氧氟沙星、四環(huán)素、氨芐霉素、萘啶酸及環(huán)丙沙星不耐藥。

生物危害程度：三類

致病對象：人

致病名稱：腹瀉

分離基物：腹瀉病例糞便標(biāo)本

基因元器件：耐熱腸毒素基因（ST）、不耐熱腸毒素基因

培養(yǎng)基：蛋白胨 5.0g，牛肉浸取物 3.0g，NaCl 5.0g，瓊脂 15.0g，蒸餾水 1.0L，pH7.0。[注] 培養(yǎng)芽孢桿菌時加入5mg MnSO4。H2O，則有利于產(chǎn)生芽孢。

培養(yǎng)溫度：37℃

資源保藏類型：培養(yǎng)物

保存方法：-80℃冰箱凍結(jié)法；真空冷凍干燥法

實(shí)物狀態(tài)：有實(shí)物

共享方式：公益性共享；資源純交易性共享；合作研究共享；資源交換性共享

用途：《GB 4789.6-2/16致瀉大腸埃希氏菌檢驗(yàn)》陽性對照菌株。

注意事項(xiàng)：僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的不可用于人類或動物的臨床診斷或治療，非藥用，非食用（產(chǎn)品信息以出庫為準(zhǔn)）

二、培養(yǎng)基

*營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基（NA）

*胰蛋白胨大豆瓊脂培養(yǎng)基（TSA）

*LB 培養(yǎng)基（以上三種任選一種即可）

三、培養(yǎng)方法

1、菌種是指食用菌菌絲體及其生長基質(zhì)組成的繁殖材料。菌種分為母種（一種）、原種（二種）和栽培種（三種）三。工業(yè)發(fā)酵的有用菌種，其篩選步驟包括菌種分離、初篩和復(fù)篩。

2、挑選具有某種能力的有用菌種，也稱種子制備，是指菌種在一定條件下，經(jīng)過擴(kuò)大培養(yǎng)成為具有一定數(shù)量和質(zhì)量的純生產(chǎn)菌種的制備過程。以作接入發(fā)酵罐中進(jìn)一步擴(kuò)大菌體量及合成產(chǎn)物之用。

3、種子制備包括孢子制備和菌絲體制備（見圖） 菌種制備 ，其中(1)～(4)為孢子制備過程。

4、保存在沙土管或冷凍管中的生產(chǎn)菌種，用無菌手續(xù)挑取少許，接入瓊脂斜面培養(yǎng)基上，在25℃（或較高溫度）下培養(yǎng)5～7天（或較長時間。所得孢子還需進(jìn)一步用較大表面積的固體培養(yǎng)基以獲得更多孢子（對于霉菌類孢子制備，多數(shù)采用大米、小米之類的天然培養(yǎng)基）。

5、將培養(yǎng)成熟的斜面孢子制成懸浮液，接種到扁瓶固體培養(yǎng)基上，于25～28℃培養(yǎng)14天。將成熟的扁瓶孢子于真空中抽干，使水分降至10%以下，并放入 4℃冰箱中備用。一次制得的孢子瓶可在生產(chǎn)上延續(xù)使用半年左右。

放線菌孢子的培養(yǎng)基大多是采用麩皮或豌豆浸出液及無機(jī)鹽與瓊脂制成的。將斜面孢子接入擴(kuò)大的扁瓶孢子培養(yǎng)基中,于28～37℃培養(yǎng)5～14天。所獲得的大量孢子可直接作為種子罐(6)的種子。

6、如果有些生產(chǎn)菌種不產(chǎn)孢子，如赤霉素產(chǎn)生菌或產(chǎn)孢子不多的，則可采用搖瓶(5)液體培養(yǎng)制得菌絲體，作種子罐的種子。種子罐的目的是使接入有限的孢子或菌絲體迅速發(fā)芽、生長、繁殖成大量菌體。其中的培養(yǎng)基組分應(yīng)是易于被菌體利用的碳源（如葡萄糖）和氮源（如玉米漿），及無機(jī)鹽(如磷酸鹽)等。作為發(fā)酵罐(7)的種子應(yīng)生命力旺盛、染色深、菌絲粗壯，無雜菌及異常菌體。接種量一般在10%～20%。

四、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容

1、稱量→溶化→調(diào)pH→過濾→分裝→加塞→包扎→滅菌→無菌檢查

2、干熱滅菌：裝入待滅菌物品→升溫→恒溫→降溫→開箱取物

3、高壓蒸汽滅菌：加水→裝物品→加蓋→加熱→排冷空氣→加壓→恒壓→降壓回零→排汽→取物→無菌檢查

4、過濾除菌：組裝滅菌→連接→壓濾→無菌檢查→清洗滅菌

五、保藏條件

安瓿凍干和培養(yǎng)物菌種應(yīng)在 2-8°C 保存。西林瓶請置于-20°C 保存，甘油管請置于-80°C保存;請勿長期置于室溫。

六、注意事項(xiàng)

1）凍干活化，干粉要全部用完，不能預(yù)留，用無菌吸管吸取 0.3ml 的培養(yǎng)液（即以上建議的培養(yǎng)基配方，不加瓊脂）或者無菌水，滴入凍干管中，輕輕振蕩至其溶解。吸取全部菌懸液，接種在培養(yǎng)基上（建議不超過 2 支斜面或平板；或直接接種液體培養(yǎng)基，以不超過 5ml 為宜）；

2）經(jīng)過冷凍干燥保藏，菌種處于休眠狀態(tài)，復(fù)蘇培養(yǎng)時可能會延遲生長，這時需較長的培養(yǎng)時間； 若您收到的是已復(fù)蘇的培養(yǎng)物（非凍干菌），則可以直接用于您的實(shí)驗(yàn)，或根據(jù)需要轉(zhuǎn)接培養(yǎng)；如有不明白之處，請務(wù)必先咨詢我單位技術(shù)人員，避免不必要的損失；二次接種量要多，固體斜面培養(yǎng)基水分要少才能讓菌體長得比較明顯，液體培養(yǎng)要靜止培養(yǎng)；

3）微生物菌種應(yīng)保藏于低溫、清潔干燥的地方，室溫放置時間過長會導(dǎo)致菌種衰退；

4）菌種操作應(yīng)在無菌條件下進(jìn)行；轉(zhuǎn)種完畢，應(yīng)經(jīng)滅菌再做丟棄處理；

5）應(yīng)根據(jù)菌種狀況及時轉(zhuǎn)接，凍干菌種保藏時間通常為 2-25 年；

6）菌種使用過程中如出現(xiàn)雜菌污染或菌種生產(chǎn)性能下降，應(yīng)及時和微生物菌種查詢網(wǎng)聯(lián)系；

7）如若有菌種復(fù)蘇不活或者污染等情況，請?jiān)谑盏骄N后 2 個月內(nèi)聯(lián)系，逾期不予受理；

8）打管操作需由專業(yè)微生物技術(shù)人員在相應(yīng)的防護(hù)設(shè)備中進(jìn)行，生物危害程度為三類的菌種應(yīng)在生物安全柜中操作，打管時凍干管應(yīng)遠(yuǎn)離面部，保護(hù)眼睛；

9）安瓿瓶開封：用浸過 75％酒精的脫脂棉擦凈安瓿管，用火焰加熱其頂端，滴少量（2-3滴）無菌水至加熱頂端使之破裂，用銼刀或者鑷子敲下已破裂的安瓿管頂端并將凍干管開口處在火焰上過一遍，并保持在火焰旁操作；

10）甘油管使用：使用本甘油菌時可以不用融解，在甘油菌表面蘸取少量涂板或進(jìn)行液體培養(yǎng)即可。也可以融解后使用，但隨著凍融次數(shù)的增加，細(xì)菌的活力會逐漸下降。

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