以下是使用奧林巴斯 SZ61 顯微鏡觀察小鼠解剖血管的方法:
1.觀察前準(zhǔn)備
樣品制備:將小鼠進(jìn)行解剖,暴露需要觀察的血管部位。為了更好地觀察血管結(jié)構(gòu),可以對(duì)血管進(jìn)行適當(dāng)?shù)奶幚?,如注射染料使血管顯色,或者進(jìn)行固定、切片等操作。如果是觀察血管切片,需將切片放置在載玻片上,并滴加適量的生理鹽水或封片劑,蓋上蓋玻片。
顯微鏡檢查與調(diào)節(jié):
打開電源:開啟顯微鏡主電源,通過亮度調(diào)節(jié)旋鈕將光源亮度調(diào)至合適水平,初始時(shí)可設(shè)置為較低亮度,后續(xù)根據(jù)觀察情況再進(jìn)行調(diào)整。
選擇照明模式:根據(jù)樣品的特點(diǎn)和觀察需求,選擇合適的照明模式,如明場模式適用于觀察一般的血管結(jié)構(gòu),暗場模式則可以突出血管的邊緣和細(xì)節(jié),對(duì)于觀察透明或折射率差異較小的血管組織可能更有幫助。
調(diào)節(jié)目鏡管:調(diào)節(jié)目鏡管的高度和視距,使兩只目鏡的像視距適合使用者的眼睛間距和視力。同時(shí),調(diào)整瞳孔間距,直到兩眼所觀察到的圖像重合。
2.觀察步驟
低倍鏡觀察:
放置樣品:將制備好的小鼠血管樣品放在載物臺(tái)上,用壓片夾固定好,確保樣品位于載物臺(tái)的中心位置,以便于觀察。
粗調(diào)焦:轉(zhuǎn)動(dòng)粗調(diào)焦旋鈕,快速大范圍地調(diào)節(jié)焦距,使樣品大致成像。在調(diào)節(jié)過程中,要從側(cè)面觀察物鏡與樣品之間的距離,防止物鏡碰撞到樣品。
找到目標(biāo):通過目鏡觀察,同時(shí)移動(dòng)載物臺(tái),找到需要觀察的血管區(qū)域。低倍鏡下可以先觀察血管的整體分布和大致形態(tài),確定感興趣的部位,以便進(jìn)一步在高倍鏡下觀察細(xì)節(jié)。
高倍鏡觀察:
1.切換物鏡:在低倍鏡下找到目標(biāo)后,根據(jù)需要轉(zhuǎn)動(dòng)變倍旋鈕,將放大倍數(shù)切換到合適的高倍鏡(如使用 10 倍目鏡時(shí),可將總放大倍數(shù)從低倍切換到 45 倍左右)。
微調(diào)焦:使用微調(diào)焦旋鈕進(jìn)行精細(xì)的焦距調(diào)整,直至血管的細(xì)節(jié)清晰成像。在高倍鏡下,可以觀察到血管的管壁結(jié)構(gòu)、內(nèi)皮細(xì)胞等更細(xì)微的特征。同時(shí),可根據(jù)觀察情況,適當(dāng)調(diào)整光源亮度和對(duì)比度,以獲得更好的觀察效果。
2.LV2000顯微鏡相機(jī)觀察與記錄:仔細(xì)觀察血管的形態(tài)、結(jié)構(gòu)和相關(guān)特征,如血管的管徑大小、管壁的厚度、血管內(nèi)的血液流動(dòng)情況(如果是新鮮樣品且條件允許的話)等??梢允褂美L圖或拍照的方式記錄觀察結(jié)果,以便后續(xù)分析和對(duì)比。如果顯微鏡配備了數(shù)碼攝像頭和成像軟件,可以通過軟件設(shè)置圖像的分辨率、色彩模式、對(duì)比度、亮度等參數(shù),然后進(jìn)行圖像采集和保存。
3.注意事項(xiàng)
避免鏡頭污染:在觀察過程中,要注意避免樣品上的液體或其他物質(zhì)污染鏡頭。如果不小心污染了鏡頭,應(yīng)及時(shí)用干凈的擦鏡紙輕輕擦拭,必要時(shí)可使用專門的鏡頭清潔液,但要注意使用方法,避免損壞鏡頭。
防止樣品干燥:如果觀察的是新鮮的小鼠血管樣品,要注意保持樣品的濕潤,防止其干燥??梢栽谟^察過程中適時(shí)滴加生理鹽水或其他合適的保濕液。
4.小心操作:在調(diào)節(jié)焦距和移動(dòng)載物臺(tái)時(shí),要?jiǎng)幼鬏p柔,避免劇烈震動(dòng)或碰撞,以免損壞樣品或顯微鏡部件。
注意生物安全:小鼠解剖過程中要遵循生物安全規(guī)范,對(duì)使用過的器械和樣品進(jìn)行妥善處理,防止生物污染。觀察完畢后,關(guān)閉電源,及時(shí)清理載物臺(tái)和顯微鏡表面,保持顯微鏡的清潔。
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