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細(xì)胞培養(yǎng)基的生產(chǎn)和發(fā)酵過程及細(xì)菌耐熱菌污染控制策略!

來源:北京百歐博偉生物技術(shù)有限公司   2025年04月30日 16:31  

百歐博偉生物:培養(yǎng)基一個(gè)醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)極為重要和廣泛的生產(chǎn)物資,是一些生物藥品的生產(chǎn)、實(shí)驗(yàn)室運(yùn)行的基礎(chǔ)性物資,細(xì)胞培養(yǎng)、微生物培養(yǎng)都要用到培養(yǎng)基。

 

一、微生物培養(yǎng)基的定義

 

培養(yǎng)基是指使用手動(dòng)方法生產(chǎn)的混合營養(yǎng)產(chǎn)品,用于微生物培養(yǎng)、分離、鑒定、研究和保存。微生物的生長繁殖需要一定的營養(yǎng)物質(zhì)和適宜的環(huán)境條件。在人類開發(fā)、生產(chǎn)和疾病防治過程中,為了控制和利用微生物,對天然或純化的營養(yǎng)物質(zhì)和適宜的滲透壓、pH值等進(jìn)行加工,生產(chǎn)出不同營養(yǎng)需求的營養(yǎng)基質(zhì),在人工條件下培養(yǎng)和使用微生物。這類人工培養(yǎng)的微生物(細(xì)菌、真菌、病毒等)具有多種用于各種目的的營養(yǎng)制劑,如微生物生長、繁殖或分離鑒定等,俗稱微生物培養(yǎng)基。研究培養(yǎng)基成分、制備方法、儲(chǔ)存條件、培養(yǎng)原理、質(zhì)量控制和影響評估、原材料生產(chǎn)和應(yīng)用等一系列主題的科學(xué)被稱為培養(yǎng)基科學(xué)。

 

二、微生物培養(yǎng)基分類

 

微生物培養(yǎng)基按培養(yǎng)基成分可分為合成培養(yǎng)基、天然培養(yǎng)基和半合成培養(yǎng)基三類;按物理狀態(tài)可分為固體培養(yǎng)基、液體培養(yǎng)基和半固體培養(yǎng)基;按微生物的種類分為細(xì)菌培養(yǎng)基、放線菌培養(yǎng)基、酵母菌培養(yǎng)基和霉菌培養(yǎng)基;按特殊用途分為基礎(chǔ)培養(yǎng)基、加富培養(yǎng)基、選擇性培養(yǎng)基和鑒別培養(yǎng)基。

 

培養(yǎng)基滅菌大多數(shù)用濕熱滅菌。

 

講解一下微生物培養(yǎng)基的滅菌方法:

 

1、干熱滅菌法(即熱空氣滅菌法)

 

干熱滅菌一般是利用電熱烘箱作為干熱滅菌器。前面所包裝好的玻璃器皿,如帶棉塞的三角瓶、試管、包裝好的吸管、培養(yǎng)皿等,放入電熱烘箱中。打開烘箱頂部的通氣孔,接上電源加熱,使箱內(nèi)空氣的溫度達(dá)到160℃-170℃,關(guān)閉通氣孔使箱內(nèi)的溫度保持在160℃左右并維持1.5-2h。時(shí)間一到,切斷電源;待溫度下降60℃-70℃以下,方可打開箱門取滅菌物品,否則驟冷后易使箱內(nèi)玻璃儀器破損。

 

2、加壓蒸汽滅菌法

 

利用高壓滅菌器,使水的沸點(diǎn)在密閉的滅菌器內(nèi)隨壓力升高而增高,來提高蒸汽的溫度和滅菌的效率。在同一溫度下濕熱的殺菌效率比干熱大,因?yàn)槲⑸锛?xì)胞蛋白質(zhì)在濕熱情況下,易干凝固,同時(shí)濕熱的穿透力強(qiáng),當(dāng)水蒸氣與被滅菌的物品相接觸后,便放出汽化潛熱,逐步提高被滅菌物品的溫度,直至與水蒸汽的溫度相等,達(dá)到平衡為止,從而提高滅菌效率。

 

3、濕熱滅菌

 

滅菌原理是直接用蒸汽滅菌,蒸汽在冷凝時(shí)能釋放出大量潛熱,蒸汽具有強(qiáng)大的穿透力,破壞菌體蛋白和核酸的化學(xué)鍵,使酶失活,微生物因代謝障礙而死亡。水煮常壓滅菌:100℃。或飽和蒸汽滅菌:一般121℃,30分鐘。適合培養(yǎng)基和發(fā)酵設(shè)備滅菌。尤其是對芽孢、霉菌等高抗性微生物的控制——濕熱滅菌也不能保障的滅菌成功,滅菌后有可能還會(huì)存在芽孢等高抗性微生物的存留,容易導(dǎo)致內(nèi)毒素污染。

 

4、紫外線滅菌

 

波長260-280nm之間的紫外線有很強(qiáng)的殺菌能力,一般紫外燈管能產(chǎn)生253.7nm的紫外光,殺死力強(qiáng)而穩(wěn)定,但穿透力弱一般只適宜物體表面、空氣滅菌。例如接種室、培養(yǎng)室、手術(shù)室、藥廠包裝室等空氣滅菌。一般30w燈管、9m3空間,距地面2m每次打開紫外線照射0.5h,就使室內(nèi)空氣滅菌。若照射紫外線時(shí),先噴灑石碳酸等化學(xué)消毒劑,可增強(qiáng)滅菌效果。

 

在進(jìn)行微生物接種和分離等操作時(shí),常須用紫外線來殺滅接種室(箱)空氣、臺(tái)面等處的微生物。

 

紫外線雖有較強(qiáng)的殺菌力,但穿透力較弱,即使一薄層玻璃或水層就能將大部分紫外線濾除,因此只適用于空氣及表面殺菌。紫外線對眼粘膜及視神經(jīng)有強(qiáng)烈的損傷作用,對皮膚有刺激作用,所以不能直接在紫外線燈開啟下工作和用眼睛直視開啟的紫外燈。

 

5、化學(xué)藥劑消毒滅菌

 

微生物實(shí)驗(yàn)室中常用的化學(xué)殺菌劑有溶液,它們有的是殺菌劑,有的是抑菌劑,

 

以上是微生物培養(yǎng)基的滅菌方法說明,如果你的培養(yǎng)基中所有的成分都可以耐高溫,那就用壓力蒸汽高溫滅菌的方式;如果你的培養(yǎng)基中有些成分不耐高溫,就可以用除菌過濾的方式除菌,用除菌濾器過濾培養(yǎng)基至已滅菌的培養(yǎng)器中。如果要求不高,部分試驗(yàn)用培養(yǎng)基,可以用煮沸的方式滅菌。

 

特別是在發(fā)酵過程中,培養(yǎng)基滅菌主要有以下幾個(gè)原因:如不滅菌,會(huì)使生物反應(yīng)的基質(zhì)或產(chǎn)物,因雜菌的消耗而損失,造成生產(chǎn)能力的下降;雜菌也會(huì)產(chǎn)生代謝產(chǎn)物,這就使產(chǎn)物的提取更加困難,造成得率降低,產(chǎn)品質(zhì)量下降;雜菌大量繁殖后,會(huì)改變反應(yīng)液的pH值,使反應(yīng)異常;有些雜菌會(huì)分解產(chǎn)物,使生產(chǎn)失敗;如果發(fā)生噬菌體污染,生產(chǎn)菌細(xì)胞將被裂解,使生產(chǎn)失敗。

 

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