DNS試劑(NY/T法)

產(chǎn)品貨號(hào)：T16465

產(chǎn)品規(guī)格：100ml/500ml

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

植物體內(nèi)的碳素營(yíng)養(yǎng)狀況以及農(nóng)產(chǎn)品的品質(zhì)形狀，常以糖含量作為重要指標(biāo)。單糖和某些寡糖(如麥芽糖)含有游離的醛基或酮基，具有還原性，屬于還原糖；多糖和蔗糖等屬于非還原糖，可以利用多糖能被酸水解為單糖的特性通過(guò)測(cè)定水解后的單糖含量對(duì)總糖進(jìn)行測(cè)定。

DNS試劑(NY/T法)是植物總糖和還原糖檢測(cè)(硝基水楊酸法)的成分之一，其檢測(cè)原理是還原糖在堿性條件下被氧化成糖酸，3,5-二硝基水楊酸被還原為棕紅色的氨基化合物，在一定范圍內(nèi)還原糖的量與棕紅色產(chǎn)物的顏色深淺程度呈一定比例關(guān)系，在540nm處測(cè)定棕紅色物質(zhì)的吸光度，該吸光度值與還原糖含量呈線性關(guān)系，利用比色法和標(biāo)準(zhǔn)曲線測(cè)得樣品中的還原糖和總糖的含量。本試劑僅用于科研領(lǐng)域，不宜用于臨床診斷或其他用途。 

試劑包裝：

自備材料：

1. 蒸餾水

2. 50ml離心管

3. 離心機(jī)

4. 水浴鍋或恒溫箱

5. 分光光度計(jì)

6. 鹽酸溶液、氫氧化鈉溶液

操作步驟(僅供參考)：

1.  還原糖的提?。?/span>

①稱(chēng)取植物樣品0.5~3g，剪碎，加入蒸餾水約3ml勻漿，轉(zhuǎn)移至燒杯或三角瓶中，用12ml蒸餾水沖洗研磨器2~3次，洗出液也轉(zhuǎn)移至該容器。

②50℃水浴30min，并不時(shí)攪拌，以便還原糖浸出。

③將沉淀和浸出液轉(zhuǎn)移至50ml離心管，4000g離心5min。

④留取上清液，向沉淀中加入20ml蒸餾水，混勻，再次4000g離心5min。

⑤留取上清液，將2次獲得的上清液合并，用蒸餾水定容至100 ml(提取液)，混勻，作為還原糖待測(cè)液。

2.  總糖的水解和提?。?/span>

①稱(chēng)取植物樣品0.5~3g，剪碎，加入蒸餾水約3ml勻漿，轉(zhuǎn)移至燒杯或三角瓶中，用12ml蒸餾水沖洗研磨器2~3次，洗出液也轉(zhuǎn)移至該容器。

②向容器中加入10ml 6M鹽酸溶液，攪拌均勻，煮沸30min，并不時(shí)攪拌。

③取2滴滴加于載玻片上，滴加1滴顯色液，檢查水解是否，如已經(jīng)水解則不顯示藍(lán)色。

④水解完畢后，冷卻至室溫，加入6M氫氧化鈉溶液，使溶液pH至7.4左右，用蒸餾水定容至100 ml，混勻，4000g 離心5min或過(guò)濾，獲得上清或?yàn)V液。

⑤取上清或?yàn)V液10ml，用蒸餾水定容至100ml，成稀釋10倍的總糖水解液(提取液)，取1ml總糖水解液，測(cè)定其還原糖的含量。

3.  制作葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線：取干凈離心管或試管，按下表進(jìn)行操作，以0號(hào)調(diào)零，檢測(cè)540nm處吸光度，以吸光度為縱坐標(biāo)，各標(biāo)準(zhǔn)濃度( m g/ ml)為橫坐標(biāo)作圖得標(biāo)準(zhǔn)曲線。

4.  還原糖測(cè)定：取制備好的還原糖提取液或者總糖水解液1ml，分別加入DNS試劑2ml，其余操作同標(biāo)準(zhǔn)曲線的操作，540nm處測(cè)定各管的吸光度。

計(jì)算：

還原糖的百分含量：

還原糖含量( %) =(C×V_T)/(m×V_s)×100

總糖的百分含量：

總糖含量( %) =(C×V_T)/( m×V_s)×100×10×0.9

式中：C=從標(biāo)準(zhǔn)曲線查的糖量( mg)

V_T =提取液的體積( ml)

m =植物樣品的質(zhì)量( mg)

V_s=測(cè)定時(shí)用的樣品體積(ml)

注意事項(xiàng)：

1. 該試劑避免反復(fù)凍融，以免失效或效率下降，盡量避光保存。

2. 稀釋鹽酸和氫氧化鈉溶液時(shí)，應(yīng)小心操作，避免傷人。

3. 一般市售的濃鹽酸摩爾數(shù)約為11.6M，應(yīng)稀釋至6M后使用。

4. 待測(cè)樣本如不能及時(shí)測(cè)定，應(yīng)置于2 ~8℃保存，3天內(nèi)穩(wěn)定。

5. 如果樣品還原糖濃度過(guò)高，應(yīng)用蒸餾水稀釋后重測(cè)，結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)。

6. 總糖計(jì)算公式在測(cè)定干擾雜質(zhì)很少、還原糖含量相對(duì)總糖含量很少時(shí)使用，×0.9是為了從測(cè)定出的總糖水解成單糖中，扣除水解時(shí)所消耗的水量。

有效期： 12個(gè)月有效。室溫運(yùn)輸，4℃保存。