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腫瘤轉(zhuǎn)移是癌癥治療的最大挑戰(zhàn)之一，而細胞侵襲實驗是研究癌細胞遷移能力的“黃金標準”！如何利用基質(zhì)膠精準構(gòu)建體外侵襲模型？實驗關(guān)鍵步驟與試劑如何選擇？翌圣生物本期技術(shù)專欄為您揭曉答案！
細胞侵襲實驗通過模擬癌細胞穿透基底膜的過程，評估其遷移與侵襲能力，廣泛應用于抗腫瘤藥物篩選、轉(zhuǎn)移機制研究及靶向治療開發(fā)。實驗中，基質(zhì)膠（如翌圣生物Ceturegel®基質(zhì)膠）作為基底膜替代物，為細胞提供三維微環(huán)境，結(jié)合Transwell小室形成物理屏障，通過量化穿透基質(zhì)的細胞數(shù)評估侵襲性。
實驗優(yōu)勢：
? 高靈敏度：可檢測微量藥物對侵襲的抑制作用
? 可視化強：通過染色直接觀察侵襲細胞
? 適用性廣：支持多種腫瘤細胞
圖1.細胞侵襲實驗過程
首先將拿到的Ceturegel®基質(zhì)膠凍融后按照原液1:8稀釋（終濃度不要超過3 mg/mL）來包被Transwell小室底部膜的上室面，置37℃、30 min - 8 h使基質(zhì)膠聚合成凝膠，使用前用無血清培養(yǎng)基進行基底膜水化30 min。
將細胞饑餓12 - 24 h以去除血清的影響。
消化細胞，終止消化后離心棄去培養(yǎng)液并用PBS洗1 - 2次，用含無血清培養(yǎng)基重懸調(diào)整細胞密度至4×104~5×105個/mL 。。
取細胞懸液100 μL加入Transwell小室。
在24孔板下室加入600 μL含20%FBS培養(yǎng)基，添加時要避免下層培養(yǎng)液和小室間產(chǎn)生氣泡，產(chǎn)生氣泡易使下層培養(yǎng)液的趨化作用減弱甚至消失。
培養(yǎng)細胞:常規(guī)培養(yǎng)12 - 48 h(時間主要依癌細胞侵襲能力而定)。
取出Transwell小室，棄去孔中培養(yǎng)液，用不含鈣的PBS清洗2遍，4%多聚甲醛固定10 - 30 min，將小室適當風干。
使用0.1%結(jié)晶紫染色5 - 20 min，用棉簽輕輕擦掉上層未遷移細胞，用PBS洗3遍于顯微鏡下隨即5個視野觀察細胞，記數(shù)。
圖2.細胞侵襲后經(jīng)結(jié)晶紫染色的結(jié)果
細胞不轉(zhuǎn)移？
①細胞侵襲轉(zhuǎn)移能力比較弱。
②基質(zhì)膠濃度不佳鋪的太厚，需要做預實驗摸索。
③細胞給的量少可嘗試增加細胞數(shù)量。
④細胞沒有用PBS洗1-2 遍，用胰酶消化后，必須將含血清的培養(yǎng)基洗去。
⑤細胞的活性太差，活性不好的細胞做侵襲實驗難度較大。
染色后細胞分布不均一？
①小室未平衡放置于孔板中。
②細胞懸液加入時局部過多。
③小室有傾斜或晃動。
④小室本身滲透膜不平。
產(chǎn)品名稱 | 貨號 | 規(guī)格 |
Ceturegel® Matrix LDEV-Free基質(zhì)膠 | 40183ES | 1.5 mL/5 mL/10 mL |
PerfCell™ Trypsin (0.25%), phenol red胰酶溶液（0.25%），含酚紅 | 40126ES | 100 mL |
Fetal Bovine Serum Gold 胎牛血清(特級) | 40130ES | 50 mL/500 mL |
PBS(1×)細胞培養(yǎng)級 | 41403ES | 500 mL |
0.5%結(jié)晶紫染色液 Crystal Violet Stain Solution | 60506ES | 100 mL |
24孔細胞小室，PC膜，8μm，滅菌，TC處理 | 84052ES | 12個/板 |
24孔細胞小室，PET膜，8μm，滅菌，TC處理 | 84051ES | 12個/板 |
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