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熒光顯微鏡技術(shù)簡介
熒光顯微鏡是熒光顯微檢測的工具，它是光學(xué)顯微鏡的—種。除了具有光學(xué)顯微鏡的基本結(jié)構(gòu)和光學(xué)放大作用外，基于熒光的特性，還具備以下*的功能：①提供足夠能量的能激發(fā)出熒光的光源；②有著適應(yīng)不同物質(zhì)所博激發(fā)光涪的一組濾色片，從光源中選擇合適的激發(fā)光譜，使析出的光譜與該物質(zhì)的吸收光譜重合，以期望獲得zui大的熒光；③還要建立一套截止濾色片，它使所需觀察的熒光進(jìn)入系統(tǒng)成像，而將其余的光波，包括發(fā)射光阻擋在外，用來提高圖像的襯度；④放大的光學(xué)系統(tǒng)應(yīng)適應(yīng)熒光的特性，zui終獲得既能觀察又能攝影的高亮度、高分辨力的良好襯度的熒光圖像；⑤儀器的安全性。應(yīng)用汞燈要防止紫外線的泄漏和汞燈的爆炸，保證電器安全。
生物熒光顯微鏡基本形式有兩種：透射式和落射式。透射型雖然在低倍時(shí)能獲得良好的
高反差的成像，但與落射型相比熒光像較暗，故現(xiàn)在多使用落射型熒光顯微鏡。
熒光吊微鏡光源的選擇取決于所需檢測的熒光物質(zhì)的吸收光譜，熒光色素的平均吸收波長峰值從紫外（340 nm）到黃綠光（595nm）。具有這些光譜的強(qiáng)光源有超高壓汞燈、超高壓佩燈和大功率的鹵素?zé)簟?/span>
濾色片是熒光顯微鏡的關(guān)鍵部件，在熒光顯微鏡中按其功能可分為激發(fā)濾色片和截止濾色片兩類。
激發(fā)濾色片的功能是從光源中分析出所需的特定光譜，以激發(fā)標(biāo)本產(chǎn)生熒光。激發(fā)濾色片一般按激發(fā)光譜分為：紫外區(qū)（uv）波段在340—380 ；紫藍(lán)區(qū)（Y）波段在390—460nm；藍(lán)光區(qū)（B）波段在460—500 nm”；綠光區(qū)（G）波段在500—570 nm，黃光K（Y）波段在570—595nm；
截止濾色片的功能是僅把標(biāo)本上發(fā)出的熒光透過成像，而將其他光阻擋不參與成像，一般激發(fā)濾包片安置在緊靠光源處，而截止濾色片在物鏡與門鏡之間。
免疫熒光小應(yīng)用zui廣的熒光色素是FIFC，它的吸收波段為450—540 nm，峰值在490nm，發(fā)射光波在500—550 nm，峰值在520 nm附近，呈黃綠色，峰值間隔30 nm：當(dāng)選用短波通過十涉濾色片如KP90時(shí)．僅允許420—510 nm區(qū)域光透過，這種濾色片在透過區(qū)域內(nèi)有*的透射比（>80％）；在非透過區(qū)如>490 nm的長波透過率很低，因此能夠畝效地消除長波方面的雜散激發(fā)光。
本文章來自北京京百卓顯科技有限公司編輯部楊柏松 （專注顯微鏡www.bjmicro.com 禁止轉(zhuǎn)載）
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