熒光分光光度計通常由激發(fā)光源、單色器、樣品池和檢測器等部分組成。首先,激發(fā)光源發(fā)出紫外光或藍紫光,這些光經(jīng)過濾光片后照射到樣品池中。常用的激發(fā)光源包括高壓汞燈和氙燈,它們發(fā)出的光具有穩(wěn)定性和高強度,能確保測量的重復性和精確度。
在樣品池中,熒光物質吸收激發(fā)光后,從基態(tài)躍遷到激發(fā)態(tài)。這些處于激發(fā)態(tài)的分子是不穩(wěn)定的,會迅速返回基態(tài),并在這一過程中釋放出一部分能量,以光的形式表現(xiàn)出來,即產(chǎn)生熒光。不同物質由于其分子結構的不同,具有各自特別的激發(fā)態(tài)能級分布,因此它們的熒光激發(fā)和發(fā)射光譜也各不相同。
熒光物質發(fā)出的熒光經(jīng)過第二個單色器(熒光單色器)的濾過和選擇,只有特定波長的熒光能夠透過并被檢測器接收。單色器的作用在于去除不需要的光,以減少干擾,提高測量的準確性。
檢測器通常采用光電倍增管,它具有高靈敏度,能夠將接收到的熒光信號轉換成電信號,并進行放大。這些電信號隨后被記錄或顯示出來,形成熒光光譜圖或數(shù)字結果。
需要注意的是,熒光分光光度計所測得的譜圖通常為表觀光譜,即未經(jīng)過校正的光譜。在大多數(shù)情況下,這種表觀光譜并不影響測試結果。但在某些特定情況下,如測量熒光量子產(chǎn)率時,則需要采用經(jīng)過校正的真實光譜。
綜上所述,熒光分光光度計通過激發(fā)光源、單色器、樣品池和檢測器等部件的協(xié)同作用,實現(xiàn)了對熒光物質的定量分析和光譜掃描。
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