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熒光定量PCR儀是什么

來源:杭州浩邦生物科技有限公司   2024年09月23日 14:31  
  熒光定量PCR儀是一種先進的分子生物學(xué)實驗設(shè)備,它通過利用熒光信號來實時監(jiān)測和定量分析PCR(聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng))過程中特定基因或DNA片段的擴增情況。以下是對熒光定量PCR儀的詳細解析:
 
  定義與原理
 
  定義:熒光定量PCR儀是一種能夠?qū)崟r監(jiān)測PCR反應(yīng)過程中熒光信號變化的儀器,通過熒光染料或熒光標(biāo)記的特異性探針,對PCR產(chǎn)物進行標(biāo)記跟蹤,從而實現(xiàn)對目標(biāo)基因表達量的精確定量分析。
 
  原理:該技術(shù)基于PCR原理,通過在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團,利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進程。當(dāng)DNA模板在PCR過程中被擴增時,熒光基團標(biāo)記的引物或探針會隨DNA鏈的延伸而發(fā)出熒光信號。這些信號被儀器捕獲并轉(zhuǎn)化為數(shù)字信息,通過相應(yīng)的軟件處理,可以計算出目標(biāo)基因的拷貝數(shù)或表達量。
 
  工作流程
 
  熒光定量PCR儀的工作流程大致包括以下幾個步驟:
 
  樣本準(zhǔn)備:首先,需要從待測樣本中提取核酸(DNA或RNA),并進行必要的純化和反轉(zhuǎn)錄(如果檢測的是RNA)。
 
  PCR反應(yīng)體系配置:將提取的核酸、特異性引物、熒光染料或探針、PCR反應(yīng)緩沖液等組分按一定比例混合,形成PCR反應(yīng)體系。
 
  PCR擴增:將PCR反應(yīng)體系置于熒光定量PCR儀中,設(shè)定好反應(yīng)條件(如溫度循環(huán)程序)后啟動PCR擴增。在擴增過程中,儀器會實時監(jiān)測熒光信號的變化。
 
  數(shù)據(jù)分析:PCR擴增結(jié)束后,儀器會自動收集并處理熒光信號數(shù)據(jù),通過標(biāo)準(zhǔn)曲線或算法計算出目標(biāo)基因的拷貝數(shù)或表達量。
 
  應(yīng)用領(lǐng)域
 
  熒光定量PCR儀以其高靈敏度、高分辨率、快速和準(zhǔn)確等顯著優(yōu)勢,在多個領(lǐng)域得到了廣泛應(yīng)用:
 
  基礎(chǔ)科研:在基因表達分析和豐度檢測中發(fā)揮著重要作用,有助于理解基因功能、揭示生物體生長發(fā)育規(guī)律以及探索疾病發(fā)生機制。
 
  醫(yī)學(xué)檢測:作為病原體檢測和遺傳病篩查的重要手段,通過檢測血液、體液或組織樣本中的病原體DNA或RNA,可以快速準(zhǔn)確地診斷出感染性疾病或遺傳性疾病。
 
  食品安全:通過檢測食品中的致病菌和轉(zhuǎn)基因成分等有害物質(zhì),確保食品的安全性和合規(guī)性。
 
  農(nóng)業(yè)研究:在作物遺傳改良和品種鑒定中具有重要意義,通過檢測植物基因組中的突變和表達量變化,評估作物的生長發(fā)育情況和適應(yīng)性。
 
  綜上所述,熒光定量PCR儀是一種功能強大、應(yīng)用廣泛的分子生物學(xué)實驗設(shè)備,在科研、醫(yī)學(xué)、食品安全和農(nóng)業(yè)等多個領(lǐng)域都發(fā)揮著重要作用。

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