耶拿高速PCR儀在單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組測(cè)序技術(shù)中的應(yīng)用

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什么是單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組測(cè)序

      單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組測(cè)序就是在單個(gè)細(xì)胞水平上對(duì)轉(zhuǎn)錄組進(jìn)行測(cè)序的技術(shù)，可以研究在單個(gè)細(xì)胞內(nèi)基因表達(dá)的情況。而傳統(tǒng)的測(cè)序技術(shù)，是在多細(xì)胞基礎(chǔ)上進(jìn)行的，得到的是多細(xì)胞中信號(hào)的均值，往往就會(huì)忽略了細(xì)胞的異質(zhì)性，會(huì)掩蓋細(xì)胞間差異性的信號(hào)（圖1）。而單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組測(cè)序技術(shù)則可以在單細(xì)胞水平上分析細(xì)胞內(nèi)群體異質(zhì)性，定義細(xì)胞類型，判斷細(xì)胞狀態(tài)以及細(xì)胞的動(dòng)態(tài)轉(zhuǎn)變，在當(dāng)下腫瘤方向研究、發(fā)育生物學(xué)、生物標(biāo)志物等研究領(lǐng)域都具有廣闊的應(yīng)用潛力。

圖1.單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組測(cè)序和傳統(tǒng)測(cè)序的區(qū)別（摘自網(wǎng)絡(luò)）

02

單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組測(cè)序技術(shù)流程

      以10x Genomics單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組測(cè)序技術(shù)為例，該技術(shù)流程可以簡(jiǎn)單總結(jié)為四個(gè)步驟，分別是：制備樣本，單細(xì)胞微滴（GEMs）生成，構(gòu)建文庫和測(cè)序以及分析（圖2）

圖2. 單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組測(cè)序技術(shù)流程

      其中，在逆轉(zhuǎn)錄、cDNA擴(kuò)增以及構(gòu)建文庫步驟中，PCR儀扮演著重要的角色，具體細(xì)分步驟可參考下圖（圖3），包括逆轉(zhuǎn)錄，cDNA擴(kuò)增，片段化、末端修復(fù)和加A尾，接頭連接以及文庫擴(kuò)增步驟：

圖3. 單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組測(cè)序中需要應(yīng)用PCR儀的步驟

       由于單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組測(cè)序在使用PCR儀的過程中涉及到大體積的體系構(gòu)建（100ul），對(duì)PCR儀加熱模塊的溫度均一性和精確度都有較高的性能要求，德國耶拿Biometra TAdvanced 96SG具有優(yōu)異的溫控系統(tǒng)，溫度準(zhǔn)確性達(dá)到±0.1℃，溫度均一性達(dá)到±0.15℃，適用于5-100ul反應(yīng)體系大小，是單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組測(cè)序流程中逆轉(zhuǎn)錄、cDNA擴(kuò)增和文庫構(gòu)建步驟中的得力助手，可以提供穩(wěn)定、可靠，更多符合下游測(cè)序要求的產(chǎn)物。

    值得一提的是，德國耶拿Biometra TAdvanced 96SG是10xGenomics單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組測(cè)序操作手冊(cè)中推薦使用的PCR儀之一（圖4），這也進(jìn)一步說明10xGenomics對(duì)Biometra TAdvanced 96SG性能的肯定。

圖4. 10xGenomics在單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組測(cè)序手冊(cè)中推薦了Analytikjena Jena的Biometra TAdvanced 96SG（摘自10xGenomics單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組測(cè)序操作手冊(cè)）